本发明属于藻类培养技术领域，尤其涉及一种浒苔专用营养液，还涉及一种上述浒苔专用营养液的制备方法。
背景技术：
浒苔是绿藻门石莼科的一属，约有40种，中国约有11种。中国常见种类有缘管浒苔、扁浒苔、条浒苔，多数种类海产，广泛分布在全世界各海洋中，有的种类在半咸水或江河中也可见到。浒苔常生长在潮间带岩石上，泥沙滩的石砾上，有时也可附生在大型海藻的藻体上。由于全球气候变化、水体富营养化等原因，造成海洋大型海藻浒苔绿潮暴发。浒苔虽然无毒，但是和赤潮一样，大量繁殖的浒苔也能遮蔽阳光，影响海底藻类的生长；死亡的浒苔也会消耗海水中的氧气；还有研究表明，浒苔分泌的化学物质很可能还会对其他海洋生物造成不利影响。此外，浒苔爆发还会严重影响景观，干扰旅游观光和水上运动的进行。
浒苔常生长在潮间带岩石上或石沼中，或泥沙滩的石砾上，有时也可附生在大型海藻的藻体上。这样的生长环境下，浒苔不可避免地与很多杂藻及杂菌存在着共生关系，因此，从野外采回的浒苔藻样，即使在实验室中培养很长一段时间，也无法达到无菌效果。但是在针对浒苔的研究中，对于藻间相互作用和针对藻体的微观研究，都需要以无菌藻为实验材料，才能确保浒苔研究的可靠性，因此，获得无菌藻种对于实验室中浒苔研究至关重要。目前，浒苔的无菌化培养主要采用消毒法、物理法、抗生素法等，然而其无菌化培养的效果不佳，而且会在一定程度上影响浒苔的生长。
技术实现要素：
本发明的目的之一是提供一种浒苔专用营养液的制备方法，其是根据浒苔的生长特点制备的，其无菌化培养效果好，而且有利于浒苔的生长。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种浒苔专用营养液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将待用海水放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃条件下灭菌20-30分钟；
(2)每1L灭菌后的海水中添加0.04-0.05g NaNO3、0.01g Na2HPO4·12H2O、0.02mg MnCL2·4H2O、0.25-0.3mg FeSO4·7H2O、3.5-4mgNa2EDTA，混合均匀后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀；
(3)称取以下质量份数的各组分：天胡荽32-37份、仙人掌30-35份、洋葱30-35份、鱼腥草27-33份、蛇床子21-28份、淡竹叶21-26份、蒲公英20-27份、夏枯草18-25份、虎耳草17-21份、薄荷油9-15份、大蒜14-20份、木槿皮12-18份、苍耳子11-17份、山柰10-17份、大乌泡根8-15份、防风草7-15份、莲心6-10份、桑叶6-10份、黄柏皮5-9份、糯稻根5-9份；
(4)将称量好的天胡荽、仙人掌、洋葱捣碎或粉碎取所得汁液；
(5)将称量好的鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜分别粉碎，加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的15倍的清水，20-30℃浸泡5-6h后，加热至沸腾并文火煎煮1h，分离取出煎出液；继续向药物残渣中加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的10倍的清水，加热至沸腾并文火煎煮1h，合并两次煎出液即为提取液；
(6)将称量好的木槿皮、苍耳子、山柰、大乌泡根、防风草、莲心、桑叶、黄柏皮、糯稻根装入球磨机充分研磨，过80目筛，得研磨粉；
(7)将称量好的薄荷油、步骤(4)所得的汁液以及步骤(5)得到的提取液与步骤(6)得到的研磨粉放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；将萃取液在外循环浓缩器中浓缩，浓缩条件为：压力0.03Mpa，温度70℃，浓缩至相对密度为1.12～1.14的浸膏；
(8)向每升步骤(2)所得的海水中加入1-1.2g步骤(7)所得的浸膏，并混合均匀，即得目标物。
本发明的浒苔专用营养液是根据浒苔生长特点研制的，其营养价值高，含有浒苔生长所必须的微量元素和营养元素，而且营养容易被浒苔吸收，利于浒苔的生长。步骤(1)的操作目的是杀灭海水中的细菌。步骤(2)和步骤(3)的组分以上述特定比例和制备方法制备所得的浒苔营养液营养丰富，能满足浒苔生长需要，促进浒苔快速生长，而且能抑制其他细菌或海藻生长，成功得到无菌浒苔，有利于浒苔后续的实验室研究。步骤(4)中将称量好的天胡荽、仙人掌、洋葱捣碎或粉碎的目的是有利于天胡荽、仙人掌、洋葱中的抑菌成分和营养成分在后续萃取步骤中更好的发挥作用。步骤(5)中，将称量好的鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜粉碎的作用是有利于浸泡和煎煮过程中各组分的有效成分更充分的析出，用清水20-30℃浸泡5-6h是为了使各组分的有效成分更容易析出，煎煮的作用是可以改变药物的刺激性作用，较温和的作用于浒苔。步骤(6)中，将木槿皮、苍耳子、山柰、大乌泡根、防风草、莲心、桑叶、黄柏皮、糯稻根装入球磨机充分研磨可以使药材中的有效成分在后续步骤更充分的析出。步骤(7)中，超临界萃取步骤可以最大限度的保留本发明中各组分的有效成分。将野外采集的浒苔用本发明的营养液在实验室中进行无菌化培养，实验研究表明，无菌化培养过程中浒苔生长速度快，浒苔颜色鲜绿，将无菌化培养的成熟藻体平铺于LB固体培养基表面，培养10天，未有杂菌生长。
优选地，步骤(2)中，每1L灭菌后的培养海水中添加0.042g NaNO3、0.01gNa2HPO4·12H2O、0.02mg MnCL2·4H2O、0.28mg FeSO4·7H2O、3.7mgNa2EDTA，混合均匀，然后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀。
优选地，步骤(2)中，每1L灭菌后的培养海水中添加0.05g NaNO3、0.01gNa2HPO4·12H2O、0.02mg MnCL2·4H2O、0.25mg FeSO4·7H2O、3.8mgNa2EDTA，混合均匀，然后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀。
优选地，步骤(2)中，每1L灭菌后的培养海水中添加0.043g NaNO3、0.01gNa2HPO4·12H2O、0.02mg MnCL2·4H2O、0.3mg FeSO4·7H2O、4mgNa2EDTA，混合均匀，然后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀。
优选地，步骤(3)中，称取以下质量份数的各组分：天胡荽32份、仙人掌33份、洋葱30份、鱼腥草33份、蛇床子28份、淡竹叶25份、蒲公英27份、夏枯草18份、虎耳草17份、薄荷油9份、大蒜15份、木槿皮12份、苍耳子17份、山柰16份、大乌泡根15份、防风草14份、莲心10份、桑叶10份、黄柏皮9份、糯稻根8份。
优选地，步骤(3)中，称取以下质量份数的各组分：天胡荽34份、仙人掌30份、洋葱33份、鱼腥草31份、蛇床子25份、淡竹叶26份、蒲公英25份、夏枯草25份、虎耳草21份、薄荷油12份、大蒜14份、木槿皮15份、苍耳子11份、山柰14份、大乌泡根8份、防风草15份、莲心9份、桑叶9份、黄柏皮8份、糯稻根9份。
优选地，步骤(3)中，称取以下质量份数的各组分：天胡荽35份、仙人掌35份、洋葱32份、鱼腥草27份、蛇床子23份、淡竹叶22份、蒲公英20份、夏枯草20份、虎耳草18份、薄荷油15份、大蒜17份、木槿皮18份、苍耳子12份、山柰17份、大乌泡根10份、防风草7份、莲心6份、桑叶6份、黄柏皮5份、糯稻根7份。
优选地，步骤(3)中，称取以下质量份数的各组分：天胡荽37份、仙人掌32份、洋葱35份、鱼腥草29份、蛇床子21份、淡竹叶21份、蒲公英22份、夏枯草21份、虎耳草20份、薄荷油11份、大蒜20份、木槿皮16份、苍耳子15份、山柰10份、大乌泡根12份、防风草10份、莲心8份、桑叶8份、黄柏皮7份、糯稻根5份。
本发明还公开了一种上述制备方法所制得的浒苔专用营养液。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明的浒苔专用营养液是根据浒苔生长特点研制的，其营养价值高，含有浒苔生长所必须的微量元素和营养元素，而且营养容易被浒苔吸收，利于浒苔的生长。步骤(1)的操作目的是杀灭海水中的细菌。步骤(2)和步骤(3)的组分以上述特定比例和制备方法制备所得的浒苔营养液营养丰富，能满足浒苔生长需要，促进浒苔快速生长，而且能抑制其他细菌或海藻生长，成功得到无菌浒苔，有利于浒苔后续的实验室研究。步骤(4)中将称量好的天胡荽、仙人掌、洋葱捣碎或粉碎的目的是有利于天胡荽、仙人掌、洋葱中的抑菌成分和营养成分在后续萃取步骤中更好的发挥作用。步骤(5)中，将称量好的鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜粉碎的作用是有利于浸泡和煎煮过程中各组分的有效成分更充分的析出，用清水20-30℃浸泡5-6h是为了使各组分的有效成分更容易析出，煎煮的作用是可以改变药物的刺激性作用，较温和的作用于浒苔。步骤(6)中，将木槿皮、苍耳子、山柰、大乌泡根、防风草、莲心、桑叶、黄柏皮、糯稻根装入球磨机充分研磨可以使药材中的有效成分在后续步骤更充分的析出。步骤(7)中，超临界萃取步骤可以最大限度的保留本发明中各组分的有效成分。将野外采集的浒苔用本发明的营养液在实验室中进行无菌化培养，实验研究表明，无菌化培养过程中浒苔生长速度快，浒苔颜色鲜绿，将无菌化培养的成熟藻体平铺于LB固体培养基表面，培养10天，未有杂菌生长。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1
一种浒苔专用营养液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将待用海水放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃条件下灭菌20-30分钟；
(2)每1L灭菌后的海水中添加0.04g NaNO3、0.01g Na2HPO4·12H2O、0.02mgMnCL2·4H2O、0.26mg FeSO4·7H2O、3.5mgNa2EDTA，混合均匀后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀；
(3)称取以下质量份数的各组分：天胡荽37份、仙人掌32份、洋葱35份、鱼腥草29份、蛇床子21份、淡竹叶21份、蒲公英22份、夏枯草21份、虎耳草20份、薄荷油11份、大蒜20份、木槿皮16份、苍耳子15份、山柰10份、大乌泡根12份、防风草10份、莲心8份、桑叶8份、黄柏皮7份、糯稻根5份；
(4)将称量好的天胡荽、仙人掌、洋葱捣碎或粉碎取所得汁液；
(5)将称量好的鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜分别粉碎，加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的15倍的清水，20-30℃浸泡5-6h后，加热至沸腾并文火煎煮1h，分离取出煎出液；继续向药物残渣中加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的10倍的清水，加热至沸腾并文火煎煮1h，合并两次煎出液即为提取液；
(6)将称量好的木槿皮、苍耳子、山柰、大乌泡根、防风草、莲心、桑叶、黄柏皮、糯稻根装入球磨机充分研磨，过80目筛，得研磨粉；
(7)将称量好的薄荷油、步骤(4)所得的汁液以及步骤(5)得到的提取液与步骤(6)得到的研磨粉放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；将萃取液在外循环浓缩器中浓缩，浓缩条件为：压力0.03Mpa，温度70℃，浓缩至相对密度为1.12～1.14的浸膏；
(8)向每升步骤(2)所得的海水中加入1-1.2g步骤(7)所得的浸膏，并混合均匀，即得目标物。
一种上述制备方法所制得的浒苔专用营养液。
实施例2
一种浒苔专用营养液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将待用海水放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃条件下灭菌20-30分钟；
(2)每1L灭菌后的海水中添加0.042g NaNO3、0.01gNa2HPO4·12H2O、0.02mgMnCL2·4H2O、0.28mg FeSO4·7H2O、3.7mgNa2EDTA，混合均匀，然后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀；
(3)称取以下质量份数的各组分：天胡荽32份、仙人掌33份、洋葱30份、鱼腥草33份、蛇床子28份、淡竹叶25份、蒲公英27份、夏枯草18份、虎耳草17份、薄荷油9份、大蒜15份、木槿皮12份、苍耳子17份、山柰16份、大乌泡根15份、防风草14份、莲心10份、桑叶10份、黄柏皮9份、糯稻根8份；
(4)将称量好的天胡荽、仙人掌、洋葱捣碎或粉碎取所得汁液；
(5)将称量好的鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜分别粉碎，加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的15倍的清水，20-30℃浸泡5-6h后，加热至沸腾并文火煎煮1h，分离取出煎出液；继续向药物残渣中加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的10倍的清水，加热至沸腾并文火煎煮1h，合并两次煎出液即为提取液；
(6)将称量好的木槿皮、苍耳子、山柰、大乌泡根、防风草、莲心、桑叶、黄柏皮、糯稻根装入球磨机充分研磨，过80目筛，得研磨粉；
(7)将称量好的薄荷油、步骤(4)所得的汁液以及步骤(5)得到的提取液与步骤(6)得到的研磨粉放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；将萃取液在外循环浓缩器中浓缩，浓缩条件为：压力0.03Mpa，温度70℃，浓缩至相对密度为1.12～1.14的浸膏；
(8)向每升步骤(2)所得的海水中加入1-1.2g步骤(7)所得的浸膏，并混合均匀，即得目标物。
一种上述制备方法所制得的浒苔专用营养液。
实施例3
一种浒苔专用营养液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将待用海水放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃条件下灭菌20-30分钟；
(2)每1L灭菌后的海水中添加0.05g NaNO3、0.01gNa2HPO4·12H2O、0.02mgMnCL2·4H2O、0.25mg FeSO4·7H2O、3.8mgNa2EDTA，混合均匀，然后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀；
(3)称取以下质量份数的各组分：天胡荽34份、仙人掌30份、洋葱33份、鱼腥草31份、蛇床子25份、淡竹叶26份、蒲公英25份、夏枯草25份、虎耳草21份、薄荷油12份、大蒜14份、木槿皮15份、苍耳子11份、山柰14份、大乌泡根8份、防风草15份、莲心9份、桑叶9份、黄柏皮8份、糯稻根9份；
(4)将称量好的天胡荽、仙人掌、洋葱捣碎或粉碎取所得汁液；
(5)将称量好的鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜分别粉碎，加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的15倍的清水，20-30℃浸泡5-6h后，加热至沸腾并文火煎煮1h，分离取出煎出液；继续向药物残渣中加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的10倍的清水，加热至沸腾并文火煎煮1h，合并两次煎出液即为提取液；
(6)将称量好的木槿皮、苍耳子、山柰、大乌泡根、防风草、莲心、桑叶、黄柏皮、糯稻根装入球磨机充分研磨，过80目筛，得研磨粉；
(7)将称量好的薄荷油、步骤(4)所得的汁液以及步骤(5)得到的提取液与步骤(6)得到的研磨粉放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；将萃取液在外循环浓缩器中浓缩，浓缩条件为：压力0.03Mpa，温度70℃，浓缩至相对密度为1.12～1.14的浸膏；
(8)向每升步骤(2)所得的海水中加入1-1.2g步骤(7)所得的浸膏，并混合均匀，即得目标物。
一种上述制备方法所制得的浒苔专用营养液。
实施例4
一种浒苔专用营养液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将待用海水放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃条件下灭菌20-30分钟；
(2)每1L灭菌后的海水中添加0.043g NaNO3、0.01gNa2HPO4·12H2O、0.02mgMnCL2·4H2O、0.3mg FeSO4·7H2O、4mgNa2EDTA，混合均匀，然后加入0.2mgVB1、0.001mgVB12、0.001mg生物素，混合均匀；
(3)称取以下质量份数的各组分：天胡荽35份、仙人掌35份、洋葱32份、鱼腥草27份、蛇床子23份、淡竹叶22份、蒲公英20份、夏枯草20份、虎耳草18份、薄荷油15份、大蒜17份、木槿皮18份、苍耳子12份、山柰17份、大乌泡根10份、防风草7份、莲心6份、桑叶6份、黄柏皮5份、糯稻根7份；
(4)将称量好的天胡荽、仙人掌、洋葱捣碎或粉碎取所得汁液；
(5)将称量好的鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜分别粉碎，加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的15倍的清水，20-30℃浸泡5-6h后，加热至沸腾并文火煎煮1h，分离取出煎出液；继续向药物残渣中加入质量为鱼腥草、蛇床子、淡竹叶、蒲公英、夏枯草、虎耳草、大蒜总质量的10倍的清水，加热至沸腾并文火煎煮1h，合并两次煎出液即为提取液；
(6)将称量好的木槿皮、苍耳子、山柰、大乌泡根、防风草、莲心、桑叶、黄柏皮、糯稻根装入球磨机充分研磨，过80目筛，得研磨粉；
(7)将称量好的薄荷油、步骤(4)所得的汁液以及步骤(5)得到的提取液与步骤(6)得到的研磨粉放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；将萃取液在外循环浓缩器中浓缩，浓缩条件为：压力0.03Mpa，温度70℃，浓缩至相对密度为1.12～1.14的浸膏；
(8)向每升步骤(2)所得的海水中加入1-1.2g步骤(7)所得的浸膏，并混合均匀，即得目标物。
一种上述制备方法所制得的浒苔专用营养液。
将野外采集的浒苔用本发明的营养液在实验室中进行无菌化培养，实验研究表明，无菌化培养过程中浒苔生长速度快，浒苔颜色鲜绿，将无菌化培养的成熟藻体平铺于LB固体培养基表面，培养10天，未有杂菌生长。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进应视为本发明的保护范围。