0mg/L KH2P04、200mg/L Ca3(P04)2、28mg/L Fe2(C4H4O6)3 ·2Η20、 7. 5mg/L MnSO4 · 4H20、20000mg/L糖，调节液体增殖培养基的pH值为5. 8,使用高压蒸汽灭 菌锅灭菌25分钟左右，即可。
[0030] 配置固体增殖培养基，其中各组分的浓度为：500mg/L(NH4)2S0 4、250mg/ L MgSO4 · 7H20,250mg/L KH2PO4,200mg/L Ca (NO3) 2 · 4H20,28mg/L FeSO4 · 7H20,7. 5mg/ L MnSO4 · 4H20、0. 2mg/L 6-BA、0. lmg/L NAA、50000 ~lOOOOOmg/L 香蕉、4500mg/L 琼脂、 20000mg/L糖，调节固体增殖培养基的pH值为5. 8,使用高压蒸汽灭菌锅灭菌25分钟左右， 即可。
[0031] 配置生根壮苗培养基，其中各组分的浓度为：825mg/L NH4N03,950mg/L KNO3, 220mg/L CaCl2 ·2Η20，185π^/1 MgSO4 ·7Η20,85π^/1 ΚΗ2Ρ04,0· lmg/L IBA, 100000mg/L香蕉， 4500mg/L 琼脂，20000mg/L 糖。
[0032] 火凤凰的培养过程如下。
[0033] 首先，选取诱导出的火凤凰的类原球茎，直径0. 3cm以上的类原球茎切分成两半， 分别接种于液体增殖培养基和固体增殖培养基中。采用液体培养静置培养的方式设代号为 A，该方法即本专利申请的方法；将固体增殖培养的方式代号设为B。两种培养方式各接种 10瓶，每瓶接种20个种球，并分别编号为Al-A10, Bl-B10。用电子天平秤每瓶种球的重 量。
[0034] A培养方式：将接种后的液体增殖培养基静置于培养架上，培养室温度维持在 25°C，光照强度2000LX，光照时间每天15小时。15天后，切分的类原球茎在切口处长出新 的类原球茎，类原球茎呈嫩绿色且成辐射状分布。将新的类原球茎继续切分后，转入固体增 殖培养基培养，培养条件同液体培养，第30天后长出新的类原球茎。再将新的类原球茎切 分，接种入液体培养基静置培养15天，重复前述液体增殖基培养、固体增殖基培养过程，至 第60天，结束培养。
[0035] B培养方式：将接种后的固体增殖培养基放置于培养架上，培养室温度维持在 25°C，光照强度2000LX，光照时间每天15小时。30天后长出新的类原球茎。将新的类原球 茎切分后，继续接种入固体培养基，继续培养30天。至第60天，结束培养。
[0036] A、B两种培养方式均培养60天后，测量类原球茎增殖和变异的情况。测量结果如 下表1、表2所示。
[0037] 表1 A培养方式的测量结果
[0038]
【主权项】
1. 一种大花蕙兰的培养方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 利用大花蕙兰新芽茎尖诱导产生类原球茎； (2) 将步骤1诱导的类原球茎接种于液体增殖培养基中静置培养14~16天，得到液体 培养类原球茎； (3) 将步骤2得到的液体培养类原球茎取出，切分后接种入固体增殖培养基培养20~30 天，得到固体培养类原球茎； (4) 将步骤3得到的固体培养类原球茎切分后接种于液体增殖培养基中静置培养，依 次重复步骤2、3,当繁殖到所需类原球茎数量后，采用固体增殖培养基培养40~90天，得到 不定芽； (5) 将步骤4制备的不定芽接种到生根壮苗培养基中，培养90~120天，即得种苗； 所述步骤2中，培养条件为：温度24~26 °C，光照强度1500~2000LX，光照时间每天 15~18小时，培养14~16天； 所述步骤3中，培养条件为：温度24~26 °C，光照强度1500~2000LX，光照时间每天 15~18小时； 所述步骤4中，培养条件为：温度24~26 °C，光照强度1500~2000LX，光照时间每天 15~18小时； 所述步骤5中，培养条件为：温度24~26°C，光照强度2500~3000LX，光照时间为每天 15~18小时。
2. 根据权利要求1所述大花蕙兰的培养方法，其特征在于，所述液体增殖培养基的组 成成分及浓度为：500mg/L(NH4) 2S04,250mg/LMgSO4.71120,52511^/1KNO3, 250mg/LKH2PO4, 200mg/LCa3 (PO4) 2,28mg/LFe2(C4H4O6)3 ? 2H20, 7. 5mg/LMnSO4 ? 4H20,20000mg/L糖； 所述固体增殖培养基的组成成分及浓度为：500mg/L(NH4)2S04,250mg/LMgSO4 ? 7H20， 250mg/LKH2PO4, 200mg/LCa(NO3) 2 *4H20, 28mg/LFeSO4 *7H20, 7. 5mg/LMnSO4 *4H20,0. 2mg/ L6-BA, 0?lmg/LNAA，50000~100000mg/L香蕉，4500mg/L琼脂，20000mg/L糖。
3. 根据权利要求I所述大花蕙兰的培养方法，其特征在于，所述步骤2中，培养条件为： 温度25°C，光照强度1500~2000LX，光照时间每天15小时，培养15天。
4. 根据权利要求1所述大花蕙兰的培养方法，其特征在于，所述步骤3、4中，培养条件 为：温度25°C，光照强度1500~2000LX，光照时间每天15小时。
5. 根据权利要求1所述大花蕙兰的培养方法，其特征在于，所述步骤3中，将步骤2制 备的液体培养类原球茎取出，切分后接种入固体增殖培养基静置培养21天，得到固体培养 类原球茎。
6. 根据权利要求1所述大花蕙兰的培养方法，其特征在于，所述步骤4中，当繁殖到所 需类原球茎数量后，采用固体增殖培养基培养60~90天，得到不定芽。
7. 根据权利要求1所述大花蕙兰的培养方法，其特征在于，将步骤4制备的不定芽接 种入生根壮苗培养基中培养90~120天后，得到种苗，种苗经炼苗后即可移栽入温室大棚种 植。
【专利摘要】本发明公开了一种大花蕙兰的培养方法，目的在于解决目前采用组织培养技术繁殖大花蕙兰时，不可避免的会产生变异，影响种苗质量，限制类原球茎繁殖速度的问题。其包括如下步骤：利用芽顶端分身组织诱导类原球茎、类原球茎继代增殖、类原球茎分化产生不定芽、不定芽壮苗培养获得种苗。本发明能够有效解决大花蕙兰种苗生产中的变异问题，降低变异的发生，提高增值率，同时缩短继代培养时间一半以上，变相提高了类原球茎的增殖速率。经测定，本发明使类原球茎的增值速率增加80~120%，变异率降低5~9%，有效解决了大花蕙兰类原球茎增值速率和变异率之间的矛盾。本发明对于大花蕙兰种苗的快速繁殖和工厂化大规模生产，具有重要的意义，具有较好的市场前景和应用价值。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104813943
【申请号】CN201510284906
【发明人】李茜茜, 曾玉冰
【申请人】绵阳市仙龙生物技术有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月28日