一种双叉犀金龟虫草的培养方法与流程

本发明涉及虫草培育技术领域，具体涉及一种双叉犀金龟虫草的培养方法。

背景技术：

双叉犀金龟〔allomyrinadichotoma(linnaeus)〕又名独角仙，属鞘翅目(coleoptera)犀金龟科(dynastidae)。体型巨大，形态美观而独特，不仅成虫具有很高的观赏价值，而且幼虫体大肥胖，似鸡蛋大小。双叉犀金龟幼虫的营养成分分析结果表明其主要组分是:水分含量为77.16％，干物质含量为22.84％。在干物质中粗蛋白占46.6％；粗脂肪占31.09％；粗纤维占9.78％；粗灰分占3.24％；总糖占3.20％。人体所需要的微量元素也很丰富，含有k、mg、na、ca、fe、zn、mn、cu、se、p等10种元素，并含有维生素b1和b2。双叉犀金龟幼虫蛋白质含量占总干物质重的46.67％，含有18种氨基酸(见1)。其中含有成人所需8种必需氨基酸(thr、val、met、ile、leu、phe、lys、trp)和儿童所需的另外两种必需氨基酸(his、arg)。人体必需氨基酸总量占总氨基酸量的46.43％。其蛋白质含量高于猪肉、鸭蛋和乳类的蛋白质含量。双叉犀金龟被列为贵州省药用昆虫名录，韩国可以食用的昆虫只有三种，其中就有双叉犀金龟。但现有的入药方式利用价值较低。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种双叉犀金龟虫草的培养方法。本发明所述培养方法能够培养出具有双重抗癌作用的双叉犀金龟虫草。

本发明提供了一种双叉犀金龟虫草的培养方法，包括以下步骤：

1)将洗净后的双叉犀金龟蛹体在次氯酸钠水溶液中浸泡，晾干后得到干燥双叉犀金龟蛹体；

2)将蛹虫草菌液注入步骤1)得到的双叉犀金龟蛹体中，在19～25℃黑暗、湿度在75％以上的条件下培养17～20d，得到僵化虫体；

3)将步骤2)得到的僵化虫体在次氯酸钠水溶液中浸泡，晾干，在21℃、湿度为75％条件下发菌5d，再用次氯酸钠水溶液浸泡，得到消毒后的僵化发菌蛹；

4)将步骤3)得到的消毒后的僵化发菌蛹在密闭无菌条件下，21℃黑暗培养4d，然后22℃光照培养25～30d，得到双叉犀金龟虫草。

优选的是，步骤1)和步骤3)所述次氯酸钠水溶液的浸泡时间独立的为15min。

优选的是，步骤2)所述注入的方式包括针刺。

优选的是，所述针刺的部位包括双叉犀金龟的环节处。

优选的是，步骤2)所述蛹虫草菌液的注入量为0.5ml/只。

优选的是，步骤2)所述蛹虫草菌液的制备方法包括：

将蛹虫草菌种接种入蛹虫草培养基中进行发酵培养，得到蛹虫草菌液；所述蛹虫草培养基包括以下质量百分含量的组分：20％马铃薯、10％葡萄糖、10％蛋白胨、2.5％磷酸氢二钠、1.5％磷酸二氢钾、0.075％硫酸镁和余量的水。

优选的是，所述发酵培养的条件为：25℃，黑暗，培养5天。

优选的是，步骤4)所述密封条件由消毒的玻璃瓶提供。

优选的是，所述消毒的方法包括用次氯酸钠水溶液清洗。

优选的是，步骤4)所述光照培养的条件为：在日光灯下每天光照10h。

本发明提供了一种双叉犀金龟虫草的培养方法。本发明将蛹虫草菌接种入双叉犀金龟中，培养获得双叉犀金龟虫草。蛹虫草菌具有抗肿瘤、抗疲劳、补肾润肺、抗惊厥作用，对c57bl小鼠lewis肺癌有抑制作用；双叉犀金龟(又名独角仙)含有独角仙素，1976年从独角仙中提取独角仙素，具有抗癌作用，对实体瘤w-256疡瘤有很高活性，对p-388淋巴白血病有边缘活性；二者的结合，具有双层抗癌效果，经济价值高。

附图说明

图1为本发明提供的双叉犀金龟图；

图2为本发明提供的双叉犀金龟虫草图；

图3为本发明提供的双叉犀金龟虫草图；

图4为本发明提供的双叉犀金龟虫草图；

图5为本发明提供的双叉犀金龟虫草图；

图6为本发明提供的双叉犀金龟虫草图；

图7为本发明提供的密闭无菌培养双叉犀金龟虫草图。

具体实施方式

本发明提供了一种双叉犀金龟虫草的培养方法，包括以下步骤：

1)将洗净后的双叉犀金龟蛹体在次氯酸钠水溶液中浸泡，晾干后得到干燥双叉犀金龟蛹体；

2)将蛹虫草菌液注入步骤1)得到的双叉犀金龟蛹体中，在19～25℃黑暗、湿度在75％以上的条件下培养17～20d，得到僵化虫体；

3)将步骤2)得到的僵化虫体在次氯酸钠水溶液中浸泡，晾干，在21℃、湿度为75％条件下发菌5d，再用次氯酸钠水溶液浸泡，得到消毒后的僵化发菌蛹；

4)将步骤3)得到的消毒后的僵化发菌蛹在密闭无菌条件下，21℃黑暗培养4d，然后22℃光照培养25～30d，得到双叉犀金龟虫草。

本发明将洗净后的双叉犀金龟蛹体在次氯酸钠水溶液中浸泡，晾干后得到干燥双叉犀金龟蛹体。在本发明中，所述浸泡的时间为15min，实现对双叉犀金龟蛹体的消毒。本发明对所述次氯酸钠水溶液的浓度没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规浓度次氯酸钠水溶液即可。

得到干燥双叉犀金龟蛹体后，本发明将蛹虫草菌液注入双叉犀金龟蛹体中，在19～25℃黑暗、湿度在75％以上的条件下培养17～20d，得到僵化虫体。在本发明中，所述注入的方式包括针刺。在本发明中，所述针刺的部位包括双叉犀金龟的环节处，环节处昆虫表皮薄，易于刺入。在本发明中，所述蛹虫草菌液的注入量为0.5ml/只。在本发明中，所述蛹虫草菌液的制备方法包括：将蛹虫草菌种接种入蛹虫草培养基中进行发酵培养，得到蛹虫草菌液；所述蛹虫草培养基包括以下质量百分含量的组分：20％马铃薯、10％葡萄糖、10％蛋白胨、2.5％磷酸氢二钠、1.5％磷酸二氢钾、0.075％硫酸镁和余量的水；培养基配方适合蛹虫草菌生长。在本发明中，所述发酵培养的条件为：25℃，黑暗，培养5天。

得到僵化虫体后，本发明将僵化虫体在次氯酸钠水溶液中浸泡，晾干，在21℃、湿度为75％条件下发菌5d，再用次氯酸钠水溶液浸泡，得到消毒后的僵化发菌蛹。本发明再次消毒，能够消除僵化虫体表面其他杂菌。在本发明中，所述浸泡的时间独立的为15min。

得到消毒后的僵化发菌蛹后，本发明将消毒后的僵化发菌蛹在密闭无菌条件下，21℃黑暗培养4d，然后22℃光照培养25～30d，得到双叉犀金龟虫草。本发明培养条件的设置最适合虫草菌生长。在本发明中，所述密封条件由消毒的玻璃瓶提供。在本发明中，所述消毒的方法包括用次氯酸钠水溶液清洗。在本发明中，所述光照培养的条件为：在日光灯下每天光照10h。

下面结合具体实施例对本发明所述的一种双叉犀金龟虫草的培养方法做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

双叉犀金龟用清水洗净后(洗净泥土)，用次氯酸钠水溶液清洗(虫体表面消毒)，晾干后(如图1所示)，在超净工作台中(保持环境干净)，用一次性注射器抽取(防止杂菌污染)0.5毫升虫草菌液，在虫体环节处注射(易于菌液刺入)，放入19℃～25℃温度下，75％相对湿度下，培养17～20d，虫体僵化，得到僵化虫体。

将僵化虫体在次氯酸钠水溶液中浸泡，晾干，在21℃、湿度为75％条件下发菌5d，再用次氯酸钠水溶液浸泡，得到消毒后的僵化发菌蛹；

将消毒后的僵化发菌蛹在密闭无菌条件下(如图7所示)，21℃黑暗培养4d，然后22℃光照培养25～30d，得到双叉犀金龟虫草，如图2～6所示。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。