一种猕猴桃初代培养芽诱导方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种猕猴桃初代培养芽诱导方法，属于猕猴桃繁殖技术领域。
【背景技术】
[0002] 猕猴桃是人工驯化栽培的野生果树，称猴桃果实含有丰富的营养成分，丰富的维 生素，矿质元素以及14种氨基酸，每1009鲜果肉中Vc达到90-420mg，享有"维生素 C之 王"的美称。猕猴桃可鲜食，也可加工成果酱果汁等，还有医疗保健作用，是深受人们喜爱的 水果。红阳猕猴桃属于中华猕猴桃系列，是在四川称猴桃原产地苍溪发现的自然变异品种， 早果性、丰产性和抗逆性强，具有极高的推广前景，其红肉的性状极具开发利用价值。
[0003] 猕猴桃是雌雄异株，采用种子繁殖，周期长，且不易获得大批雌株群体，而利用扦 插、嫁接，成活率低，效率低。采用传统方法已经不能满足规模化种植的要求了。因而采用 组织培养技术繁殖猕猴桃成为重要的良种繁育途径。在猕猴桃组培中，不同的品种存在基 因型差异，不同品种需要不同的培养基。以往对红阳猕猴桃的研究中，以MS为基本培养基 进行研究，得出丛生芽诱导率最高只有27. 27%，极大地影响了猕猴桃快繁体系的建立，制 约了红阳猕猴桃的规模化生产。
[0004] 因此，目前的猕猴桃丛生芽诱导技术，存活率和萌发率过低，且褐化率过高，严重 影响了猕猴桃幼芽品质，无法满足继代增殖的需要。
【发明内容】
[0005] 发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供了一种猕猴桃初代培养 芽诱导方法。
[0006] 技术方案：为实现上述目的，本发明提供一种猕猴桃初代培养芽诱导方法，包括以 下步骤：
[0007] (1)外植体选择：选择猕猴桃当年生枝条为外植体，用剪刀剪掉后插在水中以防 水分蒸发；
[0008] (2)外植体消毒：将步骤（1)所得猕猴桃枝条叶片剪掉，然后初修剪、清洗，再转到 无菌环境中，消毒，冲洗，再修剪，得茎段；
[0009] (3)接种：将上述茎段接种于芽诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段；
[0010] (4)芽诱导培养：将接种后的外植体放在培养室中，先在弱光条件下培养，再在强 光条件下培养。
[0011] 作为优选，所述步骤（2)中初修剪和清洗的方法为：将所述枝条的长条先剪成 5_8cm长枝条，经过洗衣粉清洗，最后流水冲洗2_4h。
[0012] 作为另一种优选，所述步骤（2)中消毒、冲洗和再修剪的方法为：先用75%酒精消 毒20-30秒，再用0. 1 %升萊消毒6-8分钟，再用无菌水冲洗8-10次后，剪成l-2cm长的莖 段。
[0013] 作为另一种优选，所述步骤（3)中培养基为WPM基本培养基，其还包括以下成分： 6-苄基氨基嘌呤0· 5-2mg/L、萘乙酸0· 1-lmg/L、活性炭2-5mg/L、维生素 C 5-10mg/L、琼脂 7g/L、鹿糖 30g/L。
[0014] 作为另一种优选，所述步骤（3)中培养基调节pH为5. 8。
[0015] 作为另一种优选，所述步骤（4)中弱光条件为：光强为800-lOOOlux，培养时间为7 天。
[0016] 作为另一种优选，所述步骤（4)中强光条件为：光强为2500-30001UX，培养时间为 15-25 天。
[0017] 作为另一种优选，所述步骤（4)培养室中培养温度为25 士 2°C。
[0018] 作为另一种优选，所述猕猴桃为红阳猕猴桃。
[0019] 本发明中所述WPM基本培养基为本领域常用培养基，现有技术中已有记载。
[0020] 有益效果：相对于现有技术，本发明猕猴桃初代培养芽诱导方法，不仅具有现有技 术中遗传性状稳定和培养时间短的优势，最重要的是通过整个方法，以及特殊的处理，大大 提高了外植体存活率和萌发率，同时也避免了出现褐化现象。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
[0022] 实施例1
[0023] (1)外植体选择：选择红阳猕猴桃当年生枝条为外植体，用剪刀剪掉后插在水中 以防水分蒸发；
[0024] (2)外植体消毒：将步骤⑴所得猕猴桃枝条叶片剪掉，然后枝条的长条先剪成 5-8cm长枝条，经过洗衣粉清洗，最后流水冲洗2h，再转到无菌操作台上，先用75 %酒精消 毒20秒，再用0. 1 %升汞消毒6分钟，再用无菌水冲洗8次后，剪成l-2cm长的茎段；
[0025] (3)接种：将上述茎段接种于芽诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段，所述培养基 为WPM基本培养基，其还包括以下成分：6_苄基氨基嘌呤0. 5mg/L、萘乙酸0. lmg/L、活性炭 2mg/L、维生素 C 5mg/L、琼脂7g/L、蔗糖30g/L，调节培养基pH为5. 8 ;
[0026] (4)芽诱导培养：将接种后的外植体放在培养室中，培养温度为25 士 2°C，先在光 强为8001ux的弱光条件下培养，再在光强为25001ux的强光条件下培养15天。
[0027] 实施例2
[0028] (1)外植体选择：选择红阳猕猴桃当年生枝条为外植体，用剪刀剪掉后插在水中 以防水分蒸发；
[0029] (2)外植体消毒：将步骤⑴所得猕猴桃枝条叶片剪掉，然后枝条的长条先剪成 5-8cm长枝条，经过洗衣粉清洗，最后流水冲洗4h，再转到无菌操作台上，先用75 %酒精消 毒30秒，再用0. 1 %升汞消毒8分钟，再用无菌水冲洗10次后，剪成l-2cm长的茎段；
[0030] (3)接种：将上述茎段接种于芽诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段，所述培养基 为WPM基本培养基，其还包括以下成分：6_苄基氨基嘌呤2mg/L、萘乙酸lmg/L、活性炭5mg/ L、维生素 C10mg/L、琼脂7g/L、蔗糖30g/L，调节培养基pH为5. 8 ;
[0031] (4)芽诱导培养：将接种后的外植体放在培养室中，培养温度为25 士 2°C，先在光 强为1000 Iux的弱光条件下培养，再在光强为30001ux的强光条件下培养25天。
[0032] 实施例3
[0033] (1)外植体选择：选择红阳猕猴桃当年生枝条为外植体，用剪刀剪掉后插在水中 以防水分蒸发；
[0034] (2)外植体消毒：将步骤⑴所得猕猴桃枝条叶片剪掉，然后枝条的长条先剪成 5-8cm长枝条，经过洗衣粉清洗，最后流水冲洗3h，再转到无菌操作台上，先用75 %酒精消 毒25秒，再用0. 1 %升汞消毒7分钟，再用无菌水冲洗9次后，剪成l-2cm长的茎段；
[0035] (3)接种：将上述茎段接种于芽诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段，所述培养基 为WPM基本培养基，其还包括以下成分：6_苄基氨基嘌呤I.