各培养基中，还须加入碳源，碳源采用蔗糖时，加入量为(18?22)g/L，碳源采用葡萄糖时，加入量为(25?40)g/L。
[0047]此外，以上各培养基还可加入凝固剂，凝固剂采用琼脂粉时，加入量为5?6g/L ;凝固剂采用卡拉胶时，加入量为8?15g/L。
[0048]注:
[0049]MS培养基??是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。故这种培养基就用他们的名字来命名。
[0050]1/2MS培养基:是MS培养基中的钙盐和大量元素的量减半的培养基，也是常用的培养基。
[0051]植物生长激素6-BA:6-苄氨基嘌呤，是一种细胞分裂素，英文通用名为6-BenzyIaminopurine,分子式为 C12H11N50
[0052]植物生长激素NAA: 1-Naphthaleneacetic acid，萘乙酸，简称NAA，是一种植物生长素。
[0053]第二步，进行丛生芽培养:剪取第一步培养长出的无菌芽，接种到丛生芽培养基上培养。
[0054]丛生芽培养基包括植物生长激素、碳源和1/2MS，配制方法为:以1/2MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成。丛生芽培养基的PH6.5?pH7。
[0055]丛生芽培养基还可加入凝固剂，常用的凝固剂琼脂粉、卡拉胶等，琼脂粉的加入量为5?6g/L，卡拉胶的加入量为8?15g/L。
[0056]第三步，壮苗、生根培养:待丛生芽长到Icm左右长后分瓶培养，培养基为壮苗、生根培养基。
[0057]壮苗、生根培养基包括植物生长激素、碳源、1/2MS和/或MS，配制方法为:以1/2MS和/或MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成。壮苗、生根培养基的 pH6.5 ?pH7o
[0058]壮苗、生根培养基还可加入凝固剂，常用的凝固剂琼脂粉、卡拉胶等，琼脂粉的加入量为5?6g/L，卡拉胶的加入量为8?15g/L。
[0059]第四步，进行炼苗移栽。
[0060]上述步骤一至三的培养温度为15?30°C，光照强度2000?3000LUX，光照时间6?12小时/天。在培养温度为25±2°C，光照强度2800?3000LUX，光照时间10?12小时/天时，效果最佳。
[0061]步骤S4的培养条件为:炼苗基质园土 +泥炭质量配比(1.5?2.5):1，遮阴网进行遮阴，湿度为60-70%。
[0062]实施例二
[0063]本实施例与实施例一基本相同，区别在于:
[0064]在步骤一中，将“进行无菌芽培养:以虎杖嫩茎或嫩芽为外植体，先经酒精消毒，后用无菌水清洗I次，再采用(0.05%?0.15% )HgCl2进行灭菌后，经无菌水清洗3-5次，然后接在无菌芽培养基上进行培养，约12?18天后获得无菌芽”。
[0065]或将长出嫩芽的虎杖放入生化培养箱中，在38?40°C条件下培养6?8天后，剪取虎杖嫩茎或嫩芽经酒精消毒和(0.05%?0.15%)HgCl2灭菌后，经无菌水清洗3-5次后，切取约2_长的芽尖放入无菌芽培养基培养，嫩芽生长后，再切取约2_长的芽尖放入无菌芽培养基培养，如此反复三次或三次以上，得到脱毒的无菌芽。
【主权项】
1.一种虎杖苗培养方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、无菌芽培养:以虎杖嫩茎或嫩芽为外植体，先经酒精消毒，后用无菌水清洗I次，再采用(0.05%?0.15%) HgCl2进行灭菌后，经无菌水清洗3-5次，然后接在无菌芽培养基上进行培养，约12?18天后获得无菌芽；或将刚长出嫩芽的虎杖放入生化培养箱中，在38?40°C条件下培养6?8天后，剪取虎杖嫩芽经酒精消毒和(0.05%?0.15%)取(:12灭菌后，经无菌水洗3-5次后，切取约2_长的芽尖接入无菌芽培养基培养，嫩芽生长后，再切取约2mm长的芽尖接入无菌芽培养基培养，如此反复三次或三次以上，得到脱毒的无菌芽。 该无菌芽培养基包括植物生长激素、碳源、1/2MS和/或MS,配制方法为:以1/2MS和/或MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成；该无菌芽培养基的pH6.5?PH7 ； 52、丛生芽培养:剪取长出的无菌芽，接种到丛生芽培养基上培养；该丛生芽培养基包括植物生长激素、碳源和1/2MS，配制方法为:以1/2MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成；该丛生芽培养基的PH6.5?pH7 ; 53、壮苗、生根培养:待丛生芽长到Icm左右长后分瓶培养，培养基为壮苗、生根培养基；该壮苗、生根培养基包括植物生长激素、碳源、1/2MS和/或MS，配制方法为:以1/2MS和/或MS为基本培养基，加入适量植物生长激素和碳源配制而成；该壮苗、生根培养基的ρΗ6.5 ?ρΗ7 ; 54、炼苗移栽； 步骤SI?S3的培养条件:温度为15?30°C，光照强度2000?3000LUX，光照时间6?12小时/天； 步骤S4的培养条件:炼苗基质园土 +泥炭质量配比(1.5?2.5):1，遮阴网进行遮阴，湿度为60-70%。2.如权利要求1所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，步骤S1、S2、S3中的植物生长激素为 6-BA 和 / 或 NAA，6-BA 浓度为 0.lmg/L-2.0mg/L，NAA 浓度为 0.lmg/L-1.0mg/L。3.如权利要求1所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，步骤SI中使用的酒精浓度为70%?80%。4.如权利要求1所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，步骤S2中，无菌芽的长度约I厘米。5.如权利要求1所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，步骤S1、S2、S3中的无菌芽培养基、丛生芽培养基、壮苗、生根培养基PH6.8 ;培养温度为25±2°C，光照强度2800?3000LUX，光照时间10?12小时/天。6.如权利要求1所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，所述碳源为蔗糖或葡萄糖，使用蔗糖时浓度为18?22g/L，使用葡萄糖时浓度为25?40g/L。7.如权利要求1至6之一所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，所述无菌芽培养基包括琼脂粉，琼脂粉浓度为5?6g/L。8.如权利要求1至6之一所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，所述丛生芽培养基包括琼脂粉，琼脂粉浓度为5?6g/L。9.如权利要求1至6之一所述的虎杖苗培养方法，其特征在于，所述壮苗、生根培养基包括琼脂粉，琼脂粉浓度为5?6g/L。
【专利摘要】一种虎杖苗培养方法，包括无菌芽培养：以虎杖嫩茎或嫩芽为外植体，经酒精消毒、(0.05％～0.15％)HgCl2灭菌后，无菌水清洗、接种在1/2MS或MS加适量植物生长激素的培养基上培养12～18天获得无菌芽；丛生芽培养：剪取长出无菌芽，接种到以1/2MS加适量植物生长激素配制的丛生芽培养基上培养；壮苗、生根培养：丛生芽长到1cm左右长接种到1/2MS和/或MS加适量植物生长激素的壮苗、生根培养基中分瓶培养，上述步骤培养温度15～30℃，光照强度2000～3000LUX，光照时间6～12小时/天；炼苗移栽；将生根再生植株移栽到园土+泥炭(2：1)基质中，遮阴网遮阴，湿度60-70％，15～30天出圃。本发明大大提高虎杖苗生长速度和种植效益，成本低，污染小，工艺较简单，四季可生产，适合大规模育苗。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN104885933
【申请号】CN201510229743
【发明人】覃国乐, 何寻阳, 韦英明, 韩苗苗, 吴峰
【申请人】深圳市新华南方生物科技股份有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月7日