多花型兜兰试管苗培育方法
【专利摘要】多花型兜兰试管苗培育方法，属于植物种植【技术领域】。其特征在于包括以下步骤：1)果荚获取；2)?无菌播种；3)--增殖继代培养；4)生根壮苗培养；5)试管苗移栽。上述多花型兜兰试管苗培育方法，具有萌发率高、出苗周期短、种苗健壮、根系发达、种苗品质好、生产成本低等特点，可以用作兜兰的规模化、工厂化生产，具有很好的应用前景。
【专利说明】多花型兜兰试管苗培育方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物种植【技术领域】，具体为多花型兜兰试管苗培育方法。
【背景技术】
[0002]览兰(Paphiopedilum)又称拖鞋兰，兰科多年生草本，本属植物全世界约有70多种，是国家一级保护植物。《华盛顿公约》(即《濒危野生动植物种国际贸易公约》，Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora，CITES)把所有兜兰属植物列入其附录一名录，受到国际社会的严格保护。兜兰的栽培和育种历史悠久，目前有大量的杂交品种。多花型系列兜兰如麦克、国王、淑女等每个花茎上有数朵花，是栽培最普及的洋兰之一，具有极高的观赏价值和较高的经济价值，在欧美广受人们欢迎。兜兰采用分株繁殖繁殖系数低、速度慢、繁殖周期长，难以满足商品化生产的需求。同大多数兰花一样，兜兰种子十分细小，不含胚乳，胚未分化，只达到球形胚阶段，无子叶、胚根和胚芽，在自然环境中需与真菌共生才能萌发，且萌发率极低，利用常规方法播种发芽几乎不可能，只能于试管中在无菌条件下培养。但兜兰无菌播种和组织培养难度大，是兰科植物中种子试管培养最困难的属之一。
【发明内容】
[0003]针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种多花型兜兰试管苗培育方法的技术方案，多花型兜兰种子萌发率、成苗率和移栽成活率高，可以用作兜兰的规模化、工厂化生产。
[0004]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于包括以下步骤:
1)果荚获取:开花时选取生长健壮的兜兰母株进行人工杂交授粉，授粉后110-120天收取成熟果荚作为外植体，用于播种`；
2)无菌播种:果荚消毒后，切开果荚，将粉末状的成熟种子均匀撒在播种培养基上；所述的播种培养基为由MS培养基+鱼肉蛋白胨2-4g/L+活性炭0.5-1 g/L+苹果粉碎物100-150ml/L组成，播种培养基的PH5.4—5.6，先进行暗培养30_35d，然后改为光照培养，待萌发的种子大多数转绿后进行增殖继代培养；
3)增殖继代培养:将正常萌发转绿的原球茎转接到继代培养基上；所述的继代培养基由MS培养基+鱼肉蛋白胨3-4g/L+活性炭0.3-0.8 g/L+3_7g/L椰汁组成，所述继代培养基PH5.5—5.7，约2-3个月后形成带短根的丛生植株苗，及时将植株转接，进入生根壮苗培养;
4)生根壮苗培养:及时将继代培养生成的带短根的丛生植株苗分开，从根茎连接处切掉根，接种到壮苗生根培养基中培养；所述的壮苗生根培养基由花宝一号1.5g/L+花宝二号1.5g/L+活性炭l_2g/L+马铃薯粉碎物200-300ml/L+香蕉40_50g/L组成，壮苗生根培养基 PH5.5-5.6 ；
5)试管苗移栽:生根壮苗培养80-90天，植株3-5厘米高，根长2-3厘米，转移到自然光炼苗15-18天，洗净根部培养基，移栽至基质中。
[0005]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤I)中:所述的兜兰母株为国王、麦克或淑女多花型兜兰品种。
[0006]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:果荚外植体用75%酒精浸泡30-35秒后，用0.1%升汞消毒15-20分钟，期间不断摇动以使果荚外植体充分接触升汞溶液，再用无菌水冲洗4-5次，在超净工作台上切开果荚，将粉末状的成熟种子均匀撒在播种培养基上。
[0007]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:所述的播种培养基为由MS培养基+鱼肉蛋白胨3g/L+活性炭0.6-0.8 g/L+苹果粉碎物120_130ml/L组成。
[0008]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:光照强度150-250LX，光照时间9-llh/d 周后光照强度增加到400_600Lx，光照时间10-1 lh/d。
[0009]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:所述的苹果粉碎物采用以下方法制备:将苹果去皮去心后，切成小块，称取100g，加入IL水中，放入搅拌机搅拌2-3min,备用。
[0010]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤3)中:所述的继代培养基由MS培养基+鱼肉蛋白胨3.5 g/L+活性炭0.4-0.5 g/L+4_6g/L椰汁组成；光照强度800Lx—lOOOLx，光照时间 12-13h/d。
[0011]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤4)中:所述的壮苗生根培养基由花宝一号1.5g/L +花宝二号1.5g/L+活性炭1.5g/L+马铃薯粉碎物250ml/L+香蕉45g/L组成；光照强度1500Lx — 2000Lx，光照时间ll_12h/d。
[0012]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤4)中:所述的马铃薯粉碎物采用以下方法制备:将马铃薯去皮后，切成小块，称取100g，放入IL水中，煮沸后再继续煮10-15min,然后放入搅拌机搅拌2_3min，备用。。
[0013]所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤5)中:所述基质为为体积比1:1泥炭:树皮混合物，基质采用1000-1200倍多菌灵消毒，将炼苗区与其他区域隔离，温度控制在24-26°C，湿度为50%-70%，并保持适当通风。
[0014]所述的花宝一号为N:P:K重量比7:6:19的混合物，所述的花宝二号为N:P:K重量比20:20:20的混合物，均可从市场上直接购得。
[0015]上述多花型兜兰试管苗培育方法，具有萌发率高、出苗周期短、种苗健壮、根系发达、种苗品质好、生产成本低等特点，可以用作兜兰的规模化、工厂化生产，具有很好的应用前景。
【具体实施方式】
[0016]下面结合具体实施例来进一步说明本发明的有益效果。
[0017]实施例1
I)果荚获取:选用国王、麦克、淑女三个多花型兜兰品种的成熟果荚为实验材料，开花时选取生长健壮的母株进行人工杂交授粉，授粉后120天收取成熟果荚。
[0018]2)无菌播种:将果荚外植体用75%酒精浸泡30秒后，用0.1%升汞消毒15~20分钟，期间不断摇动以使果荚外植体充分接触升汞溶液，再用无菌水冲洗5次，在超净工作台上切开果荚，将粉末状的成熟种子均匀撒在播种培养基上；所述的播种培养基为MS培养基+鱼肉蛋白胨3g/L+活性炭0.5 g/L+苹果粉碎物100ml/L，PH5.4—5.6 ;暗培养30天左右，种子开始萌发时改为光照培养，光照强度200Lx，光照时间10h/d，一周后光照强度增加到500Lx，光照时间10h/d ;此时，萌发的种子有逐渐转绿的现象，待萌发的种子基本转绿后进行增殖继代培养；
所述的苹果粉碎物采用以下方法制备:将苹果去皮去心后，切成小块，称取100g，加入IL水中，放入搅拌机搅拌2-3min，备用。；
所述的播种培养基也可以为由MS培养基+鱼肉蛋白胨2g/L+活性炭0.5 g/L+苹果粉碎物100ml/L组成，或由MS培养基+鱼肉蛋白胨4g/L+活性炭I g/L+苹果粉碎物150ml/L组成；
3)增殖继代培养:将正常萌发转绿的原球茎进行增殖继代培养，培养基为Dl号培养基，其成分为MS培养基+鱼肉蛋白胨3g/L+活性炭0.5 g/L+5g/L椰汁，PH5.4—5.6，光照强度800Lx — lOOOLx，光照时间12h/d。培养2_3个月后形成带短根的丛生植株苗，及时分苗转接，进入生根壮苗培养；
所述的继代培养基也可以由MS培养基+鱼肉蛋白胨4g/L+活性炭+3 g/L椰汁组成，或由MS培养基+鱼肉蛋白胨3.5g/L+活性炭0.8 g/L+7 g/L椰汁组成；
4)生根壮苗培养:及时将继代培养生成的带短根的丛生植株苗分开，从根茎连接处切掉根，接种到壮苗生根培养基中。壮苗生根培养基为花宝一号1.5 g/L +花宝二号1.5 g/L+活性炭lg/L+马铃薯粉碎物200ml/L+香蕉40g/L, PH5.4—5.6。光照强度1500Lx—2000Lx，光照时间 12h/d ；
所述的壮苗生根培养基也可以由花宝一号1.5 g/L +花宝二号1.5 g/L +活性炭2g/1+马铃薯粉碎物2501111/1+香蕉458/1组成，或由花宝一号1.5 g/L +花宝二号1.5 g/L +活性炭1.5g/L+马铃薯粉碎物300ml/L+香蕉50g/L组成；
所述的马铃薯粉碎物采用以下方法制备:将马铃薯去皮后，切成小块，称取100g，放入IL水中，煮沸后再继续煮10-15min,然后放入搅拌机搅拌2-3min,备用；
5)试管苗移栽:试管苗壮苗培养90天后，植株约4-5厘米高，根长2-3厘米，转移到自然光下炼苗15天；而后将其从玻璃瓶中小心取出，洗净根部培养基，所述基质为为体积比1:1泥炭:树皮混合物，基质采用1000-1200倍多菌灵消毒，将炼苗区与其他区域隔离，温度控制在24-26°C，湿度为50%-70%，并保持适当通风。
[0019]上述方法中适宜温度均为24_26°C。
[0020]以下通过试验进一步说明本发明的有益效果。
【权利要求】
1.多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于包括以下步骤: 1)果荚获取:开花时选取生长健壮的兜兰母株进行人工杂交授粉，授粉后110-120天收取成熟果荚作为外植体，用于播种； 2)无菌播种:果荚消毒后，切开果荚，将粉末状的成熟种子均匀撒在播种培养基上；所述的播种培养基为由MS培养基+鱼肉蛋白胨2-4g/L+活性炭0.5-1 g/L+苹果粉碎物100-150ml/L组成，播种培养基的PH5.4—5.6,先进行暗培养30_35d，然后改为光照培养，待萌发的种子大多数转绿后进行增殖继代培养； 3)增殖继代培养:将正常萌发转绿的原球茎转接到继代培养基上；所述的继代培养基由MS培养基+鱼肉蛋白胨3-4g/L+活性炭0.3-0.8 g/L+3_7g/L椰汁组成，所述继代培养基PH5.5—5.7，约2-3个月后形成带短根的丛生植株苗，及时将植株转接，进入生根壮苗培养; 4)生根壮苗培养:及时将继代培养生成的带短根的丛生植株苗分开，从根茎连接处切掉根，接种到壮苗生根培养基中培养；所述的壮苗生根培养基由花宝一号1.5g/L+花宝二号1.5g/L+活性炭l_2g/L+马铃薯粉碎物200-300ml/L+香蕉40_50g/L组成，壮苗生根培养基 PH5.5-5.6 ； 5)试管苗移栽:生根壮苗培养80-90天，植株3-5厘米高，根长2-3厘米，转移到自然光炼苗15-18天，洗净根部培养基，移栽至基质中。
2.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤I)中:所述的兜兰母株为国王、麦克或淑女多花型兜兰品种。
3.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:果荚外植体用75%酒精浸泡30-35秒后，用0.1%升汞消毒15-20分钟，期间不断摇动以使果荚外植体充分接触升汞溶液 ，再用无菌水冲洗4-5次，在超净工作台上切开果荚，将粉末状的成熟种子均匀撒在播种培养基上。
4.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:所述的播种培养基为由MS培养基+鱼肉蛋白胨3g/L+活性炭0.6-0.8 g/L+苹果粉碎物120_130ml/L组成。
5.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:光照强度150-250LX，光照时间9-llh/d 周后光照强度增加到400_600Lx，光照时间10-1 lh/d。
6.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤2)中:所述的苹果粉碎物采用以下方法制备:将苹果去皮去心后，切成小块，称取100g，加入IL水中，放入搅拌机搅拌2-3min，备用。
7.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤3)中:所述的继代培养基由MS培养基+鱼肉蛋白胨3.5g/L+活性炭0.4-0.5 g/L+4_6g/L椰汁组成；光照强度 800Lx — lOOOLx，光照时间 12_13h/d。
8.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤4)中:所述的壮苗生根培养基由花宝一号1.5g/L +花宝二号1.5g/L+活性炭1.5g/L+马铃薯粉碎物250ml/L+ 香蕉 45g/L 组成；光照强度 1500Lx — 2000Lx，光照时间 ll_12h/d。
9.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤4)中:所述的马铃薯粉碎物采用以下方法制备:将马铃薯去皮后，切成小块，称取100g，放入IL水中，煮沸后再继续煮10-15min,然后放入搅拌机搅拌2_3min,备用。
10.如权利要求1所述的多花型兜兰试管苗培育方法，其特征在于步骤5)中:所述基质为为体积比1:1泥炭:树皮混合物，基质采用1000-1200倍多菌灵消毒，将炼苗区与其他区域隔离，温度控制在24-26°C ，湿度为50%-70%，并保持适当通风。
【文档编号】A01H4/00GK103704139SQ201310742625
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月30日 优先权日:2013年12月30日
【发明者】郑勇平, 王春, 陈任文展, 张慕欢 申请人:浙江森禾种业股份有限公司