本发明属于实验动物学领域，具体涉及多次低剂量辐射用lewis荷瘤小鼠模型的建立。
背景技术：
低剂量辐射(lowdoseradiation，ldr)对机体抗肿瘤功能的影响是目前存在争议的问题。2012年uscare报告认为长期ldr可使免疫系统遭到破坏，出现炎症反应。可是实际上除了对胎儿的辐射损伤效应以外，ldr对人体健康效应一直未有定论。但对高本底地区和核工业工人流行病学研究发现二者的恶性肿瘤死亡率低于对照地区和非放射工人。由于低剂量辐射暴露人群分布非常广泛，因此研究低剂量辐射对机体抗肿瘤免疫功能影响，将有助于保障低剂量辐射暴露人群健康，指导放射防护的实践。
动物模型可以用来帮助人们认识电离辐射效应，但由于自发性肿瘤潜伏期较长，目前还没有合适的动物模型来评价ldr对抗肿瘤免疫功能的影响，也没有受到广泛认可的相关实验数据报道。因此，要明确低剂量辐射对机体抗肿瘤功能的影响，需要有一个合适的研究用动物模型。
常规的荷瘤小鼠模型在建立过程中受多种因素的干扰，肿瘤组织生长大小不一，对研究低剂量辐射对机体抗肿瘤功能的影响的实验结果造成干扰。
技术实现要素：
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为克服上述现有技术存在的荷瘤小鼠模型肿瘤组织生长大小不一、对研究低剂量辐射对机体抗肿瘤功能的影响的实验结果造成干扰等问题，本发明提供了一种多次低剂量辐射用lewis荷瘤小鼠模型的建立方法。
本发明的目的可以通过采取以下技术方案来实现：
多次低剂量照射用lewis荷瘤小鼠模型的建立方法，包括如下步骤：
(1)取6～8周龄无特异病原微生物(spf)级c57雄性小鼠6-8只，将常规体外培养的lewis细胞采用皮下接种法注射入小鼠右肩胛上皮下；
(2)在室温环境饲养步骤(1)中接种lewis细胞的c57小鼠，自由饮水、进食；
(3)待肿瘤长到2cm×2cm大小后,将肿瘤组织剥离，置于灭菌的含磷酸盐缓冲液(pbs)培养皿中，用手术刀将肿瘤组织切匀小块；
(4)取6～8周龄无特异病原微生物(spf)级c57雄性小鼠6-8只，将(3)中得到的小块肿瘤组织称取0.05g植入小鼠腋下，缝合，在室温环境饲养，自由饮水、进食，一周后测量肿瘤大小。
优选的，步骤(1)中所述接种lewis细胞数目为l×l06-l×l07/只小鼠；
优选的，步骤(2)或步骤(4)所述在室温环境饲养，具体为在昼夜交替、20-23℃条件下饲养。
优选的，步骤(3)测量肿瘤大小的方法为用游标卡尺测量。
优选的，步骤(3)所述将肿瘤组织剥离前，先用10mg/ml的巴比妥按照体重剂量对小鼠进行麻醉。
优选的，所述体重剂量标准为0.05ml/10g。
优选的，步骤(3)所述将肿瘤组织剥离，具体为将小鼠仰卧固定，对小鼠胸壁进行酒精消毒后，用手术前与手术刀剥离肿瘤组织。
有益效果
本发明提供的多次低剂量照射用lewis荷瘤小鼠模型比常规荷瘤小鼠模型具有很强的优势：可确保组内c57小鼠植入的肿瘤大小相等，模型均一，避免因肿瘤生长不一对实验结果的影响，大大提高实验结果的准确性。
附图说明
图1为皮下接种lewis细胞的小鼠在接种点长出的肿瘤组织。
图2为在灭菌的含磷酸盐缓冲液(pbs)培养皿将肿瘤组织均匀切割的0.05g肿瘤组织块。
具体实施方式
以下通过实例详细描述本发明提供的多次低剂量辐射用lewis荷瘤小鼠模型的建立方法。下面实施例中所涉及的生物技术没有特别描述之处均采用实验动物常规技术，如中国实验动物信息网中提供的常规技术方法。
实施例1：
(1)取6周龄无特异病原微生物(spf)级c57雄性小鼠2只，将常规体外培养的lewis细胞采用皮下接种法注射入小鼠右肩胛上皮下，注射细胞数目为l*l06/只；
(2)在昼夜交替、室温(20～23℃)环境饲养(1)中接种lewis细胞的c57小鼠，自由饮水、进食，定期观察小鼠的精神、饮食、排便、体重和活动等情况，5天后细胞长成肉眼可见的肿瘤，以游标卡尺测量肿瘤大小；
(3)小鼠肿瘤长到4cm3,将巴比妥配成10mg/ml的工作液，按0.05ml/10g体重剂量将0.13ml巴比妥工作液注射入体重为26g小鼠体内，对小鼠进行麻醉。小鼠麻醉后，将其仰卧固定在操作台上，对小鼠前胸壁进行酒精消毒，利用手术钳与手术刀将肿瘤组织剥离，置于灭菌的含磷酸盐缓冲液(pbs)培养皿中，用手术刀将肿瘤组织切匀小块，称取0.051g、0.053g、0.054g、0.054g、0.056g、0.057g小块肿瘤组织，置于1.5ml规格含0.5ml磷酸盐缓冲液的离心管中，图1为皮下接种lewis细胞的小鼠在接种点长出的肿瘤组织，图2为在灭菌的含磷酸盐缓冲液(pbs)培养皿将肿瘤组织均匀切割的0.05g左右肿瘤组织块；
(4)取6周龄无特异病原微生物(spf)级c57雄性小鼠6只，将(3)中的重量为0.051g、0.053g、0.054g、0.054g、0.056g、0.057g小块肿瘤组织分别植入已麻醉的小鼠腋下，缝合，在昼夜交替、室温(20～23℃)环境饲养，自由饮水、进食，定期观察小鼠的精神、饮食、排便、体重和活动等情况，一周后小鼠腋下肿瘤组织体积分别为0.134cm3、0.142cm3、0.146cm3、0.139cm3、0.141cm3、0.131cm3。
从此结果可以看出：利用本发明提供的方法建立的多次低剂量辐射用lewis荷瘤小鼠模型确保了组内c57小鼠植入的肿瘤大小相等，模型均一，在无外因作用的情况下肿瘤生长情况均一，模型可用于多次低剂量辐射实验研究，可以大大提高实验结果的准确性。
实施例2：
(1)取6周龄无特异病原微生物(spf)级c57雄性小鼠2只，将常规体外培养的lewis细胞采用皮下接种法注射入小鼠右肩胛上皮下，注射细胞数目为l*l06/只；
(2)在昼夜交替、室温(20～23℃)环境饲养(1)中接种lewis细胞的c57小鼠，自由饮水、进食，定期观察小鼠的精神、饮食、排便、体重和活动等情况，5天后细胞长成肉眼可见的肿瘤，以游标卡尺测量肿瘤大小；
(3)小鼠肿瘤长到4cm3,将巴比妥配成10mg/ml的工作液，按0.05ml/10g体重剂量将0.125ml巴比妥工作液注射入体重为25g小鼠体内对小鼠进行麻醉。小鼠麻醉后，将其仰卧固定在操作台上，对小鼠前胸壁进行酒精消毒，利用手术钳与手术刀将肿瘤组织剥离，置于灭菌的含磷酸盐缓冲液(pbs)培养皿中，用手术刀将肿瘤组织切匀小块，称取0.052g、0.055g、0.051g、0.053g、0.054g、0.052g小块肿瘤组织，置于1.5ml规格含0.5ml磷酸盐缓冲液的离心管中，图1为皮下接种lewis细胞的小鼠在接种点长出的肿瘤组织，图2为在灭菌的含磷酸盐缓冲液(pbs)培养皿将肿瘤组织均匀切割的0.05g左右肿瘤组织块；
(4)取6周龄无特异病原微生物(spf)级c57雄性小鼠6只，将(3)中的重量为0.052g、0.055g、0.051g、0.053g、0.054g、0.052g小块肿瘤组织分别植入已麻醉的小鼠腋下，缝合，在昼夜交替、室温(20～23℃)环境饲养，自由饮水、进食，定期观察小鼠的精神、饮食、排便、体重和活动等情况，一周后小鼠腋下肿瘤组织体积分别为0.131cm3、0.135cm3、0.141cm3、0.137cm3、0.145cm3、0.133cm3。
从此结果可以看出：利用本发明提供的方法建立的多次低剂量辐射用lewis荷瘤小鼠模型确保了组内c57小鼠植入的肿瘤大小相等，模型均一，在无外因作用的情况下肿瘤生长情况均一，模型可用于多次低剂量辐射实验研究，可以大大提高实验结果的准确性。