专利名称：一种微生物复合菌剂707及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物复合菌剂707及其制备方法与应用，属于植物生物调节剂 在农作物种植中应用的生物材料技术领域。
背景技术：
化肥的诞生在一定的时间里给农民带来了丰收的希望。然而长期使用化肥产生的 弊端随之而来，土地板结、化学元素残留、环境污染等等一系列问题浮出水面。化肥已经不 能满足可持续发展的需要，更不能成为绿色农业的支柱。随着科学的发展，微生物在农业中的作用渐渐显露出来。利用微生物制剂改良土 壤、降解化学残留、改善生态环境、作物增产、抑菌防病等，已经成为农业科学研究的热点。 微生物复合菌剂是发展“高产、优质、高效、生态、安全”农业的保证。
发明内容
本发明所要解决的问题是采用多种菌种制备复合菌剂，以及利用该复合菌剂制成 植物生物调节剂应用在农作物的种植中。充分利用菌种之间的相互作用，起到刺激植物生 长、缓解土地板结、改良土壤生态环境、防病抗病等作用，从而达到增产、高产的目的。本发明的技术解决方案如下一种微生物复合菌剂707采用枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtil is) ATCC No. 6633，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) ATCC No. 11946，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC No. 11011，产朊假丝酵母(Candida utilis) ATCC No. 22023，大豆根瘤菌(B. elkanii)ACCC No. 15067，胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)ACCC No. 10013，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No. 8014 作为制备菌种；所述菌种的质量百分比如下枯草芽孢杆菌45 55%、地衣芽孢杆菌5 10%、巨大芽孢杆菌5 10%、产朊假丝酵母5 10%、大豆根瘤菌5 10%、胶质芽孢杆 菌5 10%、植物乳杆菌5 10%。所述的一种微生物复合菌剂707的制备步骤如下1.接种将所述各菌种接于斜面培养基上；枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和巨大 芽孢杆菌为27 37°C，pH为6. 5 7. 5，培养时间为3 7天；产朊假丝酵母培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为4 7天；植物乳杆菌培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为4 7天；大豆根瘤菌培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为 4 7天；胶质芽孢杆菌培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为4 7天；2. 一级菌种培养将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养 基pH为6. 0 8. 0，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30°C，振荡24 48h ；采用血球计数板计 数，菌液中菌种数量分别达到IO8个/Ml ；3. 二级发酵将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的IOOOmL锥形瓶中，培养基 PH6. 0 8. 0，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48 72h ；使菌种数量分别达到IO8个/mL 以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
4.三级发酵将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂 培养基PH6. 0 8. 0，接种量为1 5%，30°C下培养4 7天，使发酵液中菌数达到6 IOXlO9个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。
所述液体培养基配方为1.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为 12Brix,琼脂15g，高压灭菌30分钟；2.大豆根瘤菌采用的液体培养基配方为酵母膏lg、土壤浸提液200ml、甘露醇 10g、琼脂15g、蒸馏水800ml、pH 7. 2 ；土壤浸提液的制法取土壤50克，加水200毫升，蒸 煮1小时，经滤纸过滤后加水补足到200毫升；3.枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌采用的液体培养基配方为牛肉 膏 5g、蛋白胨 10g、Nacl 3g、pH7.0;4.胶质芽孢杆菌采用的液体培养基配方为=KH2PO4 0. 2g、K2HP04 0 . 8g、MgS04 ·7Η20 0. 2g、CaSO4 · 2H20 0. lg、Na2MoO4 · 2H20 微量、酵母膏 0. 5g、甘露醇 20g、FeCl3 微量、蒸馏水 1000ml、琼脂 15g、pH 7. 2 ；5.植物乳杆菌采用的液体培养基配方为乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、 葡萄糖 5g、吐温 80 lg、K2HP042g、醋酸钠 5g、柠檬酸二胺 2g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸馏水 1000ml, pH 6. 5 6. 8。所述复合菌剂培养基配方为蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨 0. 1 0. 5g/100mL、KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL、尿素 0. 1 0. 5g/100mL、K2HPO4 0. 5 2g/100mL、MgS04 ·7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0· 5 2g/100mL、(NH4)2SO4 0· 5 2g/100mL, 其余为蒸馏水。所述微生物复合菌剂作为植物生物调节剂在农作物种植中应用。本发明的有益效果是这种微生物复合菌剂707采用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆 菌、巨大芽孢杆菌、产朊假丝酵母、大豆根瘤菌、胶质芽孢杆菌、植物乳杆菌作为制备菌种。 以上菌种分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到6 10 X IO9个/mL， 即得微生物复合菌剂707。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能促进作物生长、 改善果实品质、促早熟、增加产量，提高肥料利用率，改良土壤生态环境，并且有一定的防病 抗病功效。
具体实施例方式本发明采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is) ATCC No. 6633，地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis)ATCC No. 11946，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC No. 11011，产朊假丝酵母(Candida utilis)ATCC No. 22023，大豆根瘤菌(B. elkanii) ACCC No. 15067，胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)ACCC No. 10013，植物乳杆菌 (Lactobacillusplantarum)ATCC No. 8014 制备微生物复合菌剂 707。菌种的质量百分比为枯草芽孢杆菌45 55%、地衣芽孢杆菌5 10%、巨大芽 孢杆菌5 10%、产朊假丝酵母5 10%、大豆根瘤菌5 10%、胶质芽孢杆菌5 10%、 植物乳杆菌5 10%。常用配方表
按照上述配方表和制备方法得到的微生物复合菌剂707，pH为6. 8，菌数含量达到 9 X IO9 个/mL。实施例1 采用本发明制备的微生物复合菌剂707 (以下简称707)在水稻种植中应用效果试 验一、浸种试验1.试验材料与方法供试品种秀水110 (粳稻)试验方法处理种子对发芽率、发芽势的影响。设4个处理(1)707(1 600倍)；(2)707(推 荐量 1 400 倍)；(3)707(1 200 倍)；(4)CK(清水处理)。调查内容浸(拌)种后按要求处理，然后催芽、测定发芽率、发芽势，根、芽生长状 况。2.试验结果与分析调查结果发现，不同处理对水稻种子的发芽率没有显著影响。2号处理对种子的根 系伸长、须根数的增加促进效果最好。不同处理对种子发芽势的影响 二、大田试验1.试验材料与方法
供试水稻秀水110 (粳稻)试验方法试验设4个处理(1) 707 (1 600倍)稀释液浸种；(2) 707 (推荐量1 400倍) 稀释液浸种；(3) 707 (1 200倍)稀释液浸种；(4)清水浸种(CK)。叶面喷施时间分别在3叶1心时(断奶期)、移栽前3天、分蘖期(移栽后7 10天)、穗期(齐穗后5 7天)各喷施1次，菌剂原液用量为900L/hm2。以WS 16型手 动喷雾器常规喷雾。用药时，田间保持浅水层3d以上。对照(CK)每次喷施等量清水。2.试验结果与分析707能促进水稻地上部总干物质、稻茎干物质以及穗子干物质的积累。能够促进水 稻根系干重增加。707能提高剑叶、倒1叶、倒2叶的叶绿素含量。对水稻纹枯病、穗颈瘟、 胡麻叶斑病、稻曲病等均有一定防治效果。可提高水稻POD和SOD酶的活性，同时可以降低 MDA的含量。提高水稻分蘖能力、增加有效穗、穗长和实粒数，提高结实率。同时，707大幅 度提高了稻米中16种氨基酸的含量，尤其是人体不能合成的赖氨酸含量提高了 59. 3%。实施例2 采用本发明制备的微生物复合菌剂707 (以下简称707)在油麦菜种植中应用效果 试验1.试验材料与方法供试品种尖叶油麦菜。试验方法设4个处理⑴CK (常规施肥)；(2)常规施肥+707 (500倍液叶面喷施二次)；(3) 常规施肥+707 (800倍液浇施一次，500倍液喷施一次)；(4)常规施肥量的80% +707 (800 倍液浇施一次，500倍液喷施一次)。调查内容浸(拌)种后按要求处理，然后催芽、测定发芽率、发芽势，根、芽生长状 况。2.试验结果与分析(1)各处理对油麦菜产量的影响不同处理对油麦菜产量的影响 (2)植株性状调查结果用707浇喷施各1次的处理总糖为0. 88%，维生素C为14. 67mg/100g，粗纤维为 0. 62%,分别比对照(常规施肥)的总糖0. 95%,减少0. 07%；维生素C增加5. 34mg/100g ； 粗纤维增加0.08%。3.结果讨论
处理编号2，3，4均比对照组增产，其中投入产出比最大的是处理编号2为 1 18.66。施用707各1次的油麦菜维生素C和粗纤维含量均比对照组有所提高。实施例3 采用本发明制备的微生物复合菌剂707 (以下简称707)在马铃薯种植中应用效果 试验1.试验材料与方法供试品种石泉陇薯3号，西巩大白花、宁远K299。(一 )浸种试验试验地点石泉乡山庄村和西巩镇花沟村，前茬为豆茬，土地肥力中等。试验设三个处理(1) 707浸种；(2)旱地宝浸种；(3)不浸种(CK)。( 二)喷施试验试验地点宁远镇红土村，前茬为豆茬，土地肥力中等。试验设三个处理(1)707喷施；(2)0. 2%磷酸二氢钾喷施；(3)清水喷施(CK)。2.结果分析在浸种试验中，采用707浸种产量为1376. 6kg/亩，旱地宝浸种1315. 8kg/亩，分 别较对照1122kg/亩，增产255kg/亩和193. 9kg/亩，增幅为22. 7%和17. 3%。在喷施试验中，采用707喷施亩产561. 2公斤，用磷酸二氢钾喷施亩产549公斤， 比对照增产70. 5%和66. 8%。
权利要求
一种微生物复合菌剂707，其特征在于采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ATCC No.11946，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC No.11011，产朊假丝酵母(Candida utilis)ATCC No.22023，大豆根瘤菌(B.elkanii)ACCC No.15067，胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)ACCC No.10013，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No.8014制备菌种；所述菌种的质量百分比如下枯草芽孢杆菌45～55％、地衣芽孢杆菌5～10％、巨大芽孢杆菌5～10％、产朊假丝酵母5～10％、大豆根瘤菌5～10％、胶质芽孢杆菌5～10％、植物乳杆菌5～10％。
2.根据权利要求1所述的一种微生物复合菌剂707的制备方法，其特征在于所述微 生物复合菌剂707的制备步骤如下(1).接种将所述各菌种接于斜面培养基上；枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和巨大芽 孢杆菌为27 37°C，pH为6. 5 7. 5，培养时间为3 7天；产朊假丝酵母培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为4 7天；植物乳杆菌培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为4 7天；大豆根瘤菌培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为 4 7天；胶质芽孢杆菌培养温度25 30°C，pH为6. 0 8. 0，培养时间为4 7天；(2).—级菌种培养将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基 pH为6. 0 8. 0，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30°C，振荡24 48h ；采用血球计数板计数， 菌液中菌种数量分别达到IO8个/Ml ；(3).二级发酵将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的IOOOmL锥形瓶中，培养基 pH6. 0 8. 0，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48 72h ；使菌种数量分别达到IO8个/mL 以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；(4).三级发酵将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培 养基pH 6.0 8.0，接种量为1 5%，30°C下培养4 7天，使发酵液中菌数达到6 IOXlO9个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。
3.根据权利要求2所述的一种微生物复合菌剂707的制备方法，其特征在于所述液 体培养基配方为(1).产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为 12Brix,琼脂15g，高压灭菌30分钟；(2).大豆根瘤菌采用的液体培养基配方为酵母膏lg、土壤浸提液200ml、甘露醇10g、 琼脂15g、蒸馏水800ml、pH 7. 2 ；土壤浸提液的制法取土壤50克，加水200ml，蒸煮1小 时，经滤纸过滤后加水补足到200毫升；(3).枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌采用的液体培养基配方为牛肉膏 5g、蛋白胨 10g、Nacl 3g、pH 7.0;(4).胶质芽孢杆菌采用的液体培养基配方为=KH2PO40. 2g、K2HPO4 0. 8g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、CaSO4 · 2H20 0. lg、Na2MoO4 · 2H20 微量、酵母膏 0. 5g、甘露醇 20g、FeCl3 微量、蒸馏水 1000ml、琼脂 15g、pH 7. 2 ；(5).植物乳杆菌采用的液体培养基配方为乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、 葡萄糖 5g、吐温 80 lg、K2HP042g、醋酸钠 5g、柠檬酸二胺 2g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸馏水 1000ml, pH 6. 5 6. 8。
4.根据权利要求2所述的一种微生物复合菌剂707的制备方法，其特征在于所述 复合菌剂707培养基配方为蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨0. 1 0. 5g/100mL、KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL、尿素 0. 1 0. 5g/100mL、K2HPO4 0. 5 2g/100mL、 MgSO4 ·7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0· 5 2g/100mL、(NH4)2SO4 0· 5 2g/100mL，其余为蒸馏水。
5.根据权利要求1所述的一种微生物复合菌剂707，其特征在于所述微生物复合菌剂 707作为植物生物调节剂在农作物种植中应用。
全文摘要
一种微生物复合菌剂707及其制备方法与应用，属于植物生物调节剂在农作物种植中应用的生物材料技术领域。采用枯草芽孢杆菌45～55％、地衣芽孢杆菌5～10％、巨大芽孢杆菌5～10％、产朊假丝酵母5～10％、大豆根瘤菌5～10％、胶质芽孢杆菌5～10％、植物乳杆菌5～10％。以上菌种分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到6～10×109个/mL，即得微生物复合菌剂707。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能促进作物生长、改善果实品质、促早熟、增加产量，提高肥料利用率，改良土壤生态环境，并且有一定的防病抗病功效。
文档编号A01N63/02GK101914447SQ201010247720
公开日2010年12月15日 申请日期2010年7月31日 优先权日2010年7月31日
发明者刘美娜, 崔国亮, 崔国臣 申请人:大连三科生物工程有限公司