一种白花酸藤果组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种白花酸藤果组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导及炼苗移栽等步骤。本发明的目的在于利用组织培养技术探索出建立白花酸藤果高效离体再生体系的途径，实现白花酸藤果的快速繁殖，解决种苗短缺等问题，为白花酸藤果的工厂化生产提供技术支持，为白花酸藤果价值的实现、种质的保存、转基因的研究等奠定技术基础。
【专利说明】一种白花酸藤果组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及白花酸藤果的组织培养，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]白花酸藤果，Embelia ribes,紫金牛科，又名:信筒子、拟茶薦子、羊公板仔，小灌木，高90-120厘米，分枝，无毛，有时成蔓状，叶卵形至长椭圆形，长5-7.5厘米，宽2-2.5厘米，先端渐尖，基部圆形，全缘，无毛，下面常绿带白色；叶柄长5-7毫米，有狭边缘。圆锥花序顶生兼上部腋生，密被短柔毛；苞小；花极小，杂性，花梗长3毫米；萼小，5深裂，锐头；花瓣5，白色，长约2毫米，有缘毛；雄蕊5，花丝着生于花瓣，药卵状长椭圆形；子房上位，在雌花中呈卵形，在雄花中退化为圆锥形，花柱圆柱形，柱头头状，浆果球形，种子球形，基部有孔，花期I月，分布广东、广西等地，果实含2.45%蒽贝素，又含维生素，其干燥果实有杀绦虫作用，有效成分是蒽贝素，在印度用作避孕药，能抑制子宫内膜的碱性磷酸酶活性。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是白花酸藤果组织培养的繁殖方法，本发明方法利用组织培养技术探索出建立白花酸藤果高效离体再生体系的途径，实现白花酸藤果的快速繁殖，解决种苗短缺等问题，为白花酸藤果的工厂化生产提供技术支持，为白花酸藤果价值的实现、种质的保存、转基因的研究等奠定技术基础。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
选择生长健壮的植株，切取5cm左右的外植体茎段，每3个芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min,流水冲洗20min，浸泡于lg/L多菌灵+ lg/L百菌清+ lg/L杀毒钒溶液中，置于130r/min摇床上振荡2.5h,冲洗干净,超净工作台上70%酒精处理25s, lg/L升萊处理6min,无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌莖段接种到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度25°C，光照强度18001x，光照10h，诱导出来的芽苗长到3cm左右接入Ne+2，4-Dl.5-2.0mg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的丛生芽接入MS+IBA0.5-0.6mg/L+IAA0.5-0.6mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，光期 16h/d，温度 25。。。
[0005]采用本发明制备的白花酸藤果生根率高，利用率大，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
选择生长健壮的植株，切取5cm左右的外植体茎段，每3个芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min，流水冲洗20min，浸泡于lg/L多菌灵+ lg/L百菌清+ lg/L杀毒钒溶液中，置于130r/min摇床上振荡2.5h,冲洗干净,超净工作台上70%酒精处理25s, lg/L升萊处理6min,无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌莖段接种到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度25°C，光照强度18001x，光照10h，诱导出来的芽苗长到3cm左右接入Ne+2，4-D1.5mg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的丛生芽接入MS+IBA0.5mg/L+IAA0.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，温度25°C，生根率92%。
[0008]实施例2
选择生长健壮的植株，切取5cm左右的外植体茎段，每3个芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min，流水冲洗20min，浸泡于lg/L多菌灵+ lg/L百菌清+ lg/L杀毒钒溶液中，置于130r/min摇床上振荡2.5h,冲洗干净,超净工作台上70%酒精处理25s, lg/L升萊处理6min,无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌莖段接种到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度25°C，光照强度18001x，光照10h，诱导出来的芽苗长到3cm左右接入Ne+2，4-D2.0mg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的丛生芽接入MS+IBA0.6mg/L+IAA0.6mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，温度25°C，生根率93%。
[0009]实施例3
选择生长健壮的植株，切取5cm左右的外植体茎段，每3个芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min,流水冲洗20min，浸泡于lg/L多菌灵+ lg/L百菌清+ lg/L杀毒钒溶液中，置于130r/min摇床上振荡2.5h,冲洗干净,超净工作台上70%酒精处理25s, lg/L升萊处理6min,无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌莖段接种到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度25°C，光照强度18001x，光照10h，诱导出来的芽苗长到3cm左右接入Ne+2，4-D2.0mg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的丛生芽接入MS+IBA0.5mg/L+IAA0.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，温度25°C，生根率94%。
【权利要求】
1.一种白花酸藤果组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导及炼苗移栽等，其主要步骤如下: (1)取白花酸藤果的茎段，进行消毒处理； (2)将步骤(I)消毒处理过的无菌茎段接种到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度25°C，光照强度18001x，光照1h ； (3)取步骤(2)诱导出来的芽苗长到3cm左右接入Ne+2，4-Dl.5-2.0mg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照45001χ，光期12h/d，温度25°C ； (4)将步骤(3)培养出来的丛生芽接入MS+IBA0.5-0.6mg/L+IAA0.5-0.6mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，温度25°C。
2.按照权利要求1所述的一种白花酸藤果组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述白花酸藤果无菌茎段的获得为选择生长健壮的植株，切取5cm左右的外植体茎段，每3个芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min，流水冲洗20min，浸泡于lg/L多菌灵+ Ig/L百菌清+ lg/L杀毒钒溶液中，置于130r/min摇床上振荡2.5h，冲洗干净，超净工作台上70%酒精处理25s，lg/L升汞处理6min，无菌水冲洗干净。
【文档编号】A01H4/00GK104247663SQ201410540390
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司