一种山红叶黄八丈的组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物组培育苗技术领域，具体设及一种山红叶黄八丈的组培快繁方 法。
【背景技术】
[0002] 山红叶黄八丈，其拉下名为Acerpalmatum'Ki-hachijo'，其植株健壮，叶子较大， 呈鲜亮的深绿色，秋天叶子颜色非常特别，夺人眼球的金黄色稍带有玫瑰红，随后变为浅澄 色和红色的混合色，可孤植或群植，其植株健壮，生长旺盛。虽然该品种目前没有广泛栽植， 但它将会成为一个很受欢迎的园林景观树种，极具观赏价值与经济价值。目前，山红叶黄八 丈主要通过播种和嫁接繁殖，但出芽率和成活率都不是很高，繁殖系数低，繁殖周期长，场 地要求大，人工成本较高，远不能满足国内对种苗的需求。
[0003] 因此，如何提高其生产效率，缩短培育时间，降低人工成本，保持优良树种的遗传 稳定性，提高其繁殖系数成为目前亟待解决的问题。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本申请提供一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，所用培养基配方简单， 组培流程简便，培养时间短，增殖频率高，幼苗整齐，便于后期统一的移栽和种植管理，降低 了人工成本，能保证所长出的幼苗植株在形状上的一致性，易于操作，可进行产业化生产。
[0005] 为解决W上技术问题，本发明提供的技术方案是一种山红叶黄八丈的组培快繁方 法，包括W下步骤：
[0006] (1)外植体选取及灭菌：切取山红叶黄八丈带芽茎段，采用酒精和升隶灭菌处理 后，得外植体；
[0007] (2)启动培养:将步骤(1)所得外植体接种到启动培养基中培养3-5周，蔽芽生成， 所述启动培养基的组成为:MS基本培养基，补充0.01-0.08mg/LIAA、0.1-0.6mg/LKT、 10-50g/L薦糖、1-8g/L琼脂；
[000引（3)增殖培养:切取步骤(2)所得蔽芽，接种到增殖培养基中培养6-8周，丛生芽生 成，所述增殖培养基的组成为:B5基本培养基，补充0.05-0.25mg/LNAA、0.05-0.25mg/L ΚΤ、0.1-l.Omg/L6-BA、100-800mg/LCH;
[0009] (4)生根培养:将步骤(3)所得丛生芽分离成单芽，接种到生根培养基中培养3-4 周即得山红叶黄八丈无菌苗，所述生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.1-0.5mg/LIBA。
[0010] 优选的，所述外植体选取及灭菌的具体操作为:选取山红叶黄八丈幼嫩枝条，去掉 叶片，切割成长度为2-3cm的带芽茎段，在无菌操作台上，用75%的酒精处理8-15S，再用 0.1 %的升隶处理8-13min，无菌水冲洗4-6次，惊干即可。
[0011] 优选的，所述启动培养基的组成为:MS基本培养基，补充0.015-0.03mg/LIAA、 0.15-0.4mg/LKT、20-40g/L薦糖、2-6g/L琼脂。
[0012] 更为优选的，所述启动培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.02mg/LΙΑΑ、 0.2mg/LKT、30g/L薦糖、5g/L琼脂。
[0013] 优选的，所述增殖培养基的组成为：B5基本培养基，补充0.05-0.15mg/LNAA、 0.05-0.15mg/LΚΤ、0.5-0.9mg/L6-BA、300-600mg/LCH。
[0014] 更为优选的，所述增殖培养基的组成为:B5基本培养基，补充O.lmg/LNAA、0.1mg/ LKT、0.8mg/L6-BA、500mg/LCH。
[001引优选的，所述生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.1-0.3mg/LIBA。
[0016] 更为优选的，所述生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.2mg/LIBA。
[0017] 优选的，所述启动培养基的pH值为6.3-6.7。
[0018] 优选的，所述启动培养、增殖培养、生根培养步骤中，培养溫度为24-28°C，光照强 度为2000-3000LX，光照时间为14-18h/d。
[0019] 本申请所述MS基本培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质 营养，还能加速愈伤组织的生长，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的 数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织 培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
[0020] 所述B5基本培养基具有较高的钟盐和盐酸硫胺素，但含有较低的锭，而锭运一营 养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用；其养分的数量和比例合适，能满足部分植物 细胞的营养和生理需要，部分植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
[0021] 所述1/2B5基本培养基是B5基本培养基大量母液在原有基础上减半，更低的盐浓 度有利于植物根系的生长。
[0022] 所述IAA为吗I噪乙酸，是一种植物生长激素，能够调节植物的生长，不仅能促进生 长，而且具有抑制生长和器官建成的作用。在细胞水平上，可刺激形成层细胞分裂、刺激枝 的细胞伸长、抑制根细胞生长、促进木质部、初皮部细胞分化、促进插条发根、调节愈伤组织 的形态建成，因此可用作植物组织培养。
[0023] 所述KT为氯化脈，是一种具有细胞分裂素活性的苯脈类植物生长调节剂，其生物 活性较6-节氨基嚷岭高10-100倍。它能够影响植物芽的发育、加速细胞有丝分裂、促进细 胞增大和分化，防止果实和花的脱落，也能作为植物组织培养的细胞分裂素。
[0024] 所述NAA为糞乙酸，是一种植物生长激素，在植物使用杆插法繁殖时使用，也可用 于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌、雄 花比率等，可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
[0025] 所述6-BA为6-节氨基腺嚷岭，是一种植物生长激素，其主要作用是促进芽的形成， 也可W诱导愈伤组织发生，促进细胞分裂，促进非分化组织分化，促进生物体内物质的积 累，促进侧芽发生，防止老化，是植物组织和细胞培养中的细胞分裂素。
[0026] 所述CH为水解乳蛋白，是一种多种氨基酸的混合物，其主要作用是促进胚状体、不 定芽的分化，有利于丛生芽的分化。可增强其他营养物质的吸收利用；亦可利用氨基酸对微 量元素的结合能力，增强微量元素的利用率。可促进植物吸收作用。
[0027] 所述IBA为吗I噪下酸，是一种植物生长激素，主要用于插条生根，可诱导根原体的 形成，促进细胞分化和分裂，有利于新根生成和维管束系统的分化，促进插条不定根的形 成。
[0028] 本申请技术方案提供了一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，包括外植体的选取及 灭菌、启动培养、增殖培养、生根培养的步骤，通过对启动培养基、增殖培养基、生根培养基 的筛选，得到最佳的培养基组分和配比，采用前述植物生长激素配比形成的培养基，配方简 单，培养基成本低，配合各阶段的培养条件，得到的幼苗培养时间短，培养流程简便，提高了 山红叶黄八丈繁殖的效率，繁殖系数较高为2-3,能快速获得遗传性状一致的山红叶黄八 丈无菌苗，利用组织培养技术，进行外植体培养，可不受季节气候变化、自然灾害的影响，可 进行大规模的工业化育苗及深加工。
【具体实施方式】
[0029] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。
[0030] 实施例1
[0031] 本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，包括W下步骤：
[0032] (1)选取山红叶黄八丈幼嫩枝条，去掉叶片，切割成长度为2-3cm的带芽茎段，在 无菌操作台上，用75 %的酒精处理8-15s，再用0.1 %的升隶处理8-13min，无菌水冲洗4- 6次，惊干即可，得外植体；
[0033] (2)启动培养:将步骤（1)所得外植体接种到pH值为6.3-6.7的启动培养基中培养 3-5周，蔽芽生成，所述启动培养基的组成为:MS基本培养基，补充0.02mg/LIAA、0.2mg/L KT、30g/L薦糖、5g/L琼脂；
[0034] (3)增殖培养:切取步骤(2)所得蔽芽，接种到增殖培养基中培养6-8周，丛生芽生 成，所述增殖培养基的组成为:B5基本培养基，补充0.1111旨/1酷4、0.1111旨/110\0.8111旨/16-BA、500mg/LCH;
[0035] (4)生根培养:将步骤(3)所得丛生芽分离成单芽，接种到生根培养基中培养3-4 周即得山红叶黄八丈无菌苗，所述生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.2mg/L IBA。
[0036] 其中，所述启动培养、增殖培养、生根培养步骤中，培养溫度为24-28°C，光照强度 为 2000-3000LX，光照时间为 14-18h/d。
[0037] 本实施例中，启动培养过程中，第一个蔽芽生成的时间为24天，启动培养结束时， 蔽芽伸长l-2cm;增殖培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为47天，增殖培养结束时，丛 生芽株局1一3cm，增殖系数为2-3。
[003引实施例2
[0039] 本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，与实施例1的区别在于：
[0040] 步骤（2)中，启动培养基的组成为:MS基本培养基，补充O.Olmg/LIAA、0.1mg/L KT、10g/L薦糖、Ig/L琼脂；
[0041 ] 步骤（3)中，增殖培养基的组成为：B5基本培养基，补充ο. 05mg/LNAA、0.05mg/L KT、0.1mg/L6-BA、100mg/LCH;
[0042] 步骤(4)中，生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.5mg/LIBA。
[0043] 本实施例中，启动培养过程中，第一个蔽芽生成的时间为31天，启动培养结束时， 蔽芽伸长l-2cm;增殖培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为68天，增殖培养结束时，丛 生芽株局1一3cm，增殖系数为2-3。
[0044] 实施例3
[0045] 本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，与实施例1的区别在于：
[0046] 步骤（2)中，启动培养基的组成为:MS基本培养基，补充0.08mg/LIAA、0.6mg/L KT、50g/L薦糖、8g/L琼脂；
[0047] 步骤（3)中，增殖培养基的组成为：B5基本培养基，补充0.25mg/LNAA、0.25mg/L KT、1.0mg/L6-BA、800mg/LCH;
[004引步骤(4)中，生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充O.lmg/LIBA。
[0049]本实施例中，启动培养过程中，第一个蔽芽生成的时间为40天，启动培养结束时， 蔽芽伸长l-2cm;增殖培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为64天，增殖培养结束时，丛 生芽株局1一3cm，增殖系数为2-3。
[00加]实施例4
[0051]本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，与实施例1的区别在于：
[0052] 步骤（2)中，启动培养基的组成为:MS基本培养基，补充O.Olmg/LIAA、0.1mg/L KT、10g/L薦糖、Ig/L琼脂；
[0053] 步骤（3)中，增殖培养基的组成为：B5基本培养基，补充0.25mg/LNAA、0.25mg/L KT、1.0mg/L6-BA、800mg/LCH;
[0化4] 步骤(4)中，生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充O.lmg/LIBA。
[0055]本实施例中，启动培养过程中，第一个蔽芽生成的时间为31天，启动培养结束时， 蔽芽伸长l-2cm;增殖培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为62天，增殖培养结束时，丛 生芽株局1一3cm，增殖系数为2-3。
[0056] 实施例5
[0057]本实施例所述的一种山