擎天树发芽种子的组培繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物无性快繁技术领域，具体地说是一种擎天树发芽种子的组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002]擎天树(Parashorea chinensis Wang Hsie.)，龙脑香科柳桉属，常绿高大乔木，为亚洲热带雨林中最繁茂、最具代表性的树种。树干可高达五六十米，雄居林冠之上，木材坚硬、耐腐性强，木材纹理直，结构均匀，加工容易，刨切面光滑，花纹美观，为制造各种家具的高级用材，具有重要经济价值和科学研宄价值，是国之瑰宝。擎天树分布狭窄，只分布在西双版纳的补蚌和广纳里新寨至景飘一带的20平方公里范围内；生长环境大部分为原始沟谷雨林及山地雨林，多成片生长，组成独立的群落，形成奇特的自然景观，是中国的一级保护植物。
[0003]擎天树开花结实较晚，一般在胸径达40厘米以上才开花结实，结实稀少，且每隔
2-5年才开花结实I次，落果严重，不易采种。擎天树的种子发芽很快，在林地上1-4 d便发芽，在高温多雨环境，有些成熟果尚在母树上，种子就已发芽，严重影响着苗木培育的成功率。擎天树若采用嫩枝扦插或硬枝扦插无性繁殖技术，季节性强，扦插成活率70 %以上的时间是在每年的3月至7月。由于擎天树枝条内含酚类物质，嫩枝扦插褐化严重，硬枝扦插不定根发生时间长，如遇上干旱或高温梅雨恶劣气候条件，擎天树枝条容易干枯或腐烂致死。因擎天树生物特性特异，严重限制着该资源的开发利用。采用组培无性繁殖技术是促进擎天树发展的有效途径。由于擎天树幼嫩茎段密布绒毛，灭菌难度大。为了获取擎天树组培快繁繁殖体，探索擎天树发芽种子灭菌的方法尤为重要。
【发明内容】
[0004]本发明目的是为了保持种子生命力，提高增殖率，全年无间断生产苗木，提供一种擎天树发芽种子的组培繁殖方法。
[0005]本发明的方案是通过这样实现的:
一种擎天树发芽种子的组培繁殖方法，其特征在于:包括预处理、灭菌、初代培养工序，主要操作步骤为:
(1)预处理:将擎天树发芽种子的种翅去掉，用清水冲洗种子后，再剥除种壳，置于30-35 °C无菌水内浸洗2-5 min，得到种胚备用；
(2)灭菌:将备用种胚置于质量浓度0.8-0.9 %。升汞溶液中浸泡，用30-35 °C无菌水清洗5-8次，得到灭菌种胚待培养；
(3)初代培养:将灭菌种胚接种到初代培养基中作一次初代培养，接种3d后种胚开始分株，胚轴伸长，接种20-30 h有褐化物质产生时，将种胚转接到新的初代培养基中作二次初代培养，转接2-3次，得到长有两对真叶，顶芽并带有一对托叶的组培苗。
[0006]以上所述的浸泡的时间为2-5 min。
[0007]以上所述的初代培养基配方的体积浓度为:MS + 80-120 mg/L肌醇+ 8-10 g/L 卡拉胶 + 2-3 mg/L 6-BA + 0.5-1.5 mg/L NAA + 5-15 mg/L VC + 15-45 g/L 鹿糖，pH6.0-7.0o
[0008]以上所述的初代培养控制光照强度为1500-3000 lux，光照时间为10_15 h/d，温度为 25±3 °C。
[0009]以上所述的初代培养基配方的体积浓度为:MS + 100 mg/L肌醇+ 9 g/L卡拉胶+ 2.5 mg/L 6-BA +1.0 mg/L NAA + 15 mg/L VC + 30 g/L 蔗糖，PH6.6。
[0010]以上所述的初代培养的条件为:光照强度2000 lux,光照时间12 h/d,温度25°C。
[0011]本发明具备以下的优点和积极效果:
(I)本发明采用0.8-0.9%。升汞溶液对擎天树种胚进行灭菌，既可以有效地杀死附着在外植体表面的细菌及真菌芽孢，又能防止种胚中毒，保持外植体的生命力，获取优质的无菌外植体。
[0012](2)本发明在初代培养阶段，在接种20-30 h有褐化物质产生时，将种胚转接到新的培养基中培养，转接2-3次的培养，能有效预防种胚褐化，提高培养繁殖成功率，枯死率
3-10%，无菌率 70-94 %。
[0013](3)本发明通过对初代培养基和培养条件的优化，肌醇促进胚状体和芽的形成，缩短培养时间，提高培养效率，同时在培养基中添加VC可以有效防止培养过程中的褐化现象。
[0014](4)本发明方法操作过程简便，条件温和，培养周期短，增殖率高，可满足全年无间断生产苗木的要求，具有较好的经济效益和社会效益。
【附图说明】
[0015]图1为擎天树种胚用0.9 %。升汞灭菌后接种在初代培养基上的状况图。
[0016]图2为种胚胚芽伸长状况图。
[0017]图3为种胚长出一对真叶的状况图。
[0018]图4为种胚长出两对真叶的状况图。
【具体实施方式】
[0019]以下结合实施例描述本发明一种擎天树发芽种子的组培繁殖方法，这些描述并不是对本
【发明内容】
的限定。
[0020]实施例1
将擎天树发芽种子的种翅去掉，用清水冲洗后，再剥除种壳得到完整种胚；将种胚置于35°C无菌水内浸洗3 min，再将种胚置于质量浓度0.9 %。升汞溶液中浸泡3 min，用35°C无菌水清洗7次，然后接种到含有体积浓度MS + 100 mg/L肌醇+ 9 g/L卡拉胶+ 2.5 mg/L6-BA +1.0 mg/L NAA + 10 mg/L VC + 30 g/L蔗糖，pH=6.6的初代培养基中培养，初代培养控制光照强度2000 lux，光照时间12 h/d，温度25°C，接种20-25 h有褐化物质产生时，将种胚转接到新的初代培养基中培养，转接3次，得到长有两对真叶，顶芽并带有一对托叶的组培苗。
[0021]本例培养繁殖成功率较高，枯死率3%，无菌率94%。
[0022]实施例2
将擎天树发芽种子的种翅去掉，用清水冲洗后，再剥除种壳得到完整种胚；将种胚置于30°C无菌水内浸洗2 min，再将种胚置于质量浓度0.8 %。升汞溶液中浸泡2 min，用30°C无菌水清洗5次，然后接种到含有体积浓度MS + 80 mg/L肌醇+ 8 g/L卡拉胶+2 mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L NAA + 5 mg/L VC +15 g/L蔗糖，pH=6.0的初代培养基中培养，初代培养控制光照强度1500 lux,光照时间10h/d，温度22°C，接种25-30 h有褐化物质产生时，将种胚转接到新的初代培养基中培养，转接3次，得到长有两对真叶，顶芽并带有一对托叶的组培苗。
[0023]本例培养繁殖成功率较高，枯死率1%，无菌率88%。
[0024]实施例3
本实施例中擎天树发芽种子的组培繁殖方法如下:
将擎天树发芽种子的种翅去掉，用清水冲洗后，再剥除种壳得到完整种胚；将种胚置于32°C无菌水内浸洗4 min，再将种胚置于质量浓度0.8 %。升汞溶液中浸泡4 min，用32°C无菌水清洗6次，然后接种到含有体积浓度MS + 90mg/L肌醇+ 10 g/L卡拉胶+ 3 mg/L6-