一种虎杖苗培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种虎杖苗的培养方法。
【背景技术】
[0002]虎杖是一种具有极高价值的药用植物，以虎杖为原料可提取多种高附加值的药用、美容保健原料。例如，虎杖提取物虎杖甙可用于镇咳、调血脂、降低胆固醇、抗休克等，以虎杖甙为主要成分的虎杖苷注射液是中国首个在美国提交临床申请研宄的中药一类创新药物；虎杖提取物白藜芦醇及其苷类对癌变过程中细胞及组织变异都有抑制作用，白藜芦醇已被列为抗心血管、抗癌最有前途的药物之一，能够降血脂、抗病毒、抑菌、抗氧化、增强机体免疫力，白藜芦醇在保健领域具有其他中药材不可替代的优越性；虎杖中的蒽醌类化合物有显著的抗菌、抗病毒和消炎作用，可防止血栓形成，改善微循环，提高细胞免疫力。因此，虎杖的工业化种植栽培成为人们关注的问题。
[0003]目前，虎杖的种植栽培主要是采用传统的苗圃育苗法进行育苗，生长周期长，占地面积大，难以实现高效快速的大规模工业化种植栽培。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题在于，提供一种虎杖苗培养方法，克服现有技术难以实现高效快速的大规模工业化种植栽培的缺陷。
[0005]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:提供一种虎杖苗培养方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0006]S1、无菌芽培养:以虎杖嫩茎或嫩芽为外植体，先经酒精消毒，后用无菌水清洗I次，再采用(0.05%?0.15% )HgCl2进行灭菌后，经无菌水清洗3-5次，然后接在无菌芽培养基上进行培养，约12?18天后获得无菌芽；或将刚长出嫩芽的虎杖放入生化培养箱中，在38?40 °C条件下培养6?8天后，剪取虎杖嫩茎或嫩芽经酒精消毒和(0.05%?
0.15% )HgCl2灭菌后，经无菌水清洗3-5次后，切取约2_长的芽尖接入无菌芽培养基培养，嫩芽生长后，再切取约2mm长的芽尖接入无菌芽培养基培养，如此反复三次或三次以上，得到脱毒的无菌芽；
[0007]该无菌芽培养基包括植物生长激素、碳源、1/2MS和/或MS，配制方法为:以1/2MS和/或MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成；该无菌芽培养基的ρΗ6.5 ?ρΗ7 ;
[0008]S2、丛生芽培养:剪取长出的无菌芽，接种到丛生芽培养基上培养；该丛生芽培养基包括植物生长激素、碳源和1/2MS，配制方法为:以1/2MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成；该丛生芽培养基的ΡΗ6.5?ρΗ7 ;
[0009]S3、壮苗、生根培养:待丛生芽长到Icm左右长后分瓶培养，培养基为壮苗、生根培养基；该壮苗、生根培养基包括植物生长激素、碳源、1/2MS和/或MS，配制方法为:以1/2MS和/或MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成；该壮苗、生根培养基的ρΗ6.5 ?ρΗ7 ;
[0010]S4、炼苗移栽；
[0011]步骤SI?S3的培养条件:温度为15?30°C，光照强度2000?3000LUX，光照时间6?12小时/天；
[0012]步骤S4的培养条件:炼苗基质为园土 +泥炭质量配比(1.5?2.5):1，遮阴网进行遮阴，湿度为60-70%。
[0013]在本发明的虎杖苗培养方法中，步骤S1、S2、S3中的植物生长激素为6-BA和/或NAA, 6-BA 浓度为 0.lmg/L-2.0mg/L，NAA 浓度为 0.lmg/L-1.0mg/L。
[0014]在本发明的虎杖苗培养方法中，步骤SI中使用的酒精浓度为70%?80%。
[0015]在本发明的虎杖苗培养方法中，步骤S2中，无菌芽的长度约I厘米。
[0016]在本发明的虎杖苗培养方法中，步骤S1、S2、S3中的无菌芽培养基、丛生芽培养基、壮苗、生根培养基pH6.8 ;培养温度为25±2°C，光照强度2800?3000LUX，光照时间10?12小时/天。
[0017]在本发明的虎杖苗培养方法中，所述碳源为蔗糖或葡萄糖，使用蔗糖时浓度为18?22g/L，使用葡萄糖时浓度为25?40g/L。
[0018]在本发明的虎杖苗培养方法中，所述无菌芽培养基中所含的琼脂粉为5?6g/L。
[0019]在本发明的虎杖苗培养方法中，所述丛生芽培养基中所含的琼脂粉为5?6g/L。
[0020]在本发明的虎杖苗培养方法中，所述壮苗、生根培养基中所含的琼脂粉为5?6g/L0
[0021]实施本发明虎杖苗培养方法，与现有技术比较，其有益效果是:
[0022]1.生长速度和种植效益大大提高；本发明的方法虎杖芽的一个月平均增殖系数达10?14.8，而现有的虎杖分株移栽方法一芽最多只能长成一株苗；
[0023]2.无菌芽经过脱毒处理后，生长速度和种植效益显著提高；本发明的方法，经脱毒处理一个月后植株丛生生长，高度均匀，平均叶宽1.4cm，叶片数4?6片，移栽后生长较快；未脱毒处理植株多数单株生长，高度大小不均匀，平均叶宽0.4?1.0cm,叶片数I?3片，移栽后生长较慢；
[0024]3.成本低，环境污染小；
[0025]4.工艺较简单，一年四季均可生产，适合大规模育苗生产。
【具体实施方式】
[0026]下面将结合实施例对本发明作进一步说明。
[0027]实施例一
[0028]本发明一种虎杖苗培养方法包括如下步骤:
[0029]第一步，进行无菌芽培养:以虎杖嫩茎或嫩芽为外植体，先经酒精消毒，后用无菌水清洗I次，再采用(0.05%?0.15% ) HgCl2进行灭菌后，经无菌水清洗3-5次，然后接在无菌芽培养基上进行培养，约12?18天后获得无菌芽。
[0030]消毒酒精的浓度可用70%?80%，例如，采用75%的酒精消毒效果良好。
[0031]培养天数主要决定于虎杖嫩芽的生长速度，一般无菌芽生长至I厘米左右为宜。当然，无菌芽长于I厘米(例如生长至1.5厘米)或短于I厘米(例如生长至0.5厘米)，不影响本发明目的的实现。
[0032]无菌芽培养基包括植物生长激素、碳源、1/2MS和/或MS，配制方法为:以1/2MS和/或MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成。无菌芽培养基的pH6.5?pH70
[0033]植物生长激素可采用包括但不限于6-BA、NAA或同时使用6-BA和NAA。6-BA的加入量为(0.lmg/L-2.0mg/L)，NAA的加入量为(0.lmg/L-1.0mg/L)。在步骤二、步骤三中，采用的植物生长激素、碳源及其加入量范围与步骤一相同。
[0034]碳源可以采用包括但不限于蔗糖、葡萄糖。使用蔗糖时，浓度为18?22g/L，使用葡萄糖时，浓度为25?40g/L。
[0035]无菌芽培养基pH 6.8时，效果良好。
[0036]无菌芽培养基可以加入凝固剂，例如，可加入琼脂粉、卡拉胶等，琼脂粉的加入量为5?6g/L ;卡拉胶的加入量为8?15g/L。
[0037]虎杖的无菌芽、丛生芽、壮苗和生根培养基配方可采用包括但不限于:
[0038]UMS+6-BA1.0mg/L
[0039]2、MS+NAA0.lmg/L
[0040]3、MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L[0041 ] 4、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L
[0042]5、MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L
[0043]6、MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L
[0044]7U/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L
[0045]8U/2MS+MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L
[0046]以上