专利名称：油棕花粉超低温保存法的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种花粉保存方法，具体是一种油棕花粉超低温保存法。
背景技术：
油棕属多年生单子叶植物，是热带木本油料作物，其果肉、果仁含油丰富，有“世界 油王”之称，棕油主要用来制造肥皂、润滑油、化妆品等，也是纺织业、制革业、铁皮镀锡的辅 助剂等，棕油精炼后是营养价值极高的食用油脂，可制造人造奶油，具有较高的经济价值。 油棕是异花授粉植物，雌雄花序交替开放，通常靠风媒和虫媒授粉。授粉是影响油棕产量的 重要因素之一，主要表现在(1)授粉不足导致产量降低，特别是在幼龄油棕园；(2)油棕园 雄花数量以及雌雄花比例也影响油棕的授粉结实，特别是在雨季，风媒和虫媒授粉能力降 低，导致产量下降；(3)油棕园中其他昆虫如蜜蜂等的采集，导致花粉量大幅度减少，授粉 不足。因此，人工控制授粉是必要的，而采用保存的花粉用于人工控制授粉是克服油棕授粉 不足的主要措施之一，因为保存的花粉用于人工授粉不但可以保持产量而且在油棕杂交育 种工作中也是很重要的。花粉的长期保存技术不但是保存单倍体植物资源的有效方法，而且能够克服在育 种工作中存在的时空障碍。目前油棕花粉的长期保存方法主要有以下两种(一)是把真空干燥后的花粉(剩余含水量为3-4%)在低温下贮存(-10°C、-15°C 和-20°C )，贮存时间不超过1年。其主要缺点是贮存时间短；保存后的花粉萌发力低，结实 率差，正常胚的百分比低；干燥花粉在制备时其剩余含水量很难达到3-4%，且制备程序繁 琐；(二)是把干燥的花粉(剩余含水量为23. 3%)装入冷冻管中直接贮存在液氮中， 然后再将冷冻管放至冷冻库中(汽化液氮，-170°C -180°C)，贮存时间可达8年。其主要 缺点是花粉保存的成本太高。
发明内容
本发明的目的是提供一种油棕花粉超低温保存法，利用超低温条件下所有植物组 织的代谢活动停止的特性，在超低温下对油棕花粉进行保存，有效地使花粉的活性保持下 来，具有工艺简单、成本低、花粉萌发率高等特点。超低温保存已经成为一种花粉长期保存的有效方法，其关键在于降温过程中避免 花粉细胞内结冰，化冻过程中防止细胞内再次结冰。因此，花粉的剩余含水量是决定油棕花 粉超低温保存成败的关键。本发明所采用的技术方案一种油棕花粉超低温保存法，是将采集的新鲜油棕花粉用80 100目筛子过筛， 以去除其中杂质，然后用电热恒温鼓风干烘箱在37 40°C条件下连续干燥12小时以上， 使油棕花粉的剩余含水量为8 9% ；将干燥后的油棕花粉装入冷冻管中直接投入到液氮 (-170 -196°C)中预冻处理1 2小时，然后再移入到-70°C以下的超低温冰箱中保存，化冻时将超低温保存的油棕花粉用常温自来水冲洗0. 5 1分钟即可化冻。为了保持油棕花粉的新鲜度，新鲜花粉在短途运输(24小时以内)过程中采用塑 料封口袋携带，在长途运输(120小时以内)过程中采用冰盒(冰盒内装冰块，冷冻管装入 花粉后放入冰盒中)携带。本发明工艺简单，成本低，在控制花粉剩余含水量的前提下于超低温下对油棕花 粉进行保存，有效地实现油棕花粉的长期保存，具有保存成本低、贮存时间长、花粉萌发率
高等优点。
具体实施例方式以下对本发明的操作过程做进一步描述，并介绍本发明的相关研究结果。1、操作过程于晴天上午9-11时采集新鲜花粉，根据运输距离或时间长短，采用 冰盒或塑料封口袋装入花粉并带回试验室，新鲜花粉用80-100目筛子过筛去杂后，用量勺 量取过筛后的花粉倒入上述规格的筛子中，将花粉均勻地抖落在硫酸纸或垫有硫酸纸的培 养皿上，然后放入37-40°C的恒温干燥箱中干燥12小时以上，使花粉剩余含水量为8-9%， 将上述烘干干燥花粉(约0. 5克)装入2ml内螺纹冷冻管中，扭紧管盖后直接投入到液氮 中(-196°C)预冻处理1-2小时，然后将装有花粉的冷冻管移入超低温冰箱(-70°C以下) 中保存，保存3、6、12个月后，从超低温冰箱中取出并立即用常温自来水冲洗化冻0. 5-1分 钟。将化冻后的油棕花粉与滑石粉按1 10的比例混勻后直接用于油棕树的授粉，油棕果 实成熟后采果观测其果实性状和产量水平。2、结果分析1)、不同携带方式与花粉萌发率关系对需要长途或长时间进行花粉运输的，可采用冰盒进行携带，携带时间不宜超过 120小时；对短途或长时间运输的，可采用塑料封口袋携带，并在24小时内带回试验室进行 保存。所得结果列表如表1。表1不同携带方式与花粉萌发率关系 说明新鲜或烘干干燥花粉在花粉萌发培养基中培养1-2小时后，在电子显微镜 (目镜为8倍)下观测其萌发粒数，并计算萌发率，每个处理(培养基)观测3个显微镜视 野，每个视野200-350粒花粉。下同。2)、油棕花粉剩余含水量与其萌发率关系 新鲜花粉在37-40 °C条件下烘干干燥12小时，使其剩余含水量达8-9 %，即可用于 超低温保存，可大幅度提高花粉萌发率(见表2)，而未经干燥的新鲜花粉在预冻(液氮)处 理结束后其萌发率就已经大幅度下降。表2油棕花粉剩余含水量与其萌发率关系 说明(1)花粉干燥时间为12h ； (3)花粉含水量测定新鲜花粉在125°C连续干燥 至恒重含水量。3)、预冻处理(液氮)与花粉萌发率关系将干燥花粉装入2ml的内螺纹冷冻管中，扭紧管盖后直接投入到液氮中(_196°C ) 预冻处理1-2小时。液氮预冻处理1、2、24小时后，花粉仍保持较高的萌发率(结果见表 3)，其中以预处理2小时的最高。但不同液氮预处理之间无显著差异。表3预冻处理(液氮)与花粉萌发率关系 说明花粉烘干干燥温度为37°C，干燥时间为12h，花粉剩余含水量为8. 35%。4)、冷冻保存(-70°C )与花粉萌发率关系将预冻处理后的花粉移入到超低温冰箱(-70°C)中冷冻保存3、6、12个月，然后取 出并立即用常温自来水冲洗化冻0.5-1.0分钟(表5)。由表4可见，花粉萌发率随冷冻保 存时间的延长而略有下降，但仍然保持较高的萌发活力。
表4冷冻保存(_70°C )与花粉萌发率关系 说明(1)液氮预处理时间为2小时；⑵对照为新鲜花粉。5)、不同化冻方法与花粉萌发率关系新鲜花粉液氮预处理2小时后，取出并立即用常温自来水自来水冲洗化冻，由表5 可见，在4种化冻方式中(常温自来水、温水、冰水和室温放置(自然解冻))，以常温自来水 冲洗化冻0. 5-1分钟的花粉萌发率较高，其中化冻1分钟的最高。同时，试验也再次证明， 新鲜花粉由于含水量高(38.8% )，预冻处理后其萌发率大幅度下降。表5不同化冻方法与花粉萌发率关系 6)、超低温保存花粉大田应用效果评价将经超低温保存花粉与滑石粉按1 10的比例混勻后直接用于油棕树的授粉。由 表6可见，超低温保存花粉授粉后，与自然授粉相比，其授粉稔实率均达到100 %，但由于采 用人工授粉，果穗重、果穗粒数以及果实正常胚比例均要好于自然授粉结实。
表6超低温保存花粉大田应用效果评价 说明(1)花粉在37°C条件下连续烘干干燥12小时，液氮预冻2小时，常温自来水 化冻1分钟；(2)授粉处理均为单株单穗，对照为自然授粉。
权利要求
一种油棕花粉超低温保存法，其特征是将采集的新鲜油棕花粉用80～100目筛子过筛，以去除其中杂质，然后用电热恒温鼓风干烘箱在37～40℃条件下连续干燥12小时以上，使油棕花粉的剩余含水量为8～9％；将干燥后的油棕花粉装入冷冻管中直接投入到 170～ 196℃的液氮中预冻处理1～2小时，然后再移入到 70℃以下的超低温冰箱中保存；化冻时将超低温保存的油棕花粉用常温自来水冲洗0.5～1分钟即可化冻。
2.根据权利要求1所述的油棕花粉超低温保存法，其特征在于新鲜花粉在24小时以 内的短途运输过程中采用塑料封口袋携带，在120小时以内的长途运输过程中采用冰盒携市ο
全文摘要
本发明涉及一种油棕花粉超低温保存法，是将采集的新鲜油棕花粉经除杂质后进行干燥，使油棕花粉的剩余含水量为8～9％；将干燥后的油棕花粉装入冷冻管中直接投入到液氮中预冻处理，然后再移入到超低温冰箱中保存，化冻时将超低温保存的油棕花粉用常温自来水冲洗即可化冻。本发明工艺简单，成本低，在控制花粉剩余含水量的前提下于超低温下对油棕花粉进行保存，有效地实现油棕花粉的长期保存，具有保存成本低、贮存时间长、花粉萌发率高等优点。
文档编号A01N3/00GK101926323SQ20101024780
公开日2010年12月29日 申请日期2010年7月29日 优先权日2010年7月29日
发明者安锋, 尤丽莉, 张希财, 曾宪海, 林位夫, 王军, 谢贵水, 邹积鑫, 陈俊明 申请人:中国热带农业科学院橡胶研究所;海南大学