一种梨杂交播种育苗方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业生产领域，具体涉及一种梨杂交播种育苗方法。
【背景技术】
[0002] 梨是多年生木本植物，其果实味道鲜美，营养价值丰富，是人们最为喜爱的鲜食水 果之一。近十几年，我国选育获得具有高产、抗病虫害等抗外界不良条件特性的优良新品种 砂梨有50多个，如翠冠、黄冠、脆绿、华酥、中梨1号等。这些品种大都是通过常规杂交育种 方法选育而成的，即在田间取花粉后置于恒温箱烘干，授粉时大多采用铅笔头攒取花粉，授 粉后套纸袋隔离花粉，待果实成熟后，取种，砂藏沉积，播种育苗，移栽，开花后连续3年的 经济性状鉴定，待性状稳定后进行高接区试。而能否在一个杂种后代筛选出优良株，除了与 配制杂交组合外有关，还与配制培育后代杂种群体数量有一定关系，一般一个杂交组合需 150株杂交单株进行培育筛选。
[0003] 童期是果树杂交育种的必经阶段，果树的实生后代从播种到成花挂果要经历数年 甚至数十年，多年童期一直是缩短木本果树有性杂交育种周期最大的制约要素也是不能绕 开的障碍。童程是一个空间的概念，指实生树始果点至根颈部之间的枝干长度，通常以主干 高度作为衡量指标。就实生树的树冠而言，可以分成童区和成年区两部分，树冠的上部和外 围能结果的部分称为成年区，树冠的下部和内膛处于童期阶段，称为童区。很多研宄表明， 童程和童期呈正相关，童程长，童期长，反之则短[李载龙，沈德绪，郑淑群.梨实生苗的童 程、结果和遗传[J].浙江农业学学报，1981，7(3) :51-58;盛炳成，陶建敏，徐喜楼，等.苹 果杂种实生苗生长与童期相关的研宄[J].南京农业大学学报，条1992, 15 (2) : 130-133.]， 反映了实生苗通过童期需要一定的高生长量。崔艳波等[崔艳波，张绍铃，吴华清，等.梨 杂交后代童期和童程的研宄[J].中国农学通报，2011，27(2) : 128-131.]对梨8个杂交组合 后代进行研宄表明，8个组合的杂种实生后代始花节位数、节间长度、干径与童程存在相关 性，始花节位数少的组合往往童程明显较低。因此，越早播种对缩短童期和童程十分重要。
[0004] -般梨果实为5-6个心室，每个心室1-2粒种子，一个果实中含有饱满种子数为 4-10粒。影响种子萌发的因素包括温度、光照、水分、氧气等环境因子以及种子自身的休眠 特性等有关，而引起梨种子休眠的主要有种皮障碍、种胚休眠和种胚后熟，而解除休眠的主 要方法为低温层积处理和植物生长调节剂处理。现研宄报道采用去除种壳、种皮，可以使完 熟后的梨种子在适宜条件下迅速通过休眠，进入幼苗生长状态[王月志，戴美松，张树军， 等.早熟砂梨种子萌发的影响因素分析[J].浙江农业科学，2012(8):1130-1133]。GA具 有破除种子休眠、促进种子萌发的作用，这在不同物种和砂梨中都有相关报道[蔺经，杨青 松，李小刚，颜志梅，盛宝龙.砂梨种子休眠原因与解除休眠方法的研宄[J]。江西农业 大学学报，2006, 28 (4) : 526-528]。而采用传统砂藏，种子发芽较迟，且在砂藏过程中种子易 发霉。虽然采用以上方法能打破种子休眠80 %以上，但是在播种育苗时，梨苗猝倒病发生日 趋来重。
[0005] 猝倒病发生时主要症状有3种类型：①种子或幼苗在未出土前即遭到病菌侵染而 腐烂，苗床常见到的是成片缺苗。②幼苗出土后其基部呈水渍状腐烂，缢缩，幼苗倒伏，以后 幼苗和幼根相继腐烂。当湿度适宜，倒伏幼苗与健苗相接触时，病苗的菌丝体通过病苗延 伸到健苗子叶上去，使子叶叶部先发病。幼苗倒伏通常在幼苗出土后1个月内出现，这一时 期是病害发生最严重时期。③在梨幼苗基部木质化后先是基部变色，受病苗木枯死，但不 倒伏，后期也形成根腐，此症状即为立枯病[马桂珍.梨苗猝倒病（立枯病）的发生与防 治.新农业，2000 (9) : 16]。
[0006] 由于梨属于自交不亲和树种，其种子多属于F1代杂交种，遗传组成各异，因此不 同种子间的休眠性也会存在差异。为提高砂梨种子出苗的整齐性和成苗率，本研宄较为全 面地分析了抑制砂梨种子萌发的内在因素，改进现有杂种播种育苗培方法，对提高育种效 率，缩短育种进程具有重大意义。
【发明内容】
[0007] 本发明要解决的技术问题是提供一种梨杂交播种育苗方法，以解决现有技术存在 的发芽率低、出苗不整齐、幼苗期猝倒病严重及育苗周期长等问题。
[0008] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0009] 一种梨杂交播种育苗方法，它包括如下步骤：
[0010] ⑴田间杂交：在父本梨树枝芽于萌动期前全树喷施3~5度石硫合剂一次，在 梨树花芽萌动时，采集花芽枝条于25°C下人工催花，待花开放时收集父本花粉；在自交不 亲和母本梨树的现蕾初期，搭建防虫网，并将收集的父本花粉配制成授粉液对母本花蕾进 行喷雾授粉，谢花后，解除防虫网；对自交亲和母本梨树进行人工去雄、点授和果实套袋处 理；
[0011] (2)果实采收与后熟贮藏：将步骤（1)中的梨树果实7~8成熟时采收，选无病虫 害果实用80%多菌灵可湿性粉剂500倍液浸果1~3分钟后，静置晾干后于密封空间内用 1-甲基环丙烯处理12~24h，再用微孔膜保鲜袋封口后贮藏；
[0012] (3)取种：将步骤（2)中贮藏后的梨树果实消毒后在超净工作台上进行取种，将种 子于20%质量分数的硫酸水溶液中浸泡5~30s，用无菌水清洗1~3次；
[0013] (4)接种培养：将步骤（3)中处理后的种子接种于培养基试管中，先置于冷库中进 行暗培养，后置于组培间进行光照培养，得到梨树幼苗；
[0014] (5)营养钵移苗：选取步骤（4)中所得的梨树幼苗中长出3~4片真叶的梨树幼 苗进行营养钵移苗，每钵种植一株梨树幼苗；
[0015] (6)大田移栽：于当年9月底之前选取步骤（5)中所得的高度为20~30cm的梨 树幼苗，带土进行大田移苗。
[0016] 步骤（1)中，所述田间杂交方法可参考专利"一种梨树快速杂交育种方 法"（ZL201210314101. 7)。
[0017] 步骤⑵中，密封空间内，1-甲基环丙烯的浓度为1~3ul/L。
[0018] 步骤⑵中，所述的微孔膜保鲜袋厚度为0? 025mm，孔径为0? 05 y m，材料为PVC。
[0019] 步骤⑵中，经1-甲基环丙烯处理后的种子于微孔膜保鲜袋中贮藏的时间为1~ 21天，优选14~21天。
[0020] 步骤（3)中，所述的消毒步骤为：将梨树果实于次氯酸钠水溶液中浸泡消毒20~ 30分钟。
[0021] 步骤⑷中，所述的培养基为如下4种培养基之一：
[0022] MS 培养基 +25g/L 蔗糖 +5. Og/L 琼脂粉，pH5. 8 ;
[0023] MS培养基+lg/L活性碳+25g/L蔗糖+5. Og/L琼脂粉，pH5. 8;
[0024] MS 培养基+0?5mg/L GA+25g/L 蔗糖 +5. Og/L 琼脂粉，pH5. 8;
[0025] 0? 2mg/LIBA+0. 5mg/LGA3+lg/L活性碳+25g/L蔗糖+5.Og/L琼脂粉，pH5. 8。
[0026]其中，优选的培养基为0?2mg/L IBA+0. 5mg/L GA3+lg/L活性碳+25g/L蔗糖+5. 0g/ L琼脂粉，pH 5.8。
[0027] 步骤⑷中，所述的暗培养的方法为1~3°C的冷库中暗培养30~50天，所述的 光培养的方法为25°C下，1500~20001ux光照下的组培间中培养40~50天。
[0028] 步骤（4)中，所述的试管的规格为口径30cm，高150cm，接种培养基的深度为30~ 40cm ；
[0029] 步骤（5)中，所述的营养钵规格为选取直径为6~8cm，高10~12cm黑色塑料钵。
[0030] 步骤（5)中，所述的移栽营养钵中，营养土由粘土、泥炭土和輕石以1:3:1的质量 比组成。
[0031] 步骤（5)中，幼苗移苗至营养钵后，用遮阳网覆盖4~7天。
[0032] 步骤（6)中，高度未达20~30cm的梨树幼苗于第二年2月中下旬带土进行大田 移苗。
[0033] 有益效果：
[0034] 与现有技术相比，本发明采用梨种子在果实采摘经贮藏后熟处理后，直接取种在 培养基中进行接种，然后进行低温层积打破休眠，最后直接在培养基中长出幼苗，比传统育 苗方法节省大量时间和劳动力，即采用培养基播种育苗，在梨树童期中，可实现提前1年杂 种鉴定，缩短育苗进程；同时无菌化育苗可避免幼期猝倒病，出苗整齐，成苗率高，且保证杂 种后代单株数量。
【附图说明】
[0035] 图1为本发明方法流程图。
【具体实施方式】
[0036] 实施例1:不同处理方法对梨种子发芽的影响
[0037] 试验地点：在江苏省农业科学院园艺研宄所梨资源圃进行
[0038] 试验品种：
[0039] 研宄对象为翠冠梨果实，于果实7~8成熟时采收（均为套袋果），采收当天运回 实验室，然后选无病虫害果实在常温（25°C )进行各试验处理。
[0040] 试验方法
[0041] ①常规果实贮藏对梨种子发芽率及出苗测定试验
[0042]于1，7,14和21d取种4个时期处理，每组100粒种子，每处理3个重复，调查不同 时期取种时果实烂果率，然后将种子洗净凉干，种子沙藏3-5°C的冰箱2个月，春季进行穴 盘播种出苗试验。
[0043] ②延长果实常温货架期对梨种子发芽率及出苗测定试验
[0044]首先用80 %多菌灵可湿性粉剂500倍浸果1~3分钟，凉干后用在密封房间用 1-MCP(浓度为1~3ul/L)处理24h，最后用厚度为0.025mm，孔径为0.05ym，PVC材料的 微孔膜保鲜袋（国家农产品保鲜工程技术研宄中心提供）封口后放入货架。于1，7, 14和 21d取种4个时期处理，每组100粒种子，每处理3个重复，调查不同时期取种时果实烂果 率，然后将种子洗净凉干，种子沙藏3-5°C的冰箱2个月，春季进行穴盘播种出苗试验。
[0045] ③不同硫酸处理时对种子发芽影响播种处理
[0046] 选取贮藏14天果实取的种子，在沙贮藏前将种子