一种防治根线虫的生物物智能菌块配方及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种育苗菌块，特别是涉及一种可用于防治植物根部线虫病的活体生 物智能菌块的配方及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 根部线虫是一种定居型内寄生线虫，侵染植物根系产生根结，具有分布广、危害性 大等特点，一方面产生一些化学物质刺激植物寄主形成巨大细胞，在根系形成大量根结，影 响根系对水分和养分的吸收；另一方面因其侵染造成大量伤口，有利于土壤病原菌的次侵 染，这种复合侵染加剧了作物产量的损失和品质的下降。
[0003] 目前，对根部线虫的防治主要是使用化学杀线虫剂的方法，但随着人们越来越重 视环境问题和无公害食品生产的今天，许多对环境污染严重，对人，畜健康有害的高毒、高 残和三致的化学杀线虫剂已经陆续被禁用。
[0004] 本发明是以 ACCC11084:巨大芽抱杆菌 ofe ife/y、 ACCC10632:枯草芽抱杆菌 和 ACCC32001:淡紫拟青霉 (这3个菌种均获购于中国农业微生物菌种保藏 管理中心）的发酵母粉为核心杀线虫成分，辅以天然载体辅料物质（草炭、椰糠、糖渣)、促生 剂(羟烯腺嘌呤、烯腺嘌呤)、凝结剂（聚丙烯酰胺凝胶)、粘合剂(阿拉伯树胶粉)、保护剂(海 藻酸钾)，用专用压片机压制成中间带宽2cm、深为Icm小孔的圆柱形菌块(直径4. 5cm，高 2. 5cm)，制得本发明的生物智能菌块。
[0005] 本发明的生物智能菌块可以代替化学杀线剂的使用，不仅对多种线虫具有强烈的 触杀作用，也可侵染多种植物线虫的卵，而且对线虫微管蛋白有极强亲和力，侵入后其独特 的菌丝能快速穿透虫体体壁及卵壳，使类脂层和几丁质崩解，并通过菌丝在其体内的营养 吸收和繁殖使虫体及卵迅速萎缩脱水，进而死亡消解。
[0006] 本发明的生物智能菌块适用于多种蔬菜、花丼、经济作物的育苗，不仅在苗期能够 防止线虫对植物的危害，而且在移栽到田间或温室后，仍然能够对植物的根线虫起到非常 好的防治作用。移栽15天后对花生根结线虫病、黄瓜根结线虫病、大豆胞囊线虫病、甘薯茎 线虫病等植物线虫病的防效可达90%以上，持效期长达2-3个月，大大减少了植物后续防治 线虫的成本，并具有对人畜安全无毒、不污染环境等有利于生态平衡的特点，满足了国家对 生态农业的发展战略，实现了经济效益和生态效益的高度统一。
【发明内容】
[0007] 菌株ACCCl 1084 为巨大芽抱杆菌 ZfeciBw1S 菌株ACCC10632 为枯草芽抱杆菌菌株ACCC32001为淡紫拟青霉 上述3种菌株均购自于中国农业微生物菌种保 藏管理中心。
[0008] 本发明的生物智能菌块是采用如下方法制备的。
[0009] 步骤一、制备发酵母粉。
[0010] (1)制备菌株ACCC11084的发酵母粉：液体发酵培养基配方：蛋白胨-5.2g， NaCl-5. 5g，MnSO4 · H2CMX 006g，羟烯腺嘌呤-0· 3g，烯腺嘌呤-0· 3g，牛肉膏-3. 3g，琼 脂-0. 2g，pH值调至7. 0,清水补齐至1000g。按上述比例配置好所需发酵培养基的量，然 后将菌种于无菌条件下接入液体发酵培养基中，在30°C条件下于摇床上振荡培养72小时 后(有效活菌数均达到2. 0 X 109cfu/ml)制的一级种子；然后将培养好的一级种子按3%的 比例，接入装有按上述比例配好的已经灭菌并冷却后的发酵罐中进行发酵生产，发酵培养 温度30 °C，通气量开始在I :1.2 ( V · V · m )，培养24小时后增至1:1.5( V · V .m )，48小时后降至1:1( V . V . m )，发酵至72小时发酵完毕，经过镜检发酵液中 ACCCl 1084 :巨大芽孢杆菌的菌量达到20-30亿cfu/ml时为合格菌液，最后按6:4的比例 将菌液与载体搅拌均匀，放入温度在85 ± 2°C左右的气流干燥机进行干燥，最后得到合格的 发酵母粉。
[0011] (2)制备菌株ACCC10632的发酵母粉：液体发酵培养基配方：蛋白胨-5. 2g， NaCl-5. 5g，MnSO4 · H2CMX 006g，羟腺嘌呤-0· 3g，烯酰腺嘌呤-0· 3g，牛肉膏-3. 3g，琼 脂-0. 2g，pH值调至7. 0,清水补齐至1000g。按上述比例配置好所需发酵培养基的量，然后 将菌种于无菌条件下接入液体发酵培养基中，在30°C条件下于摇床上振荡培养72小时后 (有效活菌数均达到2. OX IO9 cfu /ml)制的一级种子；然后将培养好的一级种子按3%的 比例，接入装有按上述比例配好的已经灭菌并冷却后的发酵罐中进行发酵生产，发酵培养 温度30 °C，通气量开始在I : I ( V · V · m )，培养24小时后增至1:1.2 ( V · V ? m )，48小时后继续增至1 : 1.5 ( V · V · m )。发酵至72小时发酵完毕，经过镜 检发酵液中ACCC10632:枯草芽孢杆菌的菌量达到20-30亿cfu/ml时为合格菌液，最后按 6:4的比例将菌液与载体搅拌均匀，放入温度在85±2°C左右的气流干燥机进行干燥，最后 得到合格的发酵母粉。
[0012] (3)制备菌株ACCC32001的发酵母粉：液体培养基配方：去皮切块马铃薯215g，羟 腺嘌呤-0. 3g，烯酰腺嘌呤-0. 3g，加水1000ml煮沸30分钟滤去马铃薯块，将滤液补足至 1000ml，加入葡萄糖20g，溶解后就得到1000ml的液体培养基。按上述比例配置好所需发酵 培养基的量，然后将菌种于无菌条件下接入液体发酵培养基中，在28°C条件下于摇床上振 荡培养72小时后(有效活菌数均达到2. OX IO9 cfu /ml)制的一级种子；然后将培养好的 一级种子按3%的比例，接入装有按上述比例配好的已经灭菌并冷却后的发酵罐中进行发 酵生产，发酵培养温度28 °C，通气量开始在I : I ( V · V · m )，培养24小时后增至 1:1.2 ( V · V · m )，48小时后继续增至1 : 1.5 ( V · V · m )。发酵至72小时 发酵完毕，经过镜检发酵液中ACCC10632:枯草芽孢杆菌的菌量达到20-30亿cfu /ml时为 合格菌液，最后按6:4的比例将菌液与载体搅拌均匀，放入温度在85±2°C左右的气流干燥 机进行干燥，最后得到合格的发酵母粉。
[0013] 以上所述菌液与载体搅拌干燥中，载体为8:2比例的碳酸钙和拉开粉混合物。
[0014] 步骤二、生物智能菌块的制备。
[0015] 按重量百分比将草炭土 69. 4%、椰糠10%、糖渣10%、羟烯腺嘌呤0. 3%、烯腺嘌呤 0. 3%、聚丙烯酰胺凝胶3%、阿拉伯树胶粉2%、海藻酸钾5%的比例混合均匀制成载体物质。然 后将配置好的载体物质与菌株ACCC11084的发酵母粉、制备菌株ACCC10632的发酵母粉、菌 株ACCC32001的发酵母粉，按照重量百分比10:0. 3-0. 8 :0. 3-0. 8:0. 3-0. 8混拌均匀后，用 专用压片机压制成中间带宽2cm、深为Icm小孔的圆柱形菌块(直径4. 5cm，高2. 5cm)，制得 本发明所述得生物智能菌块。
【具体实施方式】
[0016] 为了使本发明的目的、技术方案更加清楚明白，用以下具体实例进行说明，但本发 明不局限于这些具体实例。
[0017] 实施例1 :制备本发明的生物智能菌块。
[0018] 所使用的菌株：菌株ACCCl 1084为巨大芽孢杆菌 菌株 ACCC10632 为枯草芽抱杆菌 ifeciBiAs 菌株 ACCC32001 为 淡紫拟青霉这3种菌株均购自于中国农业微生 物菌种保藏管理中心。
[0019] 首先，制备菌株ACCC11084的发酵母粉：液体发酵培养基配方：蛋白胨-5.2g， NaCl-5. 5g，MnSO4 · H2CMX 006g，羟烯腺嘌呤-0· 3g，烯腺嘌呤-0· 3g，牛肉膏-3. 3g，琼 脂-0. 2g，pH值调至7