赤楠萌枝快速离体培育方法与流程

文档序号:12680507阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种赤楠萌枝快速离体培育方法,其特征在于:包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序,采集半木质化、生长健壮的当年生赤楠嫩枝作为外植体,对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽,再将初始芽接种于增殖培养基中经过4-5个周期增殖培养,形成丛生芽,将丛生芽接入壮芽培养基中培养,最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根,具体操作步骤如下:

(1)外植体选择:采集半木质化、生长健壮的当年生赤楠嫩枝作为外植体;

(2)外植体处理:将外植体置于自来水下冲洗10-15 min,然后去除外植体叶片,再将外植体浸泡在体积浓度 0.1%的升汞溶液中,控制浸泡时间15-20 min,最后用纯净水洗净药物,将外植体裁成带至少1个腋芽,1.5-3cm长的茎段,视茎段木质化程度分类置放容器内,备用;

(3)初始芽诱导培养:将步骤(2)得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养,培养30-35 d,初始芽萌发、生长;

(4)增殖培养:将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养,35-40 d转接一次,循环往复,经4-5个周期的培养,形成丛生芽;

(5)壮芽培养:将步骤(4)得到的丛生芽进行切割,4-5颗芽/丛,插入壮芽培养基中,培养35-40 d,形成壮芽;

(6)生根培养:将步骤(5)得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根;余下小芽丛再次接种于步骤(4)的增殖培养基中继续增殖,然后再重复步骤(5),循环往复,获得大量壮芽。

2.根据权利要求1所述的赤楠萌枝快速离体培育方法,其特征在于:所述的初始芽诱导培养基的配方为:1/2改良WPM培养基+6-BA 4.0-6.0 mg/L+IAA 2.0-3.0 mg/L+KT 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.5-2.0 mg/L+ VC 15 mg/L+叶酸10mg/L+VB2 15 mg/+琼脂3.0 g/L+白糖25 g/L。

3.根据权利要求1所述的赤楠萌枝快速离体培育方法,其特征在于:所述的增殖培养基的配方为:改良WPM培养基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+IAA 2.0-3.0 mg/L+ZT 0.5-1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 15 mg+天冬氨酸 20 mg/L+琼脂 3.6 g/L+白糖 30 g/L。

4.根据权利要求1所述的赤楠萌枝快速离体培育方法,其特征在于:所述的壮芽培养基的配方为:改良WPM培养基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IAA 1.0-1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 15 mg+天冬氨酸 20 mg/L+琼脂 3.5 g/L+白糖 25 g/L。

5.根据权利要求1所述的赤楠萌枝快速离体培育方法,其特征在于:所述的生根培养基的配方为:1/2改良WPM培养基+6-BA 1.5-2.5 mg/L+IAA 1.0-1.5 mg/L+琼脂 3.5 g/L+白糖 30 g/L。

6.根据权利要求2-5任一所述的赤楠萌枝快速离体培育方法,其特征在于:所述的改良WPM培养基的配方为:以上所述改良WPM培养基的组分和体积重量比为:NH4NO3 410mg/L,CaCl2·2H2O 80 mg/L,MgSO4·7H20 270 mg/L,KH2PO4 170 mg/L,Ca(NO3)2·4H2O 180 mg/L,KI 0.83 mg/L,MnSO4·H2O 21.6 mg/L,ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L,Na2MoO4·2H2O 0.25 mg/L,CuSO4·5H2O 0.025 mg/L,Na2·EDTA 37.4 mg/L,FeSO4·7H2O 26.6 mg/L,肌醇200 mg/L,烟酸0.5 mg/L,盐酸吡哆醇0.5 mg/L,盐酸硫胺素1.0 mg/L,甘氨酸2.0 mg/L。

7.根据权利要求1所述的赤楠萌枝快速离体培育方法,其特征在于:步骤(3)所述的初始芽诱导培养的培育控制条件为:光培养、光照500-1000 lx,培养温度20±1℃;步骤(4)所述的增殖培养、步骤(5)所述的壮芽培养、步骤(6)所述的生根培养的培育控制条件均为:光培养,光照2500-4000 lx,每日光照16 h,培养温度25-28℃。

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