东方高原鳅的人工繁殖技术的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及水产养殖技术领域，具体涉及一种东方高原鳅的人工繁殖技术。
【背景技术】
[0002] 东方高原鳅Triplophysaorientalis(Herzenstein)，地方名麻鱼，属鲤形目、鳅 科、条鳅亚科、高原鳅属，主要分布在西藏的拉萨河、怒江上游、青海、甘肃和四川西部的长 江、黄河干流及其附属水体，青海柴达木盆地和甘肃河西走廊的自流水体等水系。东方高原 鳅在西藏高原鳅属中，属于个体较大的，体长56. 5-142mm，具有一定的经济价值，且体表具 漂亮花纹，具有较好的观赏性；包括东方高原鳅在内的高原鳅是西藏雅鲁藏布江水域重要 的土著鱼类，在西藏高寒脆弱的生态系统中占据重要地位。
[0003] 近年来随着经济的发展，人们对雅鲁藏布江的开发力度逐渐加大，由于生活污水、 采矿与工业污染、水利工程建设等一系列人类活动的加剧，加之藏族同胞传统的"放生"习 俗，从而加剧了雅鲁藏布江中渔业资源的过度捕捞及外来种入侵问题，导致东方高原鳅等 土著鱼类的种群数量急剧下降。由于高原地区水温很低，东方高原鳅生长缓慢、性成熟晚， 其种群一旦受到破坏，将很难恢复，因而对东方高原鳅的保护显得尤为重要和紧迫。开展东 方高原鳅的人工繁殖工作，以恢复和补充其群体数量，具有重要意义。
[0004] 现有技术中，鲜有对高原鳅人工繁殖技术的报道，仅有陈生熬等对一种叶尔羌高 原鳅的人工繁殖方法（陈生熬，姚娜，宋勇等。一种叶尔羌高原鳅的人工繁殖方法。中国专 利。CN104430085。2014-10-24)、陈修松等对西昌高原鳅人工繁殖（陈修松，陈娇，邓思红 等。西昌高原鳅人工繁殖及苗种培育研究。动物科学，2015,3:287-294)进行了初步报道。 有关东方高原鳅的研究工作，主要集中在分类及资源调查的问题上（何德奎，陈咏霞，陈毅 峰。高原鳅属Triplophysa鱼类的分子系统发育和生物地理学研究。自然科学进展，2006， 16 :1395-1404)，目前还没有对东方高原鳅人工繁殖技术的相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明主要包括东方高原鳅的人工繁殖技术流程，该技术主要解决的技术问题 是，提供一种受精率高、孵化率高的东方高原鳅的人工繁殖技术，为东方高原鳅种群恢复提 供基础支撑。
[0006] 本发明是这样实现的：
[0007] ⑴亲本选择
[0008] 选择色泽正常、肥满度适中、性腺发育良好的东方高原鳅成熟个体作为亲本；优 选体长12cm、体重13g以上，腹部柔软弹性好，生殖孔红肿的雌性个体；优选体长10cm、体 重llg以上，吻部和胸鳍第二性征明显、肉垫厚且有刺突的雄性个体；雌雄比例为2:1 ;用 l〇mg/L高锰酸钾进行10分钟亲本消毒，然后将东方高原鳅亲本雌雄分别暂养在有微流水 的0· 6X0· 6X0· 5m暂养池备用。
[0009] ⑵催产药物及其剂量选择
[0010] 催产药物选择绒毛膜促性腺激素（HCG)，促黄体素释放素类似*A2(LHRH-A2)和马 来地欧酮（D0M)，雌鱼催产剂量为HCG2000 ~2500IU/kg，LHRH-A225 ~30μg/kg，D0M6 ~ 8mg/kg，雄鱼剂量减半。
[0011] ⑶人工催产
[0012] a.使用医用注射器吸入⑵所配置好的注射药物，注射之前将注射器的针头套剪去 部分后再重新套上，使得针头露出0. 5cm左右便于注射；
[0013] b.将雌鱼捞出，拨开胸鳍，采用胸鳍基部一针注射，注射角度与鱼体呈45°角左 右，入针0. 5cm左右，每尾注射0. 2ml，注射完成后立即放入网箱内，减少因操作引起的应激 反应，保持水流0. 2m/s刺激，并控制水温为15-17°C;
[0014] c.雌鱼注射药物6~10h后，再给雄鱼注射，雄鱼剂量减半，每尾注射0. 1ml，注射 完成后立即放入网箱内，减少因操作引起的应激反应，，保持水流0. 2m/s刺激，并控制水温 为15-17Γ(雌雄催产注射间隔时间取决于水温，见表1)。
[0015] ⑷人工授精
[0016] a.雌鱼注射药物42h到60h后，将雌鱼捞出检查，轻轻挤压腹部有卵从泄殖孔中顺 利流出即可挤卵；以干毛巾吸干体表多余水份，将成熟的卵挤入干燥的铁盆中；
[0017] b.获取雄鱼精子，剖杀雄鱼将其精巢取出，放到滤纸上吸干水分，之后放入研钵中 研磨，用0.8% (质量体积比）的生理盐水将研磨好的精巢冲入盛有卵子的铁盆中（生理盐 水的剂量为卵子体积的10~20倍），并轻轻用手迅速搅拌20~30s，获得受精卵。
[0018] (5)人工孵化
[0019] a.铺卵网片的制备：先用铁丝制成一个0.3X0. 4m的矩形铁框，再将80目的网布 固定到铁框上，要求网布紧绷平整，便于铺卵；
[0020] b.然后将(4)受精后的受精卵平铺在制作好的铺卵网片上，铺卵密度为1500-2000 粒/框；将铺好的网片直接悬挂在有进出水口 0. 6X0. 6Xlm的流水池中，且流水池的排水 口用80目的网布封住，水深0. 6m，控制水温为15-19°C，水流0. 2m/s刺激，避免阳光直射， 经过62-80h后，孵化出苗（受精卵孵化时间与水温的关系，见表2)。
[0021] 表1水温与东方高原鳅雌雄催产注射间隔时间的关系
[0022]
[0023] 表2水温与东方高原鳅孵化时间的关系
[0024]
[0025]通过以上技术的实施，东方高原鳅催产率达70~75%，受精率85~90%，孵化率 75 ~80%。
【具体实施方式】
[0026] 以下结合实例具体阐述本发明的技术手段。
[0027] 实施例1
[0028] 实验方法
[0029] 从雅鲁藏布江捕获东方高原鳅亲本，运送到林芝的西藏农牧学院水产基地，用 10mg/L高锰酸钾消毒10分钟。
[0030] 挑选雌性个体较大，腹部柔软弹性好，生殖孔红肿，体长12cm、体重13g以上的个 体20尾；挑选雄性个体较大，吻部和胸鳍第二性征明显、肉垫厚且有刺突，，体长10cm、体重 llg以上的个体10尾，分别暂养在0.6X0. 5X0. 6m的网箱内。
[0031 ] 选择绒毛膜促性腺激素（HCG)，促黄体素释放素类似物A2 (LHRH-A2)和马来地欧酮 (D0M)，雌鱼催产剂量为HCG2000IU/kg，LHRH-A225μg/kg，DOM6mg/kg，雄鱼剂量减半。
[0032] 开始人工催产，注射之前将注射器的针头套剪去部分后再重新套上，使得针头露 出0. 5cm左右便于注射。
[0033] 将雌鱼捞出，拨开胸鳍，采用胸鳍基部一针注射，注射角度与鱼体呈45°角左右， 入针0.5cm左右，每尾注射0.2ml，注射完成的亲本立即放入网箱内，减少因操作引起的应 激反应，水流0. 2m/s刺激，并控制水温为15°C。
[0034] 雌鱼注射药物10h后，再给雄鱼注射，每尾注射0. 1ml，将注射完成的亲本立即放 入网箱内，减少因操作引起的应激反应，水流〇. 2m/s刺激，并控制水温为15°C。
[0035] 雌鱼注射药物60h后，将雌鱼捞出检查，轻轻挤压腹部有卵从泄殖孔中顺利流出 即可挤卵；以干毛巾吸干体表多余水份，将成熟的卵挤入干燥的铁盆中。
[0036] 获取雄鱼精子，剖杀雄鱼将其精巢取出，放到滤纸上吸干水分，之后放入研钵中研 磨，用0.8% (质量体积比）的生理盐水将研磨好的精巢冲入盛有卵子的铁盆中（生理盐水 的剂量为卵子