本发明属农业技术领域,具体涉及一种鄂西红豆离体胚快速发芽的处理方法。
背景技术:
目前,鄂西红豆种子豆荚的采摘时期大都是11月下旬,这时收集的红豆种子,皮色变成深红色,皮层也由薄变为厚厚的角质膜,很难透水,因此不经处理的鄂西红豆种子场圃发芽率极低(10%以下)。目前,提高发芽率的方法不外乎两种,第一种处理方法是温水浸种,由于种皮太厚,种子很难吸水膨胀,要每天换水1~2次、浸泡7~10天,这种方法处理的种子发芽率低(20.3~80.5%),而且出苗极不整齐,甚至有的种子在第二年发芽,给小苗的田间管理造成了很大的麻烦;第二种处理方法是机械锉伤种皮,这种方法发芽率高(85%左右)、出苗也整齐,但是这种方法不仅费事、费力,而且稍有不慎会伤及种子的子叶和胚芽,种子破损的部位很容易遭受病菌的感染而霉烂(遇到下雨天种子会全军覆没),直接影响种子的发芽率及出苗质量。
技术实现要素:
为了解决上述存在的技术问题,本发明提供了一种鄂西红豆离体胚快速发芽的处理方法,具体的技术方案为:
一种鄂西红豆种子离体胚快速发芽方法,其特征包括如下步骤:
(1)2015年10月于江西广昌采摘籽粒结实、饱满的野生鄂西红豆树种子;
(2)将收集的种子置于1000ml烧杯,用洗洁精搓洗种子表皮,自来水冲洗10min,滤干;
(3)用消毒后的枝剪在胚生长点远端处剪开一小口;
(4)将上述(3)处理的种子放置盛有200ml无菌水的500ml烧杯中,烧杯置于恒温水浴锅;
(5)用无菌手术刀将上述(4)处理后的种子切成含生长点的小块,去除种皮;
(6)将上述(5)所得小块经75%酒精消毒30sec,无菌水清洗4次,然后再经0.1%升汞消毒12min,无菌水清洗4次,无菌滤纸吸干;
(7)将上述(6)小块生长点朝上置于培养基ms+6-ba0.2~1.5mg·l-1+naa0.05~0.3mg·l-1+琼脂8g·l-1+蔗糖30g·l-1+活性炭2mg·l-1,25℃,光照强度1500~2000lx,培养时间10~14d;
步骤(3)中,所述的小口口径为3-8mm;更优选的为所述的口径为5mm。
步骤(4)中,所述的水浴温度为35-55℃,水浴时间2-5h;更优选的为所述的水浴温度为40℃,水浴时间3h。
步骤(5)中,所述的切法为:在距生长点远端1/3~3/5处先横切一刀;之后在距生长点近端左右2~8mm处各纵切一刀;更优选的为所述的在距生长点远端2/5处横切一刀;在距生长点近端左右5mm处各纵切一刀。步骤(7)中,所述的小块插入培养基的深度为2~8mm;更优选的为所述的深度为3mm,培养基中的植物激素浓度为6-ba0.5mg·l-1+naa0.2mg·l-1。
本发明与现有技术相比所取得的技术效果为:采用本发明处理的鄂西红豆种子,摆脱现有鄂西红豆种子发芽率低和生长速度慢的困境,大大缩短鄂西红豆组培周期,简单、快捷,在生产中较易推广。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解,以下结合具体实施实例对本发明所述的技术方案做进一步的说明,但是本发明不仅限于此。
实施例1:
(1)2015年10月于江西广昌采摘籽粒结实、饱满的野生鄂西红豆树种子;
(2)将收集的种子置于1000ml烧杯,用洗洁精搓洗种子表皮,自来水冲洗10min,滤干;
(3)用消毒后的枝剪在胚生长点远端处剪开一小口;所述的小口口径为3mm;
(4)将上述(3)处理的种子放置盛有200ml无菌水的500ml烧杯中,烧杯置于恒温水浴锅;所述的水浴温度为35℃,水浴时间2h;
(5)用无菌手术刀将上述(4)处理后的种子切成含生长点的小块,去除种皮;所述的切法为:在距生长点远端1/3处先横切一刀;之后在距生长点近端左右2mm处各纵切一刀;
(6)将上述(5)所得小块经75%酒精消毒30sec,无菌水清洗4次,然后再经0.1%升汞消毒12min,无菌水清洗4次,无菌滤纸吸干;
(7)将上述(6)小块生长点朝上置于培养基ms+6-ba0.2~1.5mg·l-1+naa0.05~0.3mg·l-1+琼脂8g·l-1+蔗糖30g·l-1+活性炭2mg·l-1,25℃,光照强度1500~2000lx,培养时间10~14d,所述的小块插入培养基的深度为2mm;
实施例2:
1)2015年10月于江西广昌采摘籽粒结实、饱满的野生鄂西红豆树种子;
(2)将收集的种子置于1000ml烧杯,用洗洁精搓洗种子表皮,自来水冲洗10min,滤干;
(3)用消毒后的枝剪在胚生长点远端处剪开一小口;所述的小口口径为8mm;
(4)将上述(3)处理的种子放置盛有200ml无菌水的500ml烧杯中,烧杯置于恒温水浴锅;所述的水浴温度为55℃,水浴时间5h;
(5)用无菌手术刀将上述(4)处理后的种子切成含生长点的小块,去除种皮;所述的切法为:在距生长点远端3/5处先横切一刀;之后在距生长点近端左右8mm处各纵切一刀;
(6)将上述(5)所得小块经75%酒精消毒30sec,无菌水清洗4次,然后再经0.1%升汞消毒12min,无菌水清洗4次,无菌滤纸吸干;
(7)将上述(6)小块生长点朝上置于培养基ms+6-ba0.2~1.5mg·l-1+naa0.05~0.3mg·l-1+琼脂8g·l-1+蔗糖30g·l-1+活性炭2mg·l-1,25℃,光照强度1500~2000lx,培养时间10~14d,所述的小块插入培养基的深度为8mm;。
实施例3:
1)2015年10月于江西广昌采摘籽粒结实、饱满的野生鄂西红豆树种子;
(2)将收集的种子置于1000ml烧杯,用洗洁精搓洗种子表皮,自来水冲洗10min,滤干;
(3)用消毒后的枝剪在胚生长点远端处剪开一小口;所述的小口口径为5mm;
(4)将上述(3)处理的种子放置盛有200ml无菌水的500ml烧杯中,烧杯置于恒温水浴锅;所述的水浴温度为40℃,水浴时间3h;
(5)用无菌手术刀将上述(4)处理后的种子切成含生长点的小块,去除种皮;所述的切法为:在距生长点远端2/5处先横切一刀;之后在距生长点近端左右5mm处各纵切一刀;
(6)将上述(5)所得小块经75%酒精消毒30sec,无菌水清洗4次,然后再经0.1%升汞消毒12min,无菌水清洗4次,无菌滤纸吸干;
(7)将上述(6)小块生长点朝上置于培养基ms+6-ba0.2~1.5mg·l-1+naa0.05~0.3mg·l-1+琼脂8g·l-1+蔗糖30g·l-1+活性炭2mg·l-1,25℃,光照强度1500~2000lx,培养时间10~14d,所述的小块插入培养基的深度为3mm;。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变型,这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。