小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶培养、种子罐发酵；发酵液经95-100℃蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏；在饲料中添加了0.05-0.75%上述的小刺猴头发酵浸膏，能够提高肉鸡日增重，显著促进动物生长，日增重提高了8.96%，提高饲料转化率，提高动物生产性能，同时还能提升禽肉的品质，降低鸡肉胆固醇含量，肉鸡胸肌、腿肌、肝脏中胆固醇的含量分别降低30.67%、48.18%和57.04%。
【专利说明】小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂
【技术领域】
[0001] 本发明属饲料添加剂领域，具体地说是小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂及用于生产 低胆固醇畜禽产品的饲料。
【背景技术】
[0002] 抗菌、抗病毒一直是困扰养殖行业的一大问题，而使用抗生素类药物的残留问题 已经引起世界各国高度重视。从2006年1月1日起，欧盟国家全面禁止食品类动物使用抗 生素促生长饲料添加剂。所以寻找一种绿色、高效、安全的饲料添加剂显得十分迫切。近年 来，应用有益微生物进行饲料添加剂的开发和生产，为饲料添加剂提供了一条新发展途径， 为食品工业、饲料工业和畜禽饲养提供了一种健康、无毒、无污染的选择。
[0003] 小刺猴头菌[/fericia? ca/w/i-ffleofeae (Bull. :Fr. ) Pers.]是一种珍稀的食药 用真菌。现代药理学研究表明，小刺猴头菌具有提高机体耐缺氧能力和心血输出量，加速血 液循环，清除体内自由基、提高免疫力，抑制肿瘤细胞生长等功效，尤其对胃粘膜有较好的 保护作用。科研人员发现利用小刺猴头菌发酵得到的人工发酵浸膏在有效成分、药理活性 和临床作用等方面与小刺猴头子实体有很大的相似性。小刺猴头发酵浸膏除含有多糖外， 还有氨基酸、微量元素、维生素、酚类、萜类等物质，具有广泛的药理活性，现已广泛地将其 用于治疗消化不良、胃溃疡、十二指肠溃疡、食道癌、胃癌、十二指肠癌等消化系统疾病与肿 瘤的治疗中。目前已有多种来源于小刺猴头发酵浸膏的药品上市。
[0004] 目前对小刺猴头的研究都仅着眼于药品或保健食品的开发，在国内外市场上，尚 未见到利用小刺猴头菌做饲料添加剂的相关产品。
【发明内容】
[0005] 本发明目的是提供一种促生长、提供免疫能力、降低食品类动物胆固醇含量的纯 天然饲料添加剂，小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂。
[0006] 小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶培养、种子罐发 酵；发酵液经95-100°C蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏； 所述的种子罐发酵的培养基为：〇. 3%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化钠， 维生素 B1，消泡剂，余量为水； 所述的浸膏多糖含量不低于5%。
[0007] -种用于生产低胆固醇畜禽产品的饲料，它是在饲料中添加了 0. 05-0. 75%上述 的小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂； 所述的添加量为0. 3%。
[0008] 本发明提供了小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶 培养、种子罐发酵；发酵液经95-100°C蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏；在饲料中添加了 0. 05-0. 75%上述的小刺猴头发酵浸膏，能够提高肉鸡日增重，显著促进动物生长，日增重提 高了 8. 96%，提高饲料转化率，提高动物生产性能，同时还能提升禽肉的品质，降低鸡肉胆固 醇含量，肉鸡胸肌、腿肌、肝脏中胆固醇的含量分别降低30. 67%、48. 18%和57. 04%。
【具体实施方式】
[0009] 实施例1小刺猴头发酵浸膏的制备 (1)斜面菌种培养： 于无菌室超净台迅速将小刺猴头纯菌株接种到专用斜面培养基中，26-28°C下培养7-9 天，得液体摇瓶菌种；所述专用斜面培养基配方为：马铃薯100 :葡萄糖1 :磷酸二氢钾1 :琼 脂1，pH自然； 制法：将新鲜马铃薯200 g去皮切成小块加水1000 ml煮沸25分钟，用纱布过滤取滤 液，琼脂预先浸湿后加入滤液中煮沸同时不断搅拌，直至完全溶解，然后分别加入葡萄糖、 磷酸二氢钾等物质搅拌均匀，趁热分装于试管中，塞好瓶塞后置于灭菌锅灭菌，蒸汽压力 I. 1个大气压，120°C，时间30分钟，取出后自然降温至40-45°C，铺成斜面，空白培养1天， 无杂菌方可使用。
[0010] (2)摇瓶培养： 一级摇瓶接种：于无菌室超净台将所述步骤（1)中得到的液体摇瓶菌种接入摇瓶后塞 上棉塞，放摇瓶机培养； 二级摇瓶接种：于无菌室超净台迅速取下一、二级摇瓶瓶塞，将一级种子迅速倒入二级 摇瓶内，塞上棉塞，盖上纱布，系上线绳，放摇瓶机培养。
[0011] 培养条件：将一、二级摇瓶置于摇瓶机内于180-230转，26-28°C条件下振荡培养 4-7天，4°C冰箱备用，得到可作为一级种子罐的液体种子； 所述摇瓶种子培养基配方(一、二级摇瓶制法相同） 配方：3-4%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化钠，适量维生素 B1，少许消泡 剂。
[0012] 制法：将上述试剂用蒸馏水加热溶解，500 ml瓶(一级摇瓶）内装量100 ml，2000 ml瓶(二级摇瓶）内装量500 ml，塞好棉塞，装入灭菌锅于一个大气压、121°C灭菌30分钟， 冷却至室温放置一天，备用； (3) -级种子罐发酵：扣除灭菌过程中的冷凝水，然后按配方在种子罐内加入液体培养 基的原料和消泡剂，通入热蒸汽加热到120°C，0. 12-0. 13兆帕个大气压下，30-40分钟；灭 菌冷却后将步骤（2)得到的液体种子接入培养，接种量5-10%，罐温26-28°C，通气量1 :0. 5 (V/V · min)，罐压0. 05兆帕，经5-7天通气培养，菌种达到对数生长期，得到种子培养液。 所用液体培养基配方为：〇. 3%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化钠，适量维生素 B1，少许消泡剂，其余为水。
[0013] (4)发酵罐发酵：扣除灭菌过程中的冷凝水，然后按配方在发酵罐内加入发酵用培 养基原料和消泡剂，通入热蒸汽加热到120°C，0. 2兆帕个大气压下，30分钟；灭菌冷却后， 从一级种子罐内将步骤（3)得到的种子液接入发酵罐，接种量5-10%，通气培养，罐温28°C， 搅拌转速150r/m，通气量1:0. 4-0. 5 (V/V ·π?η)，罐压0. 05兆帕，培养时间5-7天，得到发 酵液。所用发酵用培养基配方为：〇. 3%葡萄糖，0. 03%ΚΗ2Ρ04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化钠，适 量维生素 B1,少许消泡剂,其余为水。
[0014] (5)发酵液加温：通蒸汽给发酵罐加温，温度加到KKTC后保持10分钟。
[0015] (6)滤液过滤：将发酵液过板框过滤，不能漏料，滤液要求澄清透明，滤液流入贮料 罐内贮存。化验多糖含量不低于5%。
[0016] 对发酵液中总糖的测定采用斐林试剂法：取发酵液Iml置于25ml比色管中，加入 2mol/L H2S0415ml，把比色管放入沸水中溶15分钟；于250ml三角瓶中加入菲林甲、乙试液 各5ml ;将沸溶后的中间体迅速冷却，用40%Na0H调pH6. 8后置入IOOml容量瓶中，反复冲 洗比色管定容；取PH6. 8的中间体5ml于备好的250ml三角瓶中，置1200W电炉使其沸腾， 从沸腾起计时1分钟；用〇. 1%葡萄糖标准液滴定；记下消耗数为y ;测定空白；250ml三角 瓶中加入菲林甲、乙液各5ml，不加中间体，直接以0. 1%葡萄糖标准液滴定，消耗数为X，然 后计算。总数=(χ-y) X2 (7)滤液浓缩为浸膏：罐温控制在6(T80°C之间，蒸汽压力0.04-0. 06兆帕左右；真空罐 真空度控制在0. 06-0. 09兆帕。在最上的加热管要露出来时加料，每次加料要少加勤加，约 30分钟。浓缩到所有的料全部进完时，将两个缸的料合在一起，放缸前将真空度下降，罐温 度提高到90°C左右。料浓缩到最上边的加热管露出取样测婆美度，然后就要勤测婆美度控 制在33-38即要出料。每次取样、放料时，先停泵，真空回零后再取样测比重。出料装桶时 取样测多糖，测定方法同（6)中发酵液中总糖的测定。料出完彻底清洗罐内。浓缩浸膏即 得所述小刺猴头发酵物饲料添加剂。
[0017] 实施例1 小刺猴头菌流浸膏的测定 本品为猴头菌属小刺猴头(Bull.:Fr.) Pers.)的发酵液 与菌丝提取液的浓缩浸膏。多糖含量不得低于5% (斐林试剂法)。本品显褐色、气微香、味 微苦。
[0018] 多糖含量：葡萄糖标准曲线制备精密称取105°c干燥至恒重的无水葡萄糖对照 品0. lg，置IOOml容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每Iml中含无水葡萄糖 Img) 〇
[0019] 标准曲线的制备精密量取葡萄糖标准溶液0. 2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、 I. 6ml，分别置于25ml量瓶中，加水至2. 0ml，分别精密加3, 5-二硝基水杨酸试液I. 5ml，混 勻，在沸水浴中加热5分钟，取出，立即用冷水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇勻，用水作 空白，按照分光光度法（《中华人民共和国药典》2005年版二部附录IV A)在520nm的波长处 测定吸光度，绘制标准曲线。
[0020] 供试品溶液的制备取本品lg，精密称定，置50ml量瓶中，加水30ml，50°C水浴加 热20分钟，取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇勻，滤过，即得。
[0021] 测定法总糖的测定精密量取供试品溶液2ml置25ml量瓶中，加6mol/L盐酸溶 液5ml，水5ml，在沸水浴中加热30分钟，冷却后加酚酞指示液1滴，用20%氢氧化钠溶液调 节至微红色，加水至刻度，滤过，精密量取滤液Iml，按照标准曲线制备项下的方法，至"加水 至2. 0ml"起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出糖的浓度值，即得。
[0022] 单糖的测定精密量取供试品溶液2ml，置IOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过， 精密吸取滤液lml，按照标准曲线制备项下的方法，至"加水至2. 0ml"起，依法测定吸光 度，从标准曲线中读出糖的浓度值，即得。
[0023] 多糖的浓度按总糖的浓度，减去单糖的浓度。
[0024] 小刺猴头发酵浸膏产品的主要理化指标选择了饲料六大养分及有效活性成分，测 定如表1。
【权利要求】
1. 小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶培养、种子罐发酵； 发酵液经95-100°C蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏。
2. 根据权利要求1所述的小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，其特征在于：所述的种子罐 发酵的培养基为：〇. 3%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化钠，维生素&，消泡剂， 余量为水。
3. 根据权利要求1所述的小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，其特征在于：所述的浸膏多 糖含量不低于5%。
4. 一种用于生产低胆固醇畜禽产品的饲料，它是在饲料中添加了 0.05-0. 75%上述的 小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂。
5. 根椐权利要求4所述的一种用于生产低胆固醇畜禽产品的饲料，其特征在于：所述 的添加量为〇. 3%。
【文档编号】A23K1/16GK104222643SQ201410486468
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月23日 优先权日:2014年9月23日
【发明者】宋惠, 尚红梅, 陈 光, 李凤才, 任桂红, 王健, 金周雨, 李雨婷, 姚旭, 沈思捷, 王丽娜, 吴波, 丁国栋, 王新宇 申请人:吉林农业大学