一种木槿和蜀葵的杂交育种方法与流程

本发明涉及植物杂交育种技术领域，尤其涉及一种木槿和蜀葵的杂交育种方法。

背景技术：

木槿是锦葵目锦葵科的落叶灌木，高3～4米，木槿属植物约200余种，分布于热带和亚热带地。我国有24种和16变种或变型，产于全国各地。在我国，木槿属植物在园林应用上较多，是一种在庭园很常见的灌木花种，中国中部各省原产，各地均有栽培。在园林中可做花篱式绿篱，孤植和丛植均可。主要是因为夏、秋季开花的植物较少，而木槿属植物能从7月初开花，可持续到9月末，且花色艳丽。花朵色彩有纯白、淡粉红、淡紫、紫红等，花形呈钟状，有单瓣、复瓣、重瓣几种。

现有技术中木槿的繁殖方法有播种、压条、扦插、分株，但生产上主要运用扦插繁殖和分株繁殖，这些方法虽能繁殖木槿，但并不能对其进行品质改良。即使是杂交育种，也是采用同属之间的不同种进行杂交，而属间杂交的技术并未有所研究。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种木槿和蜀葵的杂交育种方法，通过属间杂交育种，创制出木槿新品种。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种木槿和蜀葵的杂交育种方法，包括如下步骤：

(1)以木槿为母本，在开花前去掉雄蕊；

(2)将步骤(1)中的雄蕊干燥后收集花粉，灭活，作为诱导花粉，备用；

(3)以蜀葵为父本，开花后收集花粉，将收集的父本花粉与诱导花粉混合，作为混合花粉，备用；

(4)将白榆树叶和缓冲液混合，研磨，离心后中间层作为粘合剂，备用；

(5)取父本植株的柱头，研磨成浆，作为柱头识别蛋白，备用；

(6)按粘合剂、柱头识别蛋白、混合花粉的顺序，依次涂抹到母本柱头，完成授粉。

作为优选，所述木槿为白花单瓣木槿，蜀葵为黄花重瓣蜀葵。

作为优选，所述步骤(1)中去掉雄蕊后对花朵进行套袋。

作为优选，所述步骤(2)中灭活的方法为：用酒精喷花粉至花粉湿润，干燥后冷冻。

作为优选，所述酒精的浓度为70％～99.5％。

作为优选，所述冷冻的温度为-78～-80℃。

作为优选，所述步骤(3)中混合时诱导花粉和父本花粉的体积比为0.9～1.1：0.9～1.1。

作为优选，所述步骤(4)中白榆树叶和缓冲液的用量比为1g：8～12ml。

作为优选，所述缓冲液为ph值7.1～7.3的pbs缓冲液。

作为优选，所述步骤(5)中的柱头为可受性良好的柱头。

本发明提供了一种木槿和蜀葵的杂交育种方法，包括如下步骤：(1)以木槿为母本，在开花前去掉雄蕊；(2)将步骤(1)中的雄蕊干燥后收集花粉，灭活，作为诱导花粉，备用；(3)以蜀葵为父本，开花后收集花粉，将收集的父本花粉与诱导花粉混合，作为混合花粉，备用；(4)将白榆树叶和缓冲液混合，研磨，离心后中间层作为粘合剂，备用；(5)取父本植株的柱头，研磨成浆，作为柱头识别蛋白，备用；(6)按粘合剂、柱头识别蛋白、混合花粉的顺序，依次涂抹到母本柱头，完成授粉。本申请的杂交育种方法可以有效开展木槿和蜀葵的属间杂交，创制锦葵科新品种，提高属间杂交的结实率。

附图说明

图1为亲本和培育出的f1代的叶形差异。

具体实施方式

本发明提供了一种木槿和蜀葵的杂交育种方法，包括如下步骤：

(1)以木槿为母本，在开花前去掉雄蕊；

(2)将步骤(1)中的雄蕊干燥后收集花粉，灭活，作为诱导花粉，备用；

(3)以蜀葵为父本，开花后收集花粉，将收集的父本花粉与诱导花粉混合，作为混合花粉，备用；

(4)将白榆树叶和缓冲液混合，研磨，离心后中间层作为粘合剂，备用；

(5)取父本植株的柱头，研磨成浆，作为柱头识别蛋白，备用；

(6)按粘合剂、柱头识别蛋白、混合花粉的顺序，依次涂抹到母本柱头，完成授粉。

在本发明中，所述杂交的时间优选为6月～9月，进一步优选为7月～8月。

在本发明中，所述木槿优选为白花单瓣木槿，蜀葵优选为黄花重瓣蜀葵。

在本发明中，所述步骤(1)中去掉雄蕊后优选对花朵进行套袋。

在本发明中，所述套袋优选采用白色硫酸纸袋。

在本发明中，所述白色硫酸纸袋的大小优选为15～20cm×8～12cm，进一步优选为18cm×10cm。

在本发明中，所述干燥后的花粉含水量优选为10％～15％，进一步优选为12％～13％，再进一步优选为12.5％。

在本发明中，所述步骤(2)中灭活的方法优选为：用酒精喷花粉至花粉湿润，干燥后冷冻。

在本发明中，所述酒精的浓度优选为70％～99.5％，进一步优选为75％～90％，再进一步优选为80％～85％。

在本发明中，所述冷冻优选采用超低温冰箱。

在本发明中，所述冷冻的温度优选为-78～-80℃，进一步优选为-79℃。

在本发明中，所述步骤(3)中混合时诱导花粉和父本花粉的体积比优选为0.9～1.1：0.9～1.1，进一步优选为1：0.9～1.1，再进一步优选为1：1。

在本发明中，所述步骤(4)中白榆树叶和缓冲液的用量比优选为1g：8～12ml，进一步优选为1g：9～11ml，再进一步优选为1：10ml。

在本发明中，所述步骤(4)中离心的转速优选为10000～14000r/min，进一步优选为12000r/min。

在本发明中，所述步骤(4)中离心的时间优选为3～7min，进一步优选为4～6min，再进一步优选为5min。

在本发明中，所述缓冲液优选为ph值7.1～7.3的pbs缓冲液，进一步优选为ph值7.2的pbs缓冲液。

在本发明中，所述粘合剂优选为上清液与叶片残渣间黄色粘稠状物质。

在本发明中，所述步骤(5)中的柱头优选为可受性良好的柱头。

在本发明中，所述可受性良好的柱头的选择方法优选为：采用联苯胺-过氧化氢法，按1％联苯胺：3％过氧化氢：水＝4：11：22的体积比配制反应液，将父本柱头放入反应液，周围液体呈现蓝色并伴有大量气泡的为可受性良好的柱头。

在本发明中，所述步骤(5)中的研磨优选采用冰浴研磨。

在本发明中，所述步骤(6)中涂抹时优选采用棉签涂抹。

在本发明中，利用灭活后的母本花粉作为诱导花粉，诱导母本柱头分泌柱头识别蛋白，同时利用父本的柱头识别蛋白帮助父本花粉进入母本的花粉管，双重诱导下加用粘稠剂，提高属间杂交的结实率。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

(1)以白花单瓣木槿为母本，在开花前去掉雄蕊，去掉雄蕊后用15cm×8cm的白色硫酸纸袋对花朵进行套袋；

(2)将步骤(1)中的雄蕊干燥至含水量10％，收集花粉，用70％的酒精喷到花粉上至花粉湿润，酒精挥发后用同样的方法再次干燥，放入-78℃的超低温冰箱冷冻，作为诱导花粉，备用；

(3)以黄花重瓣蜀葵为父本，在开花后收集花粉，将收集的父本花粉与诱导花粉按体积比0.9：1.1混合，作为混合花粉，备用；

(4)将白榆树叶和ph值7.1的pbs缓冲液按用量比1g：8ml混合，研磨，10000r/min离心6min，离心后上清液与叶片残渣间黄色粘稠状物质作为粘合剂，备用；

(5)取可受性良好的父本植株柱头，将柱头冰浴研磨成浆，作为柱头识别蛋白，备用；

(6)按粘合剂、柱头识别蛋白、混合花粉的顺序，用棉签依次涂抹到母本柱头，完成授粉。

实施例2

(1)以白花单瓣木槿为母本，在开花前去掉雄蕊，去掉雄蕊后用18cm×10cm的白色硫酸纸袋对花朵进行套袋；

(2)将步骤(1)中的雄蕊干燥至含水量12.5％，收集花粉，用75％的酒精喷到花粉上至花粉湿润，酒精挥发后用同样的方法再次干燥，放入-79℃的超低温冰箱冷冻，作为诱导花粉，备用；

(3)以黄花重瓣蜀葵为父本，在开花后收集花粉，将收集的父本花粉与诱导花粉按体积比1：1混合，作为混合花粉，备用；

(4)将白榆树叶和ph值7.2的pbs缓冲液按用量比1g：10ml混合，研磨，12000r/min离心5min，离心后上清液与叶片残渣间黄色粘稠状物质作为粘合剂，备用；

(5)取可受性良好的父本植株柱头，将柱头冰浴研磨成浆，作为柱头识别蛋白，备用；

(6)按粘合剂、柱头识别蛋白、混合花粉的顺序，用棉签依次涂抹到母本柱头，完成授粉。

实施例3

(1)以白花单瓣木槿为母本，在开花前去掉雄蕊，去掉雄蕊后用20cm×12cm的白色硫酸纸袋对花朵进行套袋；

(2)将步骤(1)中的雄蕊干燥至含水量15％，收集花粉，用99.5％的酒精喷到花粉上至花粉湿润，酒精挥发后用同样的方法再次干燥，放入-80℃的超低温冰箱冷冻，作为诱导花粉，备用；

(3)以黄花重瓣蜀葵为父本，在开花后收集花粉，将收集的父本花粉与诱导花粉按体积比1.1：0.9混合，作为混合花粉，备用；

(4)将白榆树叶和ph值7.3的pbs缓冲液按用量比1g：12ml混合，研磨，14000r/min离心4min，离心后上清液与叶片残渣间黄色粘稠状物质作为粘合剂，备用；

(5)取可受性良好的父本植株柱头，将柱头冰浴研磨成浆，作为柱头识别蛋白，备用；

(6)按粘合剂、柱头识别蛋白、混合花粉的顺序，用棉签依次涂抹到母本柱头，完成授粉。

实验结果：实施例1～3中授粉的花朵数均为10个，平均每个实施例组收获f1代种子42粒。种植收获的f1代种子，f1代植株叶形如附图1所示，从附图1中可以看出，在f1代中幼苗叶型存在显著差异，表明本申请的杂交育种方法达到了创制锦葵科新品种的目的。

由以上实施例可知，本发明提供了一种木槿和蜀葵的杂交育种方法，包括如下步骤：(1)以木槿为母本，在开花前去掉雄蕊；(2)将步骤(1)中的雄蕊干燥后收集花粉，灭活，作为诱导花粉，备用；(3)以蜀葵为父本，开花后收集花粉，将收集的父本花粉与诱导花粉混合，作为混合花粉，备用；(4)将白榆树叶和缓冲液混合，研磨，离心后中间层作为粘合剂，备用；(5)取父本植株的柱头，研磨成浆，作为柱头识别蛋白，备用；(6)按粘合剂、柱头识别蛋白、混合花粉的顺序，依次涂抹到母本柱头，完成授粉。本申请的杂交育种方法可以有效开展木槿和蜀葵的属间杂交，创制锦葵科新品种，提高属间杂交的结实率。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。