当归微生物菌剂育苗及对土传病害的防治方法
【专利摘要】本发明公开了一种微生物菌剂在当归育苗中的应用及对土传病害的防治方法。本发明所涉及的微生物菌剂有自制3种菌剂和1种商品菌剂，分别对当归拌种生地育苗，通过对当归苗实验小区当归苗重、株数和当归苗等级统计，研究微生物菌剂在当归育苗应用的可行性及对土传病害的防治效果。本发明提供的复合真菌菌剂（Pythium oligandrum和Beauveria bassiana,PO+BB）对当归育苗和土传病害的防治效果最好，优于商品菌剂“多利维生”寡雄腐霉卵孢子，该复合真菌菌剂在农业和中药材生产中具有良好的应用前景。
【专利说明】
当归微生物菌剂育苗及对土传病害的防治方法
技术领域
[0001] 本发明涉及了当归微生物菌剂育苗及对土传病害的防治方法，属于农业微生物生 态技术应用领域。
【背景技术】
[0002] 当归[AogWica si/3e/3sis(01 iv.)Diels]又名峨归、秦归、西当归、川归等，为伞形 科多年生草本植物，是享誉盛名的道地中药材。当归适宜于栽种在2000-2800m海拔的高寒 阴湿地带，甘肃是我国当归主产区，年栽培面积和总产量均占全国90%以上。由于有限的适 生区和市场周年需求的矛盾，当归连作现象普遍，导致当归麻口病根腐病等土传害严重、致 使农药使用量大、农残严重超标、造成当归产量和质量均显著下降。其中当归种苗带病是当 归病害发生的主要原因之一，因此提供健康优质的当归苗是当归土传病害防治的重要方 式。
[0003] 在当归育苗和栽培过程中使用大量的化学农药，不但提升防治成本、病原菌易产 生抗药性，而且造成环境污染、当归产品农残超标。利用微生物菌剂育苗，不但能提高种苗 的质量，对土传病害有较好的防止效果，而且经济环保，国内外对微生物菌剂育苗已有许多 报道，但微生物菌剂在当归育苗上的应用还未见报道。
[0004] 本发明通过实验室自制3种菌剂PGPR、AMF和Ρ0+ΒΒ，以及市场购买由捷克生物制 剂有限公司生产的"多利维生"寡雄腐霉卵孢子(P0)，对当归拌种生地育苗，研究不同微生 物菌剂对当归苗质量的改善以及土传病害的防治效果，为当归育苗和土传病害的防治提供 新技术，为微生物技术在现代有机农业的应用提供参考。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种利用微生物菌剂对当归育苗的方法，以提高当归苗的质 量。
[0006] 本发明的另一个目的是通过微生物菌剂育苗的途径，为当归土传病害的防治提供 一种新方法，以解决化学农药的过量使用造成的环境污染、药残超标问题。
[0007] 为达到以上目的，本发明采用以下技术方案： 1、当归育苗地的选择 当归育苗地一般选择在海拔2200-2700m的河滩川地和阴坡山地。因是生地育苗，育苗 地没有施肥和使用化学药物。人工翻地、耙细后等待播种。
[0008] 2、选种 选择三年生正常成熟的当归种子，种子自然风干、无虫子和霉变。
[0009] 3、微生物菌剂拌种 播种前一天，取适量(根据播种面积而定)的当归种子与微生物菌剂和无菌水充分混合 均匀后，浸润10小时，播种备用。
[0010] 4、播种 根据种子的千粒重和种植密度，选择播种量。岷县当归生地育苗时间在6月中旬，播种 后，上覆一层细密潮湿的土壤，厚度约〇. 4cm，然后用麦草覆盖。
[0011] 5、生长管理 当归出苗后，揭开麦草除草，除草完毕后再覆盖上麦草。播种60天左右，当归苗生长较 强壮，可以去掉覆盖的麦草。
[0012] 6、起苗 育苗周期为110-120天，生长周期满应立即起苗。起苗时统计出苗率、苗等级和病害情 况。
[0013] 7、贮苗 起苗时不要完全抖掉当归苗地下茎上的土，将当归苗地下茎握成一团，用绳子打成捆， 去掉当归苗地上部分的叶，贮藏在沙土中，越冬待来年春天栽种。
[0014] 本发明的有益效果为： 1、本发明提供了一种利用微生物菌剂拌种的当归育苗方法，该方法可以提高当归苗的 质量和品质。
[0015] 2、本发明提供的微生物菌剂当归育苗方法，是有效防治当归种苗带病引起当归栽 培过程中土传病害高发的有效途径。
[0016] 3、本发明所提供的微生物菌剂育苗方法，减少了化学农药的用量和残留，生态环 保。
【具体实施方式】
[0017] 结合实施例和【具体实施方式】对本发明进一步详细说明。
[0018] 实施例1: 1、当归育苗地的选择 本发明当归育苗地的选择:岷县瓦沟沟阴坡生地，海拔:2570米。实验小区面积为lmX 5m=5m2，每个处理设置三个重复。
[0019] 2、选种 本发明使用自然风干、无虫子、无霉变的禾驮当归种子为种源，种子千粒重2.0 g，正常 发芽率在30%-35%，常规育苗密度为200株/m2,据此计算当归种子的用量为6g/m2。因此，每个 实验小区种子使用量为30g。
[0020] 3、微生物菌剂拌种 PGPR菌剂处理:称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入9ml有效活菌数为101Q的 实验室自制PGPR菌剂，再加入8lml无菌水，然后在灭菌容器中将PGPR菌液与当归种子混合 均匀后，浸润10小时，播种备用。自制PGPR菌剂的特征在于：它是由苏云金芽孢杆菌 (保藏号为GSICC 32807、解淀粉芽抱杆菌（ a?7_/o_/i<7t/e/acie/3s )保藏号为GSICC 32826、錯状芽抱杆菌ceret/s)保藏号为 GSICC 32815、地衣芽孢杆菌（feciDus 2icAe/3i/or?is)保藏号为GSICC 30203、枯草芽孢 杆菌（5ast/保藏号为GSICC 32828、褐色球形固氮菌（dzo io/?acie_r cAiOococctw?)保藏号为GSICC 30112、灰色链霉菌锈色变种griset/s var. ferrugineus)保藏号为GSICC 41920和胶冻样芽孢杆菌（ifeciDus皿/ciJagioosus)保藏号 为GSICC 30250等8种功能细菌组成。上述8种功能微生物均保藏于中国工业微生物菌种保 藏中心甘肃分中心。
[0021] P0菌剂处理:称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入含106个孢子/g的P0真 菌菌剂4.5g，然后加入90ml无菌水，使P0孢子均匀充分地粘在当归种子上，浸润10小时，播 种备用。P0菌剂是由捷克生物制剂有限公司生产的"多利维生"寡雄腐霉卵孢子。
[0022] 空白对照(CK):称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入90ml无菌水混合均 匀后，浸润1 〇小时，播种备用。
[0023] 4、播种 2014年6月10日播种。播种前，将浸润好的种子等分成三份，分别播散在实验小区上，接 着覆盖一层细密潮湿的土壤，厚度约〇. 4cm，然后用麦草覆盖，播种完成。
[0024] 5、生长管理 当归出苗后，揭开麦草除草，除草完毕后再覆盖上麦草。2014年8月7日，取掉覆盖的麦 草，此时当归苗已经较强壮。
[0025] 6、起苗 2014年9月27日起苗。起苗时统计了出苗率、苗重、苗等级和病害情况。
[0026] 当归苗等级分类标准:一等苗为地下莖基部直径4_9mm，无损伤、无病害、无分叉； 二等苗为地下莖基部直径3_4mm或大于9mm，或符合一等苗生长要求但有轻微损伤、麻口或 分叉的也将其归属于二等苗;三等苗为地下茎基部直径2-3mm;废弃苗为地下茎基部直径小 于2mm或分叉严重的苗，基本不能使用，属于废弃苗。（2)病害统计：由于当归生地育苗，土传 病害不严重，本发明只统计病害株数，对病害苗不做等级分类。
[0027] 7、贮苗 起苗时不要完全抖掉当归苗地下茎上的土，将当归苗地下茎握成一团，用绳子打成捆， 去掉当归苗地上部分的叶，贮藏在沙土中，越冬待来年春天栽种。
[0028] 8、育苗效果 结果表明，自制PGPR、P0和CK三种处理对实验小区当归苗的苗重和株数，以及二等苗、 三等苗和病害苗的比例影响没有显著差异(见表1)，但P0菌剂处理实验小区当归苗的苗重 和株数的均值高于自制PGPR菌剂和UGPR菌剂处理废弃苗比例显著低于P0和CK(p〈 0.05)，但一等苗的比例显著低于P0菌剂处理(p〈0.05)，且病害苗比例均值高于P0菌剂处理 和对照，表明P0菌剂处理效果优于PGPR菌剂。同时PGPR和P0两种菌剂处理一等苗的比例均 显著高于CK(p〈0.05)，而废弃苗的比例均显著低于CK(p〈0.05)，表明两种微生物菌剂育苗 效果均优于CK，显著提高当归苗的质量和品质。
[0029]表1不同处理对当归苗质量、株数及当归苗等级比例的影响
注:表中数据为均值±标准误，同列数据小写字母不同表示处理间在P〈〇.05水平上显 著差异。
[0030] 实施例2: 1、当归育苗地的选择 本发明当归育苗地的选择:岷县瓦沟沟阴坡生地，海拔:2570米。实验小区面积为lmX 5m=5m2，每个处理设置三个重复。
[0031] 2、选种 本发明使用自然风干、无虫子、无霉变的禾驮当归种子为种源，种子千粒重2.0 g，正常 发芽率在30%-35%，常规育苗密度为200株/m2,据此计算当归种子的用量为6g/m2。因此，每个 实验小区种子使用量为30g。
[0032] 3、微生物菌剂拌种 AMF菌剂处理:称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入含有根内外菌丝、侵染根段 和10个孢子/g干土的自制AMF菌剂90g，然后加入90ml无菌水，使AMF孢子、根外菌丝和侵染 根段均匀粘在当归种子上，浸润10小时，播种备用。自制AMF菌剂的特征在于:它是由单孢球 囊霉?cMoSjDor腫)保藏号为WUM11，光壁无梗囊霉(dcat/_/oSj〇ora _/aeris)保藏号为 Sunsex等2种功能AMF组成。上述2株菌均保藏于西澳大学菌种保藏中心。
[0033] P0菌剂处理:称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入含106个孢子/g的P0真 菌菌剂4.5g，然后加入90ml无菌水，使P0孢子均匀充分地粘在当归种子上，浸润10小时，播 种备用。P0菌剂是由捷克生物制剂有限公司生产的"多利维生"寡雄腐霉卵孢子。
[0034] 空白对照(CK):称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入90ml无菌水混合均 匀后，浸润1 〇小时，播种备用。
[0035] 4、播种 2014年6月10日播种。播种前，将浸润好的种子等分成三份，分别播散在实验小区，接着 覆盖一层细密潮湿的土壤，厚度约〇. 4cm，然后用麦草覆盖，播种完成。
[0036] 5、生长管理 当归出苗后，揭开麦草除草，除草完毕后再覆盖上麦草。2014年8月7日，取掉覆盖的麦 草，此时当归苗已经较强壮。
[0037] 6、起苗 2014年9月27日起苗。起苗时统计了出苗率、苗重、苗等级和病害情况。
[0038] 当归苗等级分类标准:一等苗为地下莖基部直径4_9mm，无损伤、无病害、无分叉； 二等苗为地下莖基部直径3_4mm或大于9mm，或符合一等苗生长要求但有轻微损伤、麻口或 分叉的也将其归属于二等苗;三等苗为地下茎基部直径2-3mm;废弃苗为地下茎基部直径小 于2mm或分叉严重的苗，基本不能使用，属于废弃苗。（2)病害统计：由于当归生地育苗，土传 病害不严重，本发明只统计病害株数，对病害苗不做等级分类。
[0039] 7、贮苗 起苗时不要完全抖掉当归苗地下茎上的土，将当归苗地下茎握成一团，用绳子打成捆， 去掉当归苗地上部分的叶，贮藏在沙土中，越冬待来年春天栽种。
[0040] 8、育苗效果 结果表明，自制AMF、P0和CK三种处理对实验小区当归苗的苗重和株数，以及二等苗、三 等苗和病害苗的比例影响没有显著差异(P>〇. 05)，但AMF菌剂处理实验小区当归苗的苗重 和株数的均值高于P0菌剂和CK(见表2)。虽然AMF菌剂处理一等当归苗的比例显著低于P0处 理(p〈0.05)，但是废弃苗的比例也显著低于P0处理(p〈0.05)，而且病害苗比例均值低于PO 处理、小区苗株数均值高于P0处理，表明AMF菌剂能提高当归种子的出苗率，对当归苗病害 的防止效果优于P0菌剂。AMF和P0两种菌剂处理一等苗的比例显著高于CK处理(p〈0.05)，而 废弃苗的比例显著低于CK处理(p〈0.05)，表明两种微生物菌剂处理显著提高当归苗的质量 和品质。
[0041] 表2不同处理对当归苗质量、株数及当归苗等级比例的影响
注:表中数据为均值±标准误，同列数据小写字母不同表示处理间在P〈〇.05水平上显 著差异。
[0042] 实施例3: 1、当归育苗地的选择 本发明当归育苗地的选择:岷县瓦沟沟阴坡生地，海拔:2570米。实验小区面积为lmX 5m=5m2，每个处理设置三个重复。
[0043] 2、选种 本发明使用自然风干、无虫子、无霉变的禾驮当归种子为种源，种子千粒重2.0 g，正常 发芽率在30%-35%，常规育苗密度为200株/m2,据此计算当归种子的用量为6g/m2。因此，每个 实验小区种子使用量为30g。
[0044] 3、微生物菌剂拌种 Ρ0+ΡΒ复合真菌菌剂处理:称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入含106个孢子/g 的Ρ0+ΡΒ复合真菌菌剂4.5g，然后加入90ml无菌水，使P0孢子均匀充分地粘在当归种子上， 浸润10小时，播种备用。复合真菌菌剂P 0+B B的特征在于：它是由寡雄腐霉（i A i ? )保藏号为 GSICC 61615 和球抱白僵菌（i?eat/re_ria /?assia/3a)保藏号为 GSICC 60202等2种功能丝状真菌组成。上述2株功能菌保藏于中国工业微生物菌种保藏中 心甘肃分中心。
[0045] P0菌剂处理:称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入含106个孢子/g的P0真 菌菌剂4.5g，然后加入90ml无菌水，使P0孢子均匀充分地粘在当归种子上，浸润10小时，播 种备用。P0菌剂是由捷克生物制剂有限公司生产的"多利维生"寡雄腐霉卵孢子。
[0046] 空白对照(CK):称量90g禾驮当归种子放入无菌容器中，加入90ml无菌水混合均 匀后，浸润1 〇小时，播种备用。
[0047] 4、播种 2014年6月10日播种。播种前，将浸润好的种子等分成三份，分别播散在实验小区，接着 上覆一层细密潮湿的土壤，厚度约〇. 4cm，然后用麦草覆盖，播种完成。
[0048] 5、生长管理 当归出苗后，揭开麦草除草，除草完毕后再覆盖上麦草。2014年8月7日，取掉覆盖的麦 草，此时当归苗已经较强壮。
[0049] 6、起苗 2014年9月27日起苗。起苗时统计了出苗率、苗重、苗等级和病害情况。
[0050] 当归苗等级分类标准:一等苗为地下莖基部直径4_9mm，无损伤、无病害、无分叉； 二等苗为地下莖基部直径3_4mm或大于9mm，或符合一等苗生长要求但有轻微损伤、麻口或 分叉的也将其归属于二等苗;三等苗为地下茎基部直径2-3mm;废弃苗为地下茎基部直径小 于2mm或分叉严重的苗，基本不能使用，属于废弃苗。（2)病害统计：由于当归生地育苗，土传 病害不严重，本发明只统计病害株数，对病害苗不做等级分类。
[0051] 7、贮苗 起苗时不要完全抖掉当归苗地下茎上的土，将当归苗地下茎握成一团，用绳子打成捆， 去掉当归苗地上部分的叶，贮藏在沙土中，越冬待来年春天栽种。
[0052] 8、育苗效果 结果表明，自制Ρ0+ΡΒ、Ρ0和CK三种处理对实验小区当归苗的苗重和株数，以及二等苗、 三等苗和病害苗的比例影响没有显著差异(P>〇.05)，但Ρ0+ΡΒ菌剂处理实验小区当归苗的 苗重和株数的均值高于CK(见表3)，而且实验小区苗重与P0处理相当，但出苗株数均值高于 P0处理，表明Ρ0+ΡΒ菌剂处理提高了当归种子的出苗率。ΡΟ+ro和P0两种菌剂处理，一等苗的 比例无显著差异(P>〇.05)，但显著高于CK处理(p〈0.05);而废弃苗的比例也相当，且显著低 于CK处理(p〈0.05)，表明两种微生物菌剂处理显著提高当归苗的质量和品质。Ρ0+ΡΒ菌剂处 理无病害苗，表明Ρ0+ΡΒ菌剂处理无论对当归苗品质的提升和土传病害的防治都是最优的。
[0053] 表3不同处理对当归苗质量、株数及当归苗等级比例的影响
注:表中数据为均值±标准误，同列数据小写字母不同表示处理间在P〈〇.05水平上显 著差异。
[0054] 以上本发明微生物菌剂当归育苗及对土传病害的防治效果实验结果表明： 1、添加细菌、真菌和AMF三类微生物菌剂后，均能提高当归育苗的质量和品质，表明微 生物菌剂在当归育苗应用上的可行性。
[0055] 2、微生物菌剂当归育苗不但提高了当归苗的质量和品质，也是在当归栽培过程中 从种苗源头上防治土传病害的有效手段。
[0056] 3、微生物菌剂育苗方法，减少了化学农药的用量和残留，生态环保、适用范围广， 可用于农作物、瓜果、蔬菜以及特色中药材等方面。
[0057] 以上描述了本发明的基本原理、特征和特点。本行业的技术人员应该了解，上述说 明书和实施例只说明了本发明的原理，在不脱离本发明精神和范畴的前提条件下，本发明 还有一定的改进和变化，这些改进和变化均要求保护在本发明范围内。
【主权项】
1. 利用微生物菌剂的当归育苗方法，其特征在于：利用3种实验室自制微生物菌剂，包 括了细菌、真菌和丛枝菌根真菌，以及1种市购菌剂开展当归育苗研究，实验结果表明4种微 生物菌剂对当归苗质量和品质均有显著改善。2. 权利要求1所述自制微生物菌剂之一：植物根际促生菌(Plant growth promoting rhizobacteria, PGPR)其特征在于：它是由苏云金芽孢杆菌(ifeciDus iAuriogiefisis)保 藏号为GSICC 32807、解淀粉芽抱杆菌)保藏号为GSICC 32826、錯状芽抱杆菌ceret/s)保藏号为GSICC 32815、地衣芽抱杆菌 保藏号为GSICC 30203、枯草芽抱杆菌（保藏号为 GSICC 32828、褐色球形固氣菌(dzoio/7acie_r cA_roococc腫)保藏号为GSICC 30112、灰色链 霉菌锈色变种（S'irepio野ces griset/s var. ferrugineus)保藏号为GSICC 41920和胶冻 样芽孢杆菌皿/ci_/agi/3〇sus)保藏号为GSICC 30250等8种功能细菌组成，上述8 种功能微生物均保藏于中国工业微生物菌种保藏中心甘肃分中心。3. 权利要求1所述自制微生物菌剂之一：丛枝菌根真菌（Arbuscular mycorrhizal fungi, AMF)其特征在于:它是由单孢球囊霉?M〇Sj〇or?)保藏号为WUM11，光壁无 梗囊霉(dcat/iosjoora iaeris)保藏号为Sunsex等2种功能AMF组成，上述2株菌保藏于西澳 大学菌种保藏中心。4. 权利要求1所述自制微生物菌剂之一：复合真菌菌剂oh>a/3c/rt/?和 ifeat/reria /?assia/3a，P0+BB)其特征在于：它是由寡雄腐霉（/yiAi? )保藏 号为GSICC 61615和球孢白僵菌(Beaureria /?assia/3a)保藏号为GSICC 60202等2种功能 丝状真菌组成，上述2株功能菌保藏于中国工业微生物菌种保藏中心甘肃分中心。5. 权利要求1所述的利用4种微生物菌剂进行当归育苗生地的方法，其特征在于微生物 菌剂的育苗应用方式，包括微生物菌剂的接种方式:本发明采用微生物菌剂拌种方式，具体 操作如下：（l)90g当归种子放入无菌容器中，加入9ml有效活菌数为10 1()的实验室自制PGPR 菌剂，再加入8lml无菌水，在灭菌容器中将PGPR菌液与当归种子混合均匀后，浸润10小时； (2)90g当归种子需要含有根内外菌丝、侵染根段和10个孢子/g干土 AMF菌剂90g，在灭菌容 器中加入AMF菌剂和当归种子，然后加入90ml无菌水，使AMF孢子、根外菌丝和侵染根段均 匀粘在当归种子上，浸润10小时；（3)称量90g当归种子放入无菌容器中，加入含10 6个孢子/ g的P0+PB复合真菌菌剂4.5g，然后加入90ml无菌水，使P0+PB复合菌剂的孢子均匀充分地 粘在当归种子上，浸润10小时；（4)90g当归种子需要含10 6个孢子/g的P0菌剂4.5g，在灭菌 容器中加入P0菌剂和当归种子，然后加入90ml无菌水，使P0孢子均匀充分地粘在当归种子 上，浸润10小时；（5)实验对照(CK)为在灭菌容器中90g当归种子和90ml无菌水，混合均匀， 浸润10小时。6. 权利要求1所述的利用4种微生物菌剂进行当归生地育苗的方法，其特征还在于每平 方米育苗地种子的使用量，本发明选用的种源为禾驮当归种子，根据禾驮当归的发芽率和 育苗密度，种子的使用量为6 g/m2。7. 根据权利要求2、3、4、5和6提供一种利用微生物菌剂当归育苗的新方法，其特征还在 于（1)当归苗等级分类标准:一等苗为地下莖基部直径4-9mm，无损伤、无病害、无分叉;二等 苗为地下莖基部直径3_4mm或大于9mm，或符合一等苗生长要求但有轻微损伤、麻口或分叉 的也将其归属于二等苗;三等苗为地下茎基部直径2-3mm;废弃苗为地下茎基部直径小于
【文档编号】A01G13/00GK105993461SQ201610336754
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】祝英, 杨晖, 王治业, 彭轶楠, 巩晓芳, 郭增祥, 周剑平, 张军, 季彬
【申请人】甘肃省科学院生物研究所