本发明属于快速育苗技术领域，具体涉及一种快速繁育杨树苗的方法。
背景技术：
杨树对环境的适应能力强，在我国分布广泛，无论是肥沃的土地还是贫瘠的山地，均能很好的生长。杨树具有很高的经济使用价值和环保价值，其主干通直、材质细密、生长快，是纸浆材原料林的重要树种之一，也是优良水源涵养林和主要防护林带的造林树种之一。但由于许多杨树嫁接成活率低、扦插生根困难，难以采用常规的无性繁殖方法进行增殖，影响了杨树的大面积推广。
为了有效的解决这一难题，我国的学者开始尝试使用组织培养的方法对杨树进行增殖。传统的杨数组培快繁方法，需通过愈伤组织诱导及多次分化继代，通常需要至少4个月的培养，才可分化出苗，不仅分化次数多，耗时长，效率低，而且变异率较高，操作繁琐，污染机率大。因此，迫切需要技术方法上的改进革新，以节约资源消耗，提高杨树组培效率。
技术实现要素：
为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种快速繁育杨树苗的方法，不更换或只更换一次培养基，有效减少了常规杨树组织培养过程中多次转接造成的污染，简化了杨树组培苗生产的程序，节约成本，成苗率高，显著缩短了杨树组培苗的生产周期，适用于杨树种苗工厂化快速繁殖。
本发明所采用的技术方案为：一种快速繁育杨树苗的方法，包括以下步骤：
A、外植体灭菌处理：取外植体并做灭菌处理，得到脱毒外植体；
B、黑暗条件培养：无菌条件下，将步骤A得到的所述脱毒外植体接种在成苗培养基上，并置于22-28℃的黑暗条件下培养7-10天；
C、光照条件培养：黑暗条件培养后，将所述脱毒外植体连同所述成苗培养基转入22-28℃的光照条件下培养43-60天，光照条件为1600-2000Lux，每天光照时间为10-16小时；即可得到带根的杨树苗。
采用所述快速繁育杨树苗的方法，只需要50-70天即可得到带根的杨树苗，极大地缩短了杨树组培苗的生产周期，适用于杨树种苗工厂化快速繁殖。
本发明中的所述外植体为作为离体培养材料的杨树器官或组织的片段。在本发明中，所述外植体为杨树半木质化嫩枝或杨树顶芽下2-3片的叶片。半木质化嫩枝或顶芽叶片具有代谢旺盛，再生能力强的优点。
所述成苗培养基是使用MS培养基为基础，并添加蔗糖、6-BA、NAA和琼脂得到，所述成苗培养基中蔗糖的浓度为30g/L，6-BA的浓度为0.1-0.2mg/L，NAA浓度为0.05-0.1mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L。
6-BA是6-苄氨基腺嘌呤，别名：6-苄氨基嘌呤、细胞分裂素；
NAA是萘乙酸(1-Naphthylacetic acid)，是一种有机化合物，是一种易溶于有机溶剂的无色固体。
进一步地，所述成苗培养基中6-BA的浓度为0.15mg/L，NAA浓度为0.05mg/L。
上述添加剂及浓度，是本申请的发明人经过试验配伍，得出的较优培养基成分选择，当然，本领域技术人员也能够自行调配其他成分的成苗培养基，在此就不在赘述。
为了促使外植体更好地生根，优选的技术方案是，步骤C中，将所述脱毒外植体在所述成苗培养基上培养33-40天后，将所述脱毒外植体转移至生根培养基中培养10-20天，即可得到带根的杨树苗。
所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.4-0.6mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L。1/2MS培养基为将MS培养基中所有成分的浓度减为1/2得到。
IBA(Indole-3-Butytric acid)为吲哚丁酸。
进一步地，所述生根培养基中IBA的浓度为0.5mg/L。
上述添加剂及浓度，是本申请的发明人经过试验配伍，得出的较优培养基成分选择，当然，本领域技术人员也能够自行调配其他成分的成苗培养基，在此就不在赘述。
为了使杨树苗迅速适应陆地的环境条件，优选的技术方案是，在步骤C之后，还包括步骤D、练苗：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
步骤A中，消毒处理为将所述外植体依次使用流水、酒精溶液和次氯酸钠溶液冲洗后，使用滤纸吸干外植体表面水分后得到脱毒外植体。
进一步地，所述酒精溶液的体积分数为75％，所述次氯酸钠溶液中有效氯含量为1.1-1.3％，在酒精溶液和次氯酸钠溶液冲洗后，均使用无菌水对所述外植体进行冲洗。
本发明的有益效果为：本发明提供了一种快速繁育杨树苗的方法，不更换或只更换一次培养基，有效减少了常规杨树组织培养过程中多次转接造成的污染，简化了杨树组培苗生产的程序，节约成本，成苗率高，显著缩短了杨树组培苗的生产周期，适用于杨树种苗工厂化快速繁殖。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1
一种快速繁育杨树苗的方法，包括以下步骤：
A、外植体灭菌处理：取杨树半木质化嫩枝作为外植体，将所述外植体使用含有洗涤剂的水中浸泡1分钟，然后使用流水冲洗40分钟，再使用体积分数为75％的酒精溶液冲洗20秒，再用无菌水冲洗2次，然后用有效氯含量为1.3％的次氯酸钠溶液处理8分钟，再用无菌水清洗5次，最后用滤纸吸干外植体表面水分后得到脱毒外植体；
B、黑暗条件培养：无菌条件下，将步骤A得到的所述脱毒外植体接种在成苗培养基上，并置于22℃的黑暗条件下培养10天；所述成苗培养基是使用MS培养基为基础，并添加蔗糖、6-BA、NAA和琼脂得到，所述成苗培养基中蔗糖的浓度为30g/L，6-BA的浓度为0.1mg/L，NAA浓度为0.1mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
C、光照条件培养：黑暗条件培养后，将所述脱毒外植体连同所述成苗培养基转入22℃的光照条件下培养60天，光照条件为1600Lux，每天光照时间为16小时；即可得到带根的杨树苗。
实施例2
一种快速繁育杨树苗的方法，包括以下步骤：
A、外植体灭菌处理：取杨树半木质化嫩枝作为外植体，将所述外植体使用含有洗涤剂的水中浸泡2分钟，然后使用流水冲洗20分钟，再使用体积分数为75％的酒精溶液冲洗40秒，再用无菌水冲洗3次，然后用有效氯含量为1.1％的次氯酸钠溶液处理12分钟，再用无菌水清洗4次，最后用滤纸吸干外植体表面水分后得到脱毒外植体；
B、黑暗条件培养：无菌条件下，将步骤A得到的所述脱毒外植体接种在成苗培养基上，并置于28℃的黑暗条件下培养7天；所述成苗培养基是使用MS培养基为基础，并添加蔗糖、6-BA、NAA和琼脂得到，所述成苗培养基中蔗糖的浓度为30g/L，6-BA的浓度为0.2mg/L，NAA浓度为0.05mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
C、光照条件培养：黑暗条件培养后，将所述脱毒外植体连同所述成苗培养基转入28℃的光照条件下培养43天，光照条件为2000Lux，每天光照时间为10小时；即可得到带根的杨树苗；
D、练苗：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
实施例3
一种快速繁育杨树苗的方法，包括以下步骤：
A、外植体灭菌处理：取杨树杨树顶芽下2-3片的叶片作为外植体，并将叶片从垂直于叶脉的方向剪3刀，伤口长度剪过叶片主脉，将所述外植体使用含有洗涤剂的水中浸泡1分钟，然后使用流水冲洗30分钟，再使用体积分数为75％的酒精溶液冲洗30秒，再用无菌水冲洗3次，然后用有效氯含量为1.2％的次氯酸钠溶液处理10分钟，再用无菌水清洗5次，最后用滤纸吸干外植体表面水分后得到脱毒外植体；
B、黑暗条件培养：无菌条件下，将步骤A得到的所述脱毒外植体接种在成苗培养基上，并置于25℃的黑暗条件下培养8天；所述成苗培养基是使用MS培养基为基础，并添加蔗糖、6-BA、NAA和琼脂得到，所述成苗培养基中蔗糖的浓度为30g/L，6-BA的浓度为0.15mg/L，NAA浓度为0.05mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
C、光照条件培养：黑暗条件培养后，将所述脱毒外植体连同所述成苗培养基转入25℃的光照条件下培养46天，光照条件为1800Lux，每天光照时间为13小时；即可得到带根的杨树苗；
D、练苗：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
实施例4
一种快速繁育杨树苗的方法，包括以下步骤：
A、外植体灭菌处理：取杨树杨树顶芽下2-3片的叶片作为外植体，并将叶片从垂直于叶脉的方向剪3刀，伤口长度剪过叶片主脉，将所述外植体使用含有洗涤剂的水中浸泡1分钟，然后使用流水冲洗40分钟，再使用体积分数为75％的酒精溶液冲洗20秒，再用无菌水冲洗2次，然后用有效氯含量为1.3％的次氯酸钠溶液处理8分钟，再用无菌水清洗5次，最后用滤纸吸干外植体表面水分后得到脱毒外植体；
B、黑暗条件培养：无菌条件下，将步骤A得到的所述脱毒外植体接种在成苗培养基上，并置于22℃的黑暗条件下培养10天；所述成苗培养基是使用MS培养基为基础，并添加蔗糖、6-BA、NAA和琼脂得到，所述成苗培养基中蔗糖的浓度为30g/L，6-BA的浓度为0.1mg/L，NAA浓度为0.1mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
C、光照条件培养：黑暗条件培养后，将所述脱毒外植体连同所述成苗培养基转入22℃的光照条件下培养40天后，将所述脱毒外植体转移至生根培养基中培养20天，所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.4mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L，光照条件为1600Lux，每天光照时间为16小时；即可得到带根的杨树苗；
实施例5
一种快速繁育杨树苗的方法，包括以下步骤：
A、外植体灭菌处理：取杨树杨树顶芽下2-3片的叶片作为外植体，并将叶片从垂直于叶脉的方向剪3刀，伤口长度剪过叶片主脉，将所述外植体使用含有洗涤剂的水中浸泡2分钟，然后使用流水冲洗20分钟，再使用体积分数为75％的酒精溶液冲洗40秒，再用无菌水冲洗3次，然后用有效氯含量为1.1％的次氯酸钠溶液处理12分钟，再用无菌水清洗4次，最后用滤纸吸干外植体表面水分后得到脱毒外植体；
B、黑暗条件培养：无菌条件下，将步骤A得到的所述脱毒外植体接种在成苗培养基上，并置于28℃的黑暗条件下培养7天；所述成苗培养基是使用MS培养基为基础，并添加蔗糖、6-BA、NAA和琼脂得到，所述成苗培养基中蔗糖的浓度为30g/L，6-BA的浓度为0.2mg/L，NAA浓度为0.05mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
C、光照条件培养：黑暗条件培养后，将所述脱毒外植体连同所述成苗培养基转入22℃的光照条件下培养33天后，将所述脱毒外植体转移至生根培养基中培养10天，所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.6mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L，光照条件为1600Lux，每天光照时间为16小时；即可得到带根的杨树苗；
D、练苗：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
实施例6
一种快速繁育杨树苗的方法，包括以下步骤：
A、外植体灭菌处理：取杨树半木质化嫩枝作为外植体，将所述外植体使用含有洗涤剂的水中浸泡1分钟，然后使用流水冲洗30分钟，再使用体积分数为75％的酒精溶液冲洗30秒，再用无菌水冲洗3次，然后用有效氯含量为1.2％的次氯酸钠溶液处理10分钟，再用无菌水清洗5次，最后用滤纸吸干外植体表面水分后得到脱毒外植体；
B、黑暗条件培养：无菌条件下，将步骤A得到的所述脱毒外植体接种在成苗培养基上，并置于25℃的黑暗条件下培养8天；所述成苗培养基是使用MS培养基为基础，并添加蔗糖、6-BA、NAA和琼脂得到，所述成苗培养基中蔗糖的浓度为30g/L，6-BA的浓度为0.15mg/L，NAA浓度为0.05mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
C、光照条件培养：黑暗条件培养后，将所述脱毒外植体连同所述成苗培养基转入22℃的光照条件下培养37天后，将所述脱毒外植体转移至生根培养基中培养15天，所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.5mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L，光照条件为1600Lux，每天光照时间为16小时；即可得到带根的杨树苗。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。