本发明涉及植物组织培养及脱毒领域，尤其涉及烟薯25的高效脱毒育苗方法。
背景技术：
甘薯是一种营养丰富、适应性广、抗逆性强、用途广泛的作物，富含多种维生素，俗称“土人参”。现已培育出多个甘薯品种，其中，烟薯25这一品种因具有产量高、口味好、抗病性强、适应性强的特点成为了优质的食用型品种，但是烟薯25属于块根作物，生长过程中利用营养体进行繁殖，因此容易受到病毒的侵染，病毒侵染会导致产量下降、品质恶劣，甚至失去商品价值。但是由于病毒在植物体内的分布规律是，离分生组织越远病毒密度越高，反之则越低，因此可以利用茎尖分生组织培养生产无毒烟薯25苗。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术的不足，而提供烟薯25的高效脱毒育苗方法。
本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：烟薯25的高效脱毒育苗方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)选取无虫蛀、无损伤的烟薯25薯块，在太阳下暴晒2～3天，然后用清水洗净，埋入经过消毒的细沙中，细沙的覆盖厚度为5cm，放入培养箱中进行催芽；
(2)当芽苗长到15～20cm时，剪取生长旺盛的1～2cm的茎尖，剪去肉眼可见的叶片，先用清水冲洗，然后在超净工作台内用乙醇和升汞溶液浸泡进行表面消毒，最后用无菌水漂洗；
(3)在体视解剖镜下，将消毒后的茎尖置于载玻片上，用解剖针剥取带有1～2个叶原基的茎尖，接种到添加生长调节剂的MS培养基上进行培养，培养温度30℃，湿度50％，光照强度2000～3000Lx，光照时间12～16h/d；
(4)当幼芽长到4cm时，从基部切下，转移到不添加生长调节剂的MS培养基中进行培育，培养温度为25℃，光照强度2000～3000Lx，光照时间16h/d，使其发育成带有4～5个叶片的植株；
(5)用血清法对植株进行病毒检测，去除仍带有病毒的植株；
(6)以经过病毒检测脱除病毒的无毒苗1～2个叶节为一个切断，扦插入新的不添加生长调节剂的MS培养基中，以扩大繁殖，培养温度为25～27℃，光照强度2000～3000Lx，光照时间13h/d，；
(7)无毒苗进行培育一个月之后，洗去附着在植株根部的培养基，分单株直接栽植于塑料大棚的土壤中，株间距25cm，在塑料大棚两端加防虫网；
(8)栽植后的植株苗，大水浇透，移栽后的两周，每天10:00～15:00搭遮阴网，两周后撤去遮阴网，中午放风，移栽三周后撒施尿素随即浇水，促进幼苗生长。
特别的，所述步骤(1)中的烟薯25薯块在培养箱中进行催芽时，出芽前黑暗培养，出芽后光照13h/d，光照强度2000Lx，并根据细沙的湿度进行喷水。
特别的，所述步骤(3)中的生长调节剂添加量为：萘乙酸0.2mg/L和6-苄氨基嘌呤2.0mg/L。
本发明的有益效果是：本发明中的无毒烟薯25苗培育过程简单，可操作性强，培育步骤合理，可以获得成活率较高的无毒烟薯25苗，提高了无毒苗的产量与质量，并且在培育过程中，选用了MS培养基，MS培养基中含有的甘氨酸、烟酸、VB1、VB6和肌醇五种物质对于烟薯25茎尖生长是必须的，保证了烟薯25茎尖培养的成活率，并且在茎尖培育的初期添加了植物生长剂，益于烟薯25茎尖的生长和分化。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
实施例1
烟薯25的高效脱毒育苗方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)选取无虫蛀、无损伤的烟薯25薯块，在太阳下暴晒2天，然后用清水洗净，埋入经过消毒的细沙中，细沙的覆盖厚度为5cm，放入培养箱中进行催芽，出芽前黑暗培养，出芽后光照13h/d，光照强度2000Lx，并根据细沙的湿度进行喷水；
(2)当芽苗长到15cm时，剪取生长旺盛的1cm的茎尖，剪去肉眼可见的叶片，先用清水冲洗，然后在超净工作台内用70％的乙醇浸泡10s，再用0.1％的升汞溶液浸泡5min进行表面消毒，最后用无菌水漂洗3遍；
(3)在体视解剖镜下，将消毒后的茎尖置于载玻片上，用解剖针剥取带有1个叶原基的茎尖，接种到添加生长调节剂的MS培养基上进行培养，生长调节剂添加量为：萘乙酸0.2mg/L和6-苄氨基嘌呤2.0mg/L，培养温度30℃，湿度50％，光照强度2000Lx，光照时间12h/d；
(4)当幼芽长到4cm时，从基部切下，转移到不添加生长调节剂的MS培养基中进行培育，培养温度为25℃，光照强度2000LX，光照时间16h/d，使其发育成带有4个叶片的植株；
(5)用血清法对小植株进行病毒检测，去除仍带有病毒的植株；
(6)以经过病毒检测脱除病毒的无毒苗1个叶节为一个切断，扦插入新的不添加生长调节剂的MS培养基中，以扩大繁殖，培养温度为25℃，光照强度2000LX，光照时间13h/d，；
(7)无毒苗进行培育一个月之后，洗去附着在植株根部的培养基，分单株直接栽植于塑料大棚的土壤中，株间距25cm，在塑料大棚两端加防虫网；
(8)栽植后的植株苗，大水浇透，移栽后的两周，每天10:00～15:00搭遮阴网，两周后撤去遮阴网，中午放风，移栽三周后撒施尿素随即浇水，促进幼苗生长。
实施例2
烟薯25的高效脱毒育苗方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)选取无虫蛀、无损伤的烟薯25薯块，在太阳下暴晒3天，然后用清水洗净，埋入经过消毒的细沙中，细沙的覆盖厚度为5cm，放入培养箱中进行催芽，出芽前黑暗培养，出芽后光照13h/d，光照强度2000Lx，并根据细沙的湿度进行喷水；
(2)当芽苗长到20cm时，剪取生长旺盛的2侧面的茎尖，剪去肉眼可见的叶片，先用清水冲洗，然后在超净工作台内用70％的乙醇浸泡20s，再用0.1％的升汞溶液浸泡7min进行表面消毒，最后用无菌水漂洗5遍；
(3)在体视解剖镜下，将消毒后的茎尖置于载玻片上，用解剖针剥取带有2个叶原基的茎尖，接种到添加生长调节剂的MS培养基上进行培养，生长调节剂添加量为：萘乙酸0.2mg/L和6-苄氨基嘌呤2.0mg/L，培养温度30℃，湿度50％，光照强度3000Lx，光照时间16h/d；
(4)当幼芽长到4cm时，从基部切下，转移到不添加生长调节剂的MS培养基中进行培育，培养温度为25℃，光照强度3000LX，光照时间16h/d，使其发育成带有5个叶片的植株；
(5)用血清法对小植株进行病毒检测，去除仍带有病毒的植株；
(6)以经过病毒检测脱除病毒的无毒苗2个叶节为一个切断，扦插入新的不添加生长调节剂的MS培养基中，以扩大繁殖，培养温度为27℃，光照强度3000LX，光照时间13h/d，；
(7)无毒苗进行培育一个月之后，洗去附着在植株根部的培养基，分单株直接栽植于塑料大棚的土壤中，株间距25cm，在塑料大棚两端加防虫网；
(8)栽植后的植株苗，大水浇透，移栽后的两周，每天10:00～15:00搭遮阴网，两周后撤去遮阴网，中午放风，移栽三周后撒施尿素随即浇水，促进幼苗生长。
上面对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。