一种川楝组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种川楝组织培养的快速繁殖方法，包括川楝无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导、炼苗移栽等步骤，本发明采用组织培养方法可以培育优质种苗，缩短培养周期，保存种质资源，为川楝的开发利用提供基础。
【专利说明】一种川楝组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及川楝组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]川楝，Melia 11seWa/?,又名金铃子、川楝实，中药材，为楝科落叶乔木川楝树的成熟果实。产于中国甘肃、湖北、四川、贵州和云南等省，其他省区广泛栽培；生于土壤湿润，肥沃的杂木林和疏林内，以四川产者为最佳，分布于日本、中南半岛。川楝子性寒，味苦，是行气药的一种，喜温暖湿润气候，喜阳，不耐荫蔽，在海拔IlOOm以下均可生长。有舒肝行气止痛，驱虫的药效，用于胸胁、脘腹胀痛，疝痛，虫积腹痛。而且还是制作高效无残毒无污染的新型植物性农药的重要原料，川楝子苦寒沉降，主要入肝经，疏泄肝热，行气止痛，治气郁，目前主要用种子繁殖，采用育苗移栽的方法，组织培养技术尚未见报道。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种川楝组织培养的快速繁殖方法，本发明方法采用组织培养可以培育优质种苗，缩短培养周期，保存种质资源，为川楝的开发利用提供基础。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取川楝幼嫩的叶片，流水冲洗13min,超净工作台上0.1%氯化萊消毒处理8min,无菌水冲洗6次，消毒处理过的川楝幼嫩叶片接入BL+ZT1.5mg/L+2,4-D0.2mg/L+15%丝瓜伤流液，附加0.7%琼脂和30g/L蔗糖的诱导培养基中，pH5.8，暗光照培养，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基BL+NAA1.4mg/L+ZT2.5mg/L+10%-20%丝瓜伤流液进行愈伤组织分化，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照28001x，温度25±2°C，分化出来的芽苗接入l/3MS+300-400ppm生根粉培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照60001x，温度25±2°C，将生根后的川楝放入田园土:蛭石:锯末=3:1:1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次90ppmNAA溶液，每两周喷施600倍的多菌灵溶液，温度28°C，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，每天光照时间8h，PH5.8，湿度85%，一个月后统计成活率。
[0005]采用本发明制备的川楝成活率高，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取川楝幼嫩的叶片，流水冲洗13min,超净工作台上0.1%氯化萊消毒处理8min,无菌水冲洗6次，消毒处理过的川楝幼嫩叶片接入BL+ZT1.5mg/L+2，4-D0.2mg/L+15%丝瓜伤流液，附加0.7%琼脂和30g/L蔗糖的诱导培养基中，pH5.8，暗光照培养，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基BL+NAA1.4mg/L+ZT2.5mg/L+10%丝瓜伤流液进行愈伤组织分化，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照28001x，温度25±2°C，分化出来的芽苗接入l/3MS+300ppm生根粉培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L, pH5.8，光照60001x，温度25±2°C，将生根后的川楝放入田园土:蛭石:锯末=3:1:1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次90ppmNAA溶液，每两周喷施600倍的多菌灵溶液，温度28°C，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，每天光照时间8h，PH5.8，湿度85%，一个月后统计成活率，成活率88%。
[0008]实施例2
取川楝幼嫩的叶片，流水冲洗13min,超净工作台上0.1%氯化萊消毒处理8min,无菌水冲洗6次，消毒处理过的川楝幼嫩叶片接入BL+ZT 1.5mg/L+2，4-D0.2mg/L+15%丝瓜伤流液，附加0.7%琼脂和30g/L蔗糖的诱导培养基中，pH5.8，暗光照培养，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基BL+NAA1.4mg/L+ZT2.5mg/L+20%丝瓜伤流液进行愈伤组织分化，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照28001x，温度25±2°C，分化出来的芽苗接入l/3MS+400ppm生根粉培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L, pH5.8，光照60001x，温度25±2°C，将生根后的川楝放入田园土:蛭石:锯末=3:1:1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次90ppmNAA溶液，每两周喷施600倍的多菌灵溶液，温度28°C，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，每天光照时间8h，PH5.8，湿度85%，一个月后统计成活率，成活率89%。
[0009]实施例3
取川楝幼嫩的叶片，流水冲洗13min,超净工作台上0.1%氯化萊消毒处理8min,无菌水冲洗6次，消毒处理过的川楝幼嫩叶片接入BL+ZT1.5mg/L+2,4-D0.2mg/L+15%丝瓜伤流液，附加0.7%琼脂和30g/L蔗糖的诱导培养基中，pH5.8，暗光照培养，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基BL+NAA1.4mg/L+ZT2.5mg/L+20%丝瓜伤流液进行愈伤组织分化，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照28001x，温度25±2°C，分化出来的芽苗接入l/3MS+300ppm生根粉培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L, pH5.8，光照60001x，温度25±2°C，将生根后的川楝放入田园土:蛭石:锯末=3:1:1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次90ppmNAA溶液，每两周喷施600倍的多菌灵溶液，温度28°C，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，每天光照时间8h，PH5.8，湿度85%，一个月后统计成活率，成活率90%。
【权利要求】
1.一种川楝组织培养的快速繁殖方法，包括川楝无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取川楝幼嫩的叶片，对其进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的川楝幼嫩叶片接入BL+ZT1.5mg/L+2,4-D0.2mg/L+15%丝瓜伤流液，附加0.7%琼脂和30g/L蔗糖的诱导培养基中，pH5.8，暗光照培养，温度25±2°C; (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织放入培养基BL+NAA1.4mg/L+ZT2.5mg/L+10%-20%丝瓜伤流液进行愈伤组织分化，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照28001x，温度25±2°C ； (4)取步骤(3)分化出来的芽苗接入l/3MS+300-400ppm生根粉培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，ρΗ5.8，光照60001χ，温度25±2°C ； (5)取步骤(4)的试管苗进行炼苗移栽。
2.按照权利要求1所述的一种川楝组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述川楝无菌叶片的获得为，取川楝幼嫩的叶片，流水冲洗13min，超净工作台上0.1%氯化萊消毒处理8min,无菌水冲洗6次。
3.按照权利要求1所述的一种川楝组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)和(3)中愈伤诱导和分化培养基中加入了丝瓜伤流液可以促进愈伤组织的诱导和分化。
4.按照权利要求1所述的一种川楝组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中川楝炼苗移栽的方法为将生根后的川楝放入田园土:蛭石:锯末=3:1:1基质中，使用自动喷水装置，每三天喷洒一次90ppmNAA溶液，每两周喷施600倍的多菌灵溶液，温度28°C，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，每天光照时间8h，PH5.8，湿度85%，一个月后统计成活率。
【文档编号】A01H4/00GK104221867SQ201410540359
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司