一种迟眼蕈蚊活虫诱集及室内大量饲养的方法与流程

本发明属于农业科研技术和昆虫养殖技术领域，具体涉及一种迟眼蕈蚊活虫诱集及室内大量饲养的方法。

背景技术

迟眼蕈蚊(bradysiasp.)属双翅目，长角亚目，蕈蚊总科，眼蕈蚊科中最大的一个属迟眼蕈蚊属(bradysiawinnertz)害虫，全世界已知455种，我国已记录131种。迟眼蕈蚊主要以幼虫为害以韭菜为代表的百合科植物的地下幼嫩组织、野生及栽培食用菌的菌丝体、子实体原基等和温室园林花卉植物的幼嫩地下茎、叶片等。为害韭菜的迟眼蕈蚊幼虫主要取食韭菜假茎、鳞茎、叶鞘、幼茎及嫩芽，造成韭菜地下部分腐烂，地上部分叶片瘦弱枯黄，甚至整株死亡，严重影响韭菜品质，产量大幅降低。为害食用菌的迟眼蕈蚊以幼虫取食菇类菌丝体、菌柄、菌褶、子实体原基等，破坏菌种的培养料，造成退菌、原基消失，菌袋发黑腐烂，被害子实体发黄、发粘，使子实体失去商品价值，使菇类品质下降，产量降低。迟眼蕈蚊为害温室蝴蝶兰幼苗时，幼虫为害幼根和基部的幼嫩叶片，受害叶片发黄枯萎脱落，嫩根受害形成烂根、空根，严重制约蝴蝶兰幼苗的生产。在为害温室园林苗木水松和檀香瓶外生根组培苗时，迟眼蕈蚊通过幼虫啃食未生根的水松和檀香等园林植物的地下茎的表皮和韧皮部或幼嫩的木质部(如图1a所示)，造成幼苗不能生根，使过于幼嫩的苗木腐烂倒伏；木质化程度稍高的幼苗，则剩下光秃的木质部(如图1b所示)，地上部分不倒伏，造成是成活苗的假象，但最终致苗木枯黄，迟眼蕈蚊严重时为害株率可达90％以上，给苗木繁殖带来严重威胁。

为了研究科学高效防治迟眼蕈蚊的技术，需要对迟眼蕈蚊的生活史、生活习性、发生规律及生物学特性等进行系统研究，并需要大量的虫龄一致的幼虫进行防治试验，获得试验用虫和大量饲养是研究该虫的基础。

由于卵和蛹难于寻找，迟眼蕈蚊试虫来源一般是采集幼虫和成虫。幼虫采集一般是直接采自发生地被害株上正在为害的幼虫或被害株附近土壤里的幼虫，由于迟眼蕈蚊幼虫有受到惊扰会快速转移隐蔽的习性，且虫体很小，因此如果发生不是很严重的地块，寻找较多初始幼虫极为费时费力。成虫采集一般是采用吸虫器，吸虫器吸成虫会造成成虫受伤害，不能正常繁殖等问题，由于雌成虫飞行能力较弱，比较好捕捉，雄成虫飞行能力比较强，则难于用吸虫器捕捉到，而且适合这么小的虫子的吸虫器也不容易购买到，自制吸虫器更加存在缺乏制作材料和制作技术的难题，吸虫器吸到的成虫如何放置于适合其生存和产卵的环境而不逃逸也是面临的问题。温室林木花卉发生迟眼蕈蚊，一株上有1头至几头比较少量的幼虫啃食地下茎，即可使该苗不能生根，严重影响出苗率，幼虫啃食完一株后又转移为害或分散到土壤中取食腐殖质，因此在温室寻找较多初始幼虫难度更大，寻找虫源时因需要拔出苗木，有时误判，将已生根的苗拔出，对苗木造成人为破坏，进一步的降低了苗木的成活率。

目前的迟眼蕈蚊饲养繁殖技术有的是用新鲜的寄主饲料饲喂，需要每日或隔日更换饲料，或需要制作食用菌菌丝培养基喂食，技术难度大，或者人工合成饲料喂食，需要清除食物残渣及排泄物，存在操作繁琐、费时费工等问题。

技术实现要素：

为了克服现有技术中迟眼蕈蚊活虫采集和饲养方法存在的诸多缺点与不足，本发明的目的在于提供一种迟眼蕈蚊活虫诱集及室内大量饲养的方法。

本发明能够短时间内诱集到大量幼虫作为初始虫源且实现了迟眼蕈蚊的周年大量饲养，具有试验材料易得到，成本低，操作简单，省工省时，各虫态存活率高，易观察等优点。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种迟眼蕈蚊活虫诱集及室内大量饲养的方法，包括如下步骤：

(1)活虫诱集：小花盆中装入泥炭土，埋入肥猪肉和秀珍菇作诱饵，置于发生迟眼蕈蚊的温室，引诱迟眼蕈蚊雌成虫产卵；卵孵化为幼虫后钻入土中取食秀珍菇和肥猪肉；10～15d后将小花盆移至养虫室，置于解剖镜下，翻出肥猪肉，将肥猪肉上及附近土壤中大量幼虫移至培养皿中；

(2)饲养方法：将上述培养皿中加入泥炭土和秀珍菇，饲养幼虫至成虫；

(3)将发生成虫的培养皿置于成虫试验装置中，打开皿盖，放飞成虫于成虫试验装置中；再将其他发生成虫的培养皿置于上述成虫试验装置中，使来自不同培养皿中的成虫交尾；

(4)将成虫试验装置中交尾后的单个雌成虫捕捉至新的培养皿中，2～3d后雌成虫产卵；

(5)卵孵化为幼虫后，加入泥炭土和秀珍菇，培养8～12d时，将培养皿置于解剖镜下，用镊子拨开土块，寻找蛹；

(6)将单个蛹移至新的培养皿中，加入适量泥炭土，上面覆盖一定大小和湿度的手帕纸，1～3d蛹羽化为成虫；

(7)将来自非同一雌成虫的雌雄后代放置于同一成虫试验装置中交尾，避免近亲繁殖；

(8)将交尾后的雌成虫捕捉至培养皿，雌成虫产卵后加入泥炭土和秀珍菇，重复上述饲养过程，实现周年大量饲养繁殖迟眼蕈蚊的目的。

优选的，步骤(1)中所述的泥炭土，捣碎后置于60～80℃烘干箱中烘干24～48h，加自来水配制成相对湿度为60～65％。

优选的，步骤(1)中所述的肥猪肉为生肥猪肉，切成1.0～1.5cm³的小方块，备用。

优选的，步骤(1)中埋入肥猪肉和秀珍菇的深度为0.5～1.0cm。

优选的，步骤(2)、(5)、(6)、(8)中使用的泥炭土相对湿度为60～65％，装入直径7cm，高10cm的组织培养瓶中，放入高压灭菌锅中，在121℃、1.1kg/cm²压力条件下灭菌40min。

优选的，所述的秀珍菇为直径2～3cm的秀珍菇菌盖或2～3cm长的秀珍菇菌柄；

优选的，所述的秀珍菇，分装至9*13～12*18cm的自封袋中，室内放置2～3d，倒掉释放出来的水分。

优选的，所述的养虫室饲养温度为25±0.5℃，相对湿度50～70％，自然光照。

所述的成虫试验装置，包括用于成虫活动交尾的广口容器1以及包裹着广口容器1开口端的白棉布2，白棉布2的开口端设置有系紧绳3。

所述的广口容器1的开口端与白棉布2的一端通过订书钉连接在一起。

所述的广口容器1为广口带底的圆柱形透明塑料容器；具体是由5l的食用油桶改装制作而成，将油桶的瓶口及瓶颈部分剪去，剩余的圆柱形部分作为装置的广口容器1。

所述的广口容器1的长*宽*高为13～14*13～14*20～21cm。

所述的白棉布2的长*宽为52～56*40～42cm；白棉布2的长度与广口容器1开口端的周长相近。

所述的系紧绳3的长度为70～75cm。

所述的系紧绳3为白线绳。

具体包括如下步骤：

(1)制备饲养用培养皿：将皿盖直径为9cm的一次性塑料培养皿底层铺上直径9cm的定性滤纸，用10～15cm长的胶头滴管加自来水至滤纸上，用另外的干滤纸将培养皿中滤纸上的明水吸干，备用。

(2)制备饲养用泥炭土：将花卉市场上购买的进口泥炭土取试验所需数量捣碎，加自来水配制成60～65％相对湿度的泥炭土，装入直径7cm，高10cm的组织培养瓶中，装入量为组培瓶容积的3/4，盖上盖子，放入高压灭菌锅中，在121℃、1.1kg/cm²压力条件下灭菌40min，以杀灭泥炭土中的各种微小生物，如细菌、真菌、线虫、螨类等，灭菌后放置在室温下备用。

(3)制备诱虫和饲养用的诱饵和饲料：在农贸市场上购买试验所需数量的肥猪肉，养虫室内切成1.0～1.5cm³的小方块，放置于-18℃的冰箱冷冻储存，使用前取出解冻，备用。在农贸市场上购买试验所需数量的秀珍菇，在养虫室内将其分装至9*13～12*18cm的自封袋中(不宜将饲料暴露在空气中，以避免一些寄生蝇类昆虫在食料中产卵、繁殖，将食料污染)，室温下放置2～3d，使菇中的水分自然释放出来，倒掉袋中水分，然后封口，放置于-18℃的冰箱冷冻，使用前取出，解冻后使用。

(4)成虫试验装置的制作：将容量为5l的食用油桶的瓶口部分剪去，剩下长*宽*高约为13～14*13～14*20～21cm的广口容器部分。用长*宽为52～56*40～42cm的白棉布缝制成一个圆筒形，圆筒周长与广口容器周长相等，约为52～56cm，一端套住广口容器开口端，用订书钉将其连接在一起，白棉布圆筒的另一端穿一条可以抽紧的白线绳，制成活动口，成虫试验装置即完成。

(5)活虫诱集方法

将花卉市场上购买的进口泥炭土取试验所需数量捣碎，置于60～80℃的烘干箱，烘干24～48h，以杀灭泥炭土中的各种微小生物，取出后，加自来水配制成60～65％相对湿度的泥炭土，装入上口径9cm、下口径6cm、高度8cm的塑料小花盆中，花盆数量依试验所需而定，每个花盆装满5/6体积的相对湿度60～65％的泥炭土，压实。在花盆的中央，埋入1.0～1.5cm³大小的一小方块生肥猪肉以及一片直径2～3cm的秀珍菇菌盖或2～3cm长的秀珍菇菌柄，埋入深度0.5～1.0cm。将花盆放置于发生迟眼蕈蚊的温室，就会有迟眼蕈蚊雌成虫在花盆的土缝中产卵，卵孵化为幼虫后钻入土中取食肥猪肉和菇。10～15d后将花盆取回养虫室，期间根据花盆中土壤湿度淋水管理，保持土壤相对湿度在60～65％。取回养虫室的花盆直接置于解剖镜下镜检，用镊子翻出肥猪肉，肥猪肉上及其附近土壤中则有大量3～4龄迟眼蕈蚊幼虫在活动，诱集量大的花盆中会发现上百头幼虫，将幼虫用镊子轻轻夹出至步骤(1)备好的培养皿上。为防止夹伤幼虫，可以将幼虫附近的少量泥炭土一同夹出。每个培养皿可以放置大约30～50头幼虫。

室内大量饲养方法步骤

(6)将步骤(5)诱集到的幼虫置于步骤(1)备好的培养皿中后立即加入步骤(2)备好的的泥炭土，至培养皿3/4的容积，泥炭土上放置2～3片步骤(3)备好的秀珍菇，盖上皿盖，用橡皮筋将皿盖与皿底套在一起，以防不经意间将皿盖碰开，发生成虫时，成虫飞出逃逸。可将多个培养皿套在一起，以节省培养空间。

(7)幼虫经过10余天的饲养，培养皿中即可以看到有成虫发生。将发生成虫的培养皿移至成虫试验装置中，打开皿盖，放飞成虫于成虫试验装置中，注意用白线绳扎紧，以防成虫逃逸。可以将不同培养皿中的成虫放置于同一成虫试验装置中，一个成虫试验装置可以放置数十头成虫。雌雄成虫在成虫试验装置中充分交尾，30～60min后，将交过尾的单个雌成虫捕捉至步骤(1)备好的培养皿中，用橡皮筋套住皿底和皿盖，即可等待雌成虫产卵，期间无需任何操作。

(8)2～3d后，雌成虫即可产卵，雌成虫产卵持续时间4～8h，将卵产完后很快死亡。雌成虫会将卵产在滤纸和培养皿的皿壁形成的褶皱处(如图7所示)，或者将卵直接产在较靠近皿壁的滤纸上，多数是两粒以上乃至几十粒产在一起，少数也单粒散产。这时可以在解剖镜下调查产卵量。此时根据滤纸的湿度，用胶头滴管在无卵的滤纸处滴几滴自来水，以保持培养皿中的适宜湿度，使卵正常孵化。卵大约3d后孵化为小幼虫，此时解剖镜下可以调查未孵化的卵数，计算出卵孵化率。经对15头雌成虫的产卵量调查，迟眼蕈蚊1头雌成虫产卵量为46～192粒，平均120.67粒，卵孵化率为61.5～98.1％。

(9)卵孵化为小幼虫后，培养皿中加入3/4容积的步骤(2)备好的泥炭土，泥炭土上放置步骤(3)备好的2～3片秀珍菇，盖上皿盖，用橡皮筋将皿盖与皿底套在一起。在成虫发生期之前，可以打开皿盖，置于解剖镜下，用镊子翻开土块和秀珍菇，观察幼虫和蛹的发育情况。

(10)为防止同一皿中的同一雌成虫后代近亲交尾繁殖，需要蛹期将蛹单独饲养。在培养温度25±0.5℃条件下，雌成虫产卵后大约16～20d是蛹的发生盛期，此时将培养皿置于解剖镜下，用镊子拨开土块，在土块的中间会发现蛹，此时可以鉴别蛹的雌雄。由于蛹很小，鉴别雌雄需要将蛹尾部的土全部拨开，拨开的过程中会使蛹受伤，因此，在不需要鉴别蛹的雌雄的情况下，可以将蛹及身体附近的土一同取出至步骤(1)准备好的培养皿中，由于蛹的发育需要较高的湿度，湿度不够，蛹皮会发干，蛹不能羽化，所以蛹的身体上需要盖上长*宽*高约为3～4*3～4*0.8～1.0cm的步骤(2)准备好的泥炭土，然后用3～4cm²的一小块湿手帕纸盖在泥炭土上，以增加蛹的培养湿度，然后盖上皿盖，用橡皮筋套住皿底和皿盖。1～3d后蛹羽化为成虫，培养皿中可以见到活动的成虫。这种方法可以使蛹的羽化率达到95％以上。这时将培养皿在不打开皿盖的情况下，置于解剖镜下鉴别成虫的雌雄。将来自不同皿中的雌雄成虫放入步骤(4)准备好的成虫试验装置中交尾。经试验观察，雌雄成虫在成虫试验装置中最快10秒，最慢4分钟就开始交尾，交尾时间在2～35min，交尾完成后，将雌成虫捕捉至步骤(1)备好的培养皿中，等待雌成虫产卵。雄成虫有多次交尾习性，留在成虫试验装置中的雄成虫可以继续与其他雌成虫交尾。

重复上述培养过程，即可实现周年大量饲养繁殖迟眼蕈蚊的目的。

以上的饲养过程均在恒温养虫室进行，饲养温度为25±0.5℃，相对湿度50～70％，自然光照。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明的诱集活虫方法是利用小花盆中埋入肥猪肉和秀珍菇的方法引诱迟眼蕈蚊雌成虫产卵，卵孵化获得大量幼虫作为初始试虫。简单易行，可以轻松获得大量初始试虫。

(2)本发明的饲养方法是利用泥炭土作为饲养环境，秀珍菇作为饲料，饲养一个发育周期不用更换饲料和清理排泄物，省工省时，试验材料易得到，成本低，操作简单，且方便进行各种试验观察，可以避免后代的近亲繁殖，常年饲养不会导致种群因近亲繁殖而退化。各虫态成活率很高，80％以上的卵可以发育为成虫。

附图说明

图1是迟眼蕈蚊幼虫为害水松的地下茎(a)和啃食后剩余的木质部(b)。

图2是饲养用秀珍菇饲料。

图3是小花盆中加入肥猪肉和秀珍菇引诱雌成虫产卵。

图4是加入适宜湿度的泥炭土经高温高压灭菌过的组培瓶。

图5是铺有适宜湿度滤纸的培养皿。

图6是培养皿中加入泥炭土和秀珍菇饲料(a)及多个培养皿套在一起(b)。

图7是迟眼蕈蚊将卵产在滤纸与培养皿壁形成的褶皱处。

图8是幼虫取食秀珍菇饲料。

图9是迟眼蕈蚊的蛹。

图10是迟眼蕈蚊蛹的饲养。

图11是成虫试验装置(a)及成虫交尾试验时扎紧的成虫试验装置(b)。

图12是成虫试验装置示意图。

图13是雌雄成虫在成虫试验装置中交尾。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

(1)制备饲养用培养皿：将皿盖直径为9cm的一次性塑料培养皿底层铺上直径9cm的定性滤纸，用10～15cm长的胶头滴管加自来水至滤纸上，用另外的干滤纸将培养皿中滤纸上的明水吸干，备用(如图5所示)。

(2)制备饲养用泥炭土：将花卉市场上购买的进口泥炭土取试验所需数量捣碎，加自来水配制成60～65％相对湿度的泥炭土，装入直径7cm，高10cm的组织培养瓶中，装入量为组培瓶容积的3/4，盖上盖子，放入高压灭菌锅中，在121℃、1.1kg/cm²压力条件下灭菌40min，取出放置在室温下备用(如图4所示)。

(3)制备诱虫和饲养用的诱饵和饲料：在农贸市场上购买试验所需数量的肥猪肉，养虫室内切成1.0～1.5cm³的小方块，放置于-18℃的冰箱冷冻储存，使用前取出解冻，备用。在农贸市场上购买试验所需数量的秀珍菇，在养虫室内将其分装至9*13～12*18cm的自封袋中室温下放置2～3d，使菇中的水分自然释放出来，倒掉袋中水分，然后封口，放置于-18℃的冰箱冷冻，使用前取出，解冻后使用(如图2所示)。

(4)成虫试验装置的制作：所述的成虫试验装置，其示意图如图12所示，包括用于成虫活动交尾的广口容器1以及包裹着广口容器开口端的白棉布2，白棉布的开口端设置有系紧绳3。所述的广口容器1的开口端与白棉布2的一端通过订书钉连接在一起。所述的广口容器1为广口带底的圆柱形透明塑料容器；具体是由5l的食用油桶改装制作而成，将油桶的瓶口及瓶颈部分剪去，剩余的圆柱形部分作为装置的广口容器1。所述的广口容器1的长*宽*高为13～14*13～14*20～21cm。所述的白棉布2的长*宽为52～56*40～42cm，将其缝制成圆筒形，圆筒一端用订书钉与广口容器1的开口端订在一起。所述的系紧绳3的长度为70～75cm。所述的系紧绳3为白线绳。

制作的成虫试验装置及成虫交尾试验时扎紧的成虫试验装置，如图11a、图11b所示。

(5)活虫诱集方法

将花卉市场上购买的进口泥炭土取试验所需数量捣碎，置于60～80℃的烘干箱，烘干24～48h，取出后，加自来水配制成60～65％相对湿度的泥炭土，装入上口径9cm、下口径6cm、高度8cm的塑料小花盆中，花盆数量依试验所需而定，每个花盆装满5/6体积的相对湿度60～65％的泥炭土，压实。在花盆的中央，埋入1.0～1.5cm³大小的一小方块生肥猪肉以及一片直径2～3cm的秀珍菇菌盖或2～3cm长的秀珍菇菌柄，埋入深度0.5～1.0cm(如图3所示)，将花盆放置于发生迟眼蕈蚊的温室，10～15d后将花盆取回养虫室。期间根据花盆中土壤湿度淋水管理，保持土壤相对湿度在60～65％。取回养虫室的花盆直接置于解剖镜下镜检，用镊子翻出肥猪肉，肥猪肉上及其附近土壤中则有大量3～4龄迟眼蕈蚊幼虫在活动。将幼虫用镊子轻轻夹出至步骤(1)备好的培养皿上。为防止夹伤幼虫，可以将幼虫附近的少量泥炭土一同夹出。每个培养皿可以放置大约30～50头幼虫。

活虫诱集的花盆放入肥猪肉和菇的目的是，菇是迟眼蕈蚊最喜欢取食、营养最全面、可以保证迟眼蕈蚊一生正常发育的的最佳食料，如果土中只埋入菇类诱饵，菇类在土中很快被取食或腐烂，然后幼虫就会分散开活动，不易寻找。放入肥猪肉后，肥猪肉不易腐烂且对迟眼蕈蚊幼虫有引诱作用，迟眼蕈蚊取食完菇后，就会被肥猪肉的气味吸引到周围，使得幼虫极易被找到。若花盆中只放入肥猪肉，则由于肥猪肉的营养单一，迟眼蕈蚊会发育不良而死亡。肥猪肉同蘑菇相结合做诱饵，则弥补了各自存在的不足，达到诱集大量发育良好的迟眼蕈蚊活虫的目的。

室内大量饲养方法步骤

(6)将步骤(5)诱集到的幼虫置于步骤(1)备好的培养皿中后立即加入步骤(2)备好的泥炭土，至培养皿3/4的容积，泥炭土上放置2～3片步骤(3)备好的秀珍菇，盖上皿盖，用橡皮筋将皿盖与皿底套在一起，可将多个培养皿套在一起，以节省培养空间(如图6a和图6b所示)。

(7)幼虫经过10余天的饲养，培养皿中即可以看到有成虫发生。将发生成虫的培养皿移至成虫试验装置中，打开皿盖，放飞成虫于成虫试验装置中，注意用白线绳扎紧，以防成虫逃逸。可以将不同培养皿中的成虫放置于同一成虫试验装置中，一个成虫试验装置可以放置数十头成虫。雌雄成虫在成虫试验装置中充分交尾，30～60min后，将交过尾的单个雌成虫捕捉至步骤(1)备好的培养皿中，用橡皮筋套住皿底和皿盖，即可等待雌成虫产卵，期间无需任何操作。雌雄成虫在成虫试验装置中交尾，如图13所示。

(8)2～3d后，雌成虫即可产卵(如图7所示)，将卵产完后很快死亡。这时可以在解剖镜下调查产卵量。然后根据滤纸的湿度，用胶头滴管在无卵的滤纸处滴几滴自来水，以保持培养皿中的适宜湿度，使卵正常孵化。卵大约3d后孵化为小幼虫，此时解剖镜下可以调查未孵化的卵数，计算出卵孵化率。经对15头雌成虫的产卵量调查，迟眼蕈蚊1头雌成虫产卵量为46～192粒，平均120.67粒，卵孵化率为61.5～98.1％。

(9)卵孵化为小幼虫后，培养皿中加入3/4容积的步骤(2)备好的泥炭土，泥炭土上放置步骤(3)备好的2～3片秀珍菇，盖上皿盖，用橡皮筋将皿盖与皿底套在一起，开始幼虫饲养过程(如图6和图8所示)。

(10)为防止同一皿中的同一雌成虫后代近亲交尾繁殖，需要蛹期将蛹单独饲养。在培养温度25±0.5℃条件下，雌成虫产卵后大约16～20d是蛹的发生盛期，此时将培养皿置于解剖镜下，用镊子拨开土块，在土块的中间会发现蛹(如图9所示)。为避免蛹受伤，用镊子将蛹及身体附近的土一同取出至步骤(1)备好的培养皿中，蛹的身体上盖上长*宽*高约为3～4*3～4*0.8～1.0cm的步骤(2)备好的泥炭土，然后用3～4cm²的一小块湿手帕纸盖在泥炭土上(如图10所示)，以增加蛹的培养湿度，然后盖上皿盖，用橡皮筋套住皿底和皿盖。1～3d后蛹羽化为成虫，培养皿中可以见到活动的成虫。这时将培养皿不要打开皿盖，放置于解剖镜下鉴别成虫的雌雄。将来自不同皿中的雌雄成虫放入步骤(4)备好的成虫试验装置中交尾(如图13所示)。交尾完成后，将雌成虫捕捉至步骤(1)备好的培养皿中，等待雌成虫产卵。雄成虫则留在成虫试验装置中可以继续与其他雌成虫交尾。

重复上述培养过程，即可实现周年大量饲养繁殖迟眼蕈蚊的目的。

以上饲养均在恒温养虫室进行，饲养温度为25±0.5℃，相对湿度50～70％，自然光照。

实施例2

未交尾的雌雄成虫制备：迟眼蕈蚊的成虫个体小，不似大型昆虫可以简单的将雌成虫和雄成虫放置在一起进行交尾等试验观察。幼虫人工饲养一般是在直径9cm的培养皿中，来自一个雌成虫的后代雌雄成虫在同一个培养皿中发生，极易造成近亲繁殖。当蛹期发生时将单蛹置于单独的培养皿中饲养(如图10所示)，蛹羽化可以获得未交尾过的雌成虫或雄成虫。

成虫试验装置使用方法：将发生雌、雄成虫的一对培养皿先后从成虫试验装置的白棉布2开口端放入广口容器1，打开培养皿盖，放飞成虫入成虫试验装置，取出培养皿，然后扎紧白棉布2开口端，即可观察迟眼蕈蚊雌雄成虫在该装置中的交尾活动(如图13所示)。

交尾后的雌成虫捕捉：雌雄成虫交尾完成后，将铺有湿润滤纸的培养皿置于广口容器1，一只手操作，将皿盖打开约30度的角度后，外力迫使雌成虫飞翔，操作开口的培养皿捕捉雌成虫至培养皿中，捕捉后盖上皿盖，移出成虫试验装置外，继续雌成虫的培养。雄成虫的捕捉方法同雌成虫。

用来测定雄成虫交尾次数方法：将装有由单一蛹饲养获得的未交过尾的雄成虫的培养皿，由白棉布2开口端放入成虫试验装置中，打开皿盖，将雄成虫放飞入广口容器1中，将培养皿从白棉布2开口端取出，然后将装有由单一蛹饲养获得的未交过尾的雌成虫的培养皿，用上述同样的方法放入上述同一成虫试验装置中，用系紧绳3扎紧白棉布2开口端，以防成虫逃逸。这时可以观察到放飞入广口容器1中的雌成虫飞行能力弱，一般只是沿着广口容器1的壁爬行，偶尔飞行，而雄成虫飞行能力强，通常会在广口容器1中不停飞行，在10秒至5分的时间内即可以找到雌成虫，雄成虫将腹部末端向腹部卷曲，靠近雌成虫的腹部末端，用抱握器夹住雌成虫的腹部末端后，排成“一”字开始交尾(如图13所示)。记录交尾时间。交尾完成后用一个铺有适宜湿度滤纸的培养皿将雌成虫捕捉移出装置。再放入第二头未交过尾的雌成虫，以此类推，直至该雄成虫不再交尾。供试的4头雄成虫的交尾情况见表1。表1表明，迟眼蕈蚊的雄成虫可以交尾4～6次，交尾时间在2′02"(2分钟02秒)至35′34"(35分钟34秒)，随着雄成虫交尾次数的增加，交尾时间越来越长。

表1雄成虫交尾次数试验

测定单雌后代雌雄成虫性比方法：迟眼蕈蚊雌成虫最高产卵可达200粒之多，平均产卵120粒，饲养成活率最高可以达到80％以上，因此成虫发生高峰期每天可以有数十头成虫羽化。单雌子代成虫羽化持续时间在10～15d，每天成虫发生数量在1～50头之间。成虫发生高峰期，雌雄性比调查相当费时费力。利用成虫试验装置使试验简化并准确。方法是每1～2d将发生成虫的培养皿从成虫试验装置的白棉布2开口端移至广口容器1中后，将皿盖打开，成虫放飞入广口容器1，然后移出培养皿，将白棉布2开口端用系紧绳3扎紧。由于装置的体积小，可以将装有活成虫的装置整体放入-18℃的冰箱冷冻20min，取出后，将死成虫倒入培养皿中，在解剖镜下鉴别雌雄。综合整个成虫发生期的雌雄成虫数量可以计算出雌雄性比，经试验迟眼蕈蚊的雌雄性比为1.66：1。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。