一种细胞冻存盒的制作方法

本发明涉及细胞生物
技术领域：
，具体涉及一种细胞冻存管专用冻存容器。
背景技术：
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冻存是细胞培养当中的一个重要环节。冻存技术要点是慢冻，标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min。之前，常用的传统方法是将冻存管置于4℃30分钟--->-20℃60分钟--->-80℃过夜--->液氮罐。不过，由于步骤较多，间隔时间又长，很容易遗忘。之后，人们开始采用程序降温盒，将冻存管放入程序降温盒中，再将程序降温盒放入-80℃冰箱。这节省了大量的时间，效率得以提升。常用的细胞冻存盒里面采用加入适当的异丙醇，然而，异丙醇属于有毒溶剂，又容易挥发，长期使用不但会对环境造成污染，也对实验人员的安全有不利影响。现有技术的细胞程序降温冻存盒，由于通常需要设置专门的异丙醇或液氮存储腔，结构复杂，不仅可能污染环境，且存取不便，冻存的细胞管数量很有限，造价昂贵，不适用于大量的细胞培养。因此研究实用性强，环保结构简单的细胞冻存盒具有重要的应用价值，本发明由此而来。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是现有的细胞冻存程序降温盒结构复杂使用不便利及不环保的缺陷，提供一种环保、使用便利的细胞冻存盒。为解决上述技术问题，本发明提供一种细胞冻存盒，其包括盒体和盒盖，在所述的盒体内部设有若干用于放置冻存管的第一冻存管孔和一个固定孔，所述第一冻存管孔的高度小于细胞冻存管的高度，所述的固定孔位于盒体的中央位置，在所述盒盖上分布着与盒体上的第一冻存管孔位置对应的第二冻存管孔，盒盖中央位置分布与所述固定孔位置对应的固定凸块，所述盒盖固定凸块和盒体固定孔的形状和大小相互匹配。优选地，所述的盒体和盒盖为聚乙烯泡沫结构。优选地，所述第一冻存管孔在盒体上均匀分布，相应地，盒盖上对应第一冻存管孔的第二冻存管孔均匀分布。优选地，在所述盒体和盒盖的外表面均匀排布着许多纵向加强筋和横向加强筋。优选地，所述盒体的固定孔为圆筒形，盒盖的固定凸块为与之形状大小匹配的圆柱结构。优选地，所述盒体的固定孔为长方体腔，盒盖的固定凸块为与之形状大小匹配的长方体结构。本发明的聚乙烯泡沫可包括低密度聚乙烯，中密度聚乙烯，高密度聚乙烯，密度范围从28～120±5kg每立方米。在实际生产中，根据不同的需要，可选择不同的密度范围及制备工艺。本发明细胞冻存盒，可以获得的功效包括：1.本发明的细胞冻存盒保温性能好，由于放置于其中的细胞冻存管下部置于第一冻存管孔内，细胞冻存管上部置于盒盖上的第二冻存管孔，使得冻存管在冻存盒内充分接触密封，使细胞冻存管的温度能够缓慢升高或降低，保证了细胞在-80℃冰箱内的缓慢降温，由此确保了较高的细胞冻存存活率。2.本发明细胞冻存盒由于是聚乙烯泡沫结构，不仅为冻存盒提供了良好的保温性能，且使用安全：防摔，耐酸碱腐蚀，化学稳定性好，适合实验室环境使用。3.本发明细胞冻存盒环保无污染，不需要另外设置异丙醇或液氮存储腔，无需现有冻存装置中冷冻液的添加。4.本发明细胞冻存盒，结构简单，不仅取用方便，造价成本低，可以根据实际需要制造不同盒体深度，冻存管孔高度的冻存盒型号，适用推广使用，具有广阔的市场前景和应用价值。附图说明下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：图1为本发明细胞冻存盒一实施例的剖面立体图。图2a为本发明细胞冻存盒的盒体俯视图，图2b为图2a中a-a剖面局部示意图。图3a为本发明细胞冻存盒的盒盖仰视图，图3b为图3a中a-a剖面局部示意图。图4a为本发明细胞冻存盒又一实施例盒体俯视图，图4b为与图4a实施例盒体匹配的盒盖侧面剖视图。图5为本发明细胞冻存盒又一实施例外形图。图6为本实施例1的三种细胞冻存盒冻存细胞数据对比图。其中，10为盒体，11为第一冻存管孔，12为固定孔，20为盒盖，21为第二冻存管孔，22为固定凸块，h1为盒体深度，l1为第一冻存管孔的高度，h2为盒盖高度，l2为第一冻存管孔的高度，r为固定孔或固定凸块的直径，310为纵向加强筋，320为横向加强筋。具体实施方式为了能够详细了解本发明的技术特征及实用功效，并可依照说明书的内容来实施，更进一步以如图式所示的优选实施例，详细说明如后：如图1所示的本发明的一种细胞冻存盒的剖面立体图，其包括盒体10和盒盖20，所述盒盖20和盒体10的大小形状匹配，在所述的盒体10内部设有若干用于放置冻存管的第一冻存管孔11和一个固定孔12，所述的固定孔12位于盒体10的中央位置，所述第一冻存管孔11的高度小于细胞冻存管的高度，在盒盖20上分布着与盒体上的第一冻存管孔11位置对应的第二冻存管孔21，在所述盒盖20中央位置分布与所述固定孔12位置对应的固定凸块22,盒盖20的固定凸块22和盒体10的固定孔12的形状和大小相互匹配。参考图2a，3a，图2a为细胞冻存盒的盒体10俯视图，第一冻存管孔11在盒体10上均匀分布，固定孔12位于盒体10的中央位置，图3a为细胞冻存盒的盒盖20的仰视图，盒盖20上第二冻存管孔21对应第一冻存管孔11的位置，也均匀分布，且盒盖20中央位置为于固定孔12位置对应的固定凸块22。固定孔12为圆筒形，固定凸块22为与之形状大小匹配的圆柱结构。且第一冻存管孔和第二冻存管孔都为竖直方向设置。参考图2b，3b，图2b为图2a中a-a剖面局部示意图，h1为盒体高度，l1为第一冻存管孔11的高度，h1＞l1，图3b为图3a中a-a剖面局部示意图，h2为盒盖高度，l2为第一冻存管孔21的高度，h2＞l2，本实施例中，固定孔12为圆筒形，固定凸块22为与之形状大小匹配的圆柱结构，且二者的直径相等为r。本发明优选实施例中，第一冻存管孔内径和细胞冻存管外径一致，且第一冻存管孔高度l1小于细胞冻存管的高度，这样，放置于其中的细胞冻存管下部置于第一冻存管孔11内，细胞冻存管上部置于盒盖上的第二冻存管21孔，使得冻存管在盒体内充分接触密封，使细胞冻存管的温度能够缓慢升高或降低，确保了较高的细胞冻存存活率。本发明中，细胞冻存盒因为无需设置冷冻液存储腔，因此冻存盒为非空心结构，且优选盒体和盒盖为聚乙烯泡沫结构。不仅为冻存盒提供了良好的保温性能，且防摔，使用安全：具有化学稳定性好、耐酸耐碱的优点，适于实验室使用。本发明一实施例中，所述盒体的固定孔为一长方体腔，盒盖的固定凸块为与之形状大小匹配的长方体结构。本发明一实施例中，所述盒体的固定孔为倒圆台结构，盒盖的固定凸块为与之形状大小匹配的圆锥台。当然还可以是本领域技术人员可以想到的其他相互配合结构或曲面。图4a为细胞冻存盒又一实施例盒体俯视图，图4b为与图4a实施例盒体匹配的盒盖侧面剖视图,和前述的外周为圆柱状的细胞冻存盒不同，该实施例中，细胞冻存盒的外周为矩形，且固定孔12为一长方体腔，盒20的固定凸块22为与之形状大小匹配的长方体结构。图5为本发明细胞冻存盒又一实施例外形图，在该细胞冻存盒的外表上均匀排布着许多纵向加强筋310和横向加强筋320，如此，各条纵向和横向加强筋310,320共同配合，从而能够加强细胞冻存盒在纵向和横向的强度，进一步地，各条纵向加强筋310沿着细胞冻存盒的高度方向等距布置，各条横向加强筋320水平方向等距布置。更进一步，所述各条纵向加强筋和横向加强筋与细胞冻存盒粘结，当然也可以与细胞冻存盒做成一体结构。且加强筋可采用树脂材料或聚乙烯泡沫。根据实际应用，细胞冻存盒根据冻存管的高度，为不同的深度：对于58mm的冻存管，冻存盒盒体高度h1为60mm，第一冻存管孔l1高度为38mm，盒盖高度h2为40mm，第一冻存管孔l2高度为20mm；对于80mm高度的冻存管，冻存盒盒体高度h1为82mm，第一冻存管孔l1高度为60mm，盒盖高度h2为40mm，第一冻存管孔l2高度为20mm；对于102mm高度的冻存管，冻存盒盒体高度h1为82mm，第一冻存管孔l1高度为82mm，盒盖高度h2为40mm，第一冻存管孔l2高度为20mm。因此，本发明的冻存管，根据不同高度冻存管，只需要调整盒体或盒盖之一的结构，灵活搭配即可满足需要，且使用安全，相当便利实用。实施例1利用三种不同的细胞冻存盒(异丙醇冻存盒、neb冻存盒、本发明的聚乙烯泡沫冻存盒)冻存hek293细胞(我武生物公司)，具体步骤如下：1.细胞传代1.1从冰箱中取出冻存液，pbs，tripsn，培养液。放在水浴锅内预温。1.2取出培养箱中盛有hek293细胞的培养皿，显微镜下观察细胞铺板率达80％～90％，使用废液枪吸除培养皿中的废液，使用电枪取3mlpbs溶液沿着培养皿轻晃洗细胞，再吸取pbs废液。1.3取1.5mltripsn沿着边缘加入培养皿，轻晃使细胞浸润于tripsn中。显微镜下观察细胞是否全部浸润，放进培养箱1～2min。1.4轻晃观察细胞是否全部松动，加入3ml的培养液轻晃轻轻吹打使细胞均匀散布在培养基中，终止消化反应。1.5取一个15ml的离心管，标记。从培养基内吸取3ml培养物装于离心管内，离心4000rpm，10min。1.6加入5ml细胞培养液，重悬，细胞计数，每500×104个细胞冻存。分别装入不同的细胞冻存盒中。放置-80℃冰箱。1.7隔天取出冻存细胞，复苏，细胞计数，计算细胞存活率。如表1所示冻存细胞，每种各冻存6组，各组冻存细胞500×104，最后进行统计分析。表1异丙醇冻存盒neb冻存盒泡沫冻存盒编号1～6组7～12组13～18组细胞冻存存活率：如表2冻存细胞数复苏存活数复苏存活率培养6h后细胞数6h后/冻存数6h后/复苏存活数异丙醇冻存盒500×104497.5×10499.50％465×10493％93.50％neb冻存盒500×104372×10474.40％346×10469.2％93.01％泡沫冻存盒500×104467×10493.40％447×10489.40％95.70％由实验数据得出：泡沫冻存盒与异丙醇冻存盒细胞存活率相差无几，相比之下，本发明的泡沫冻存盒更具有优势。以上所述，仅是本发明的优选实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，任何所属
技术领域：
中具有通常知识者，若在不脱离本发明所提技术特征的范围内，利用本发明所揭示技术内容所作出局部更动或修饰的等效实施例，均仍属于本发明技术特征的范围内。当前第1页12