一种提高铁皮石斛茎段繁殖系数的培养基的制作方法
【技术领域】
:
[0001]本发明属于生物领域，具体而言，涉及一种提高铁皮石斛茎段繁殖系数的培养基。【背景技术】:
[0002]铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)，又名黑节草(《中国高等植物图鉴》)，为兰科石斛属多年生附生草本植物。铁皮石斛产安徽西南部、云南东南部、福建西宁、浙江东部、广西西北部和四川。生于海拔高达1600米的山地半阴湿的岩石上。铁皮石斛的药用部分主要是新鲜或干燥的茎，2010版药典中记载:铁皮石斛具有益胃生津，滋阴清热的功效。铁皮石斛的药用成分主要有多糖、生物碱、联苄类物质及菲类物质等，多糖类物质可提高人体免疫力，菲类物质和联苄类物质等具有抑制多种肿瘤细胞的作用，其中多糖是目前公认的最主要的药效成分。
[0003]近年来人为的肆意采掘，加上铁皮石斛自然繁殖速率很低，铁皮石斛野生资源濒临灭绝。目前，人工繁殖铁皮石斛的方法主要有分株、扦插和组培快繁。在组培时，能作为外植体的主要有种子、茎段、叶片及幼根等。其中，种子作为外植体时，所得到愈伤组织和原球茎的分生能力和质量较好，但铁皮石斛的接种率低，不易获得。所以利用茎段作为外植体进行快繁可以作为满足市场需求的一种补充，故找到一种能提高铁皮石斛茎段的繁殖系数和缩短培养周期的培养基，可更好的利用铁皮石斛这一资源。
【发明内容】
:
[0004]本发明的目的是提供一种提高铁皮石斛茎段繁殖系数的培养基，该培养基的组成包括:基础培养基和添加物。
[0005]所述基础培养基的组分及含量为:
[0006]KNO3 75-2950mg/L, NH4NO3 103-1522mg/L,KH2PO4 18-41 Omg/L, MgSO4.7H20 240-750mg/L,CaCl2.2H20 144_462mg/L，KCl 0_68mg/L，KI 0.7-1.7mg/L，H3BO3 0.6_6.4mg/L，MnSO4.4H20 3-26mg/L,ZnSO4.7H20 1.4-8.7mg/L,Na2MoO4.2H20 0-0.3mg/L,CuSO4.5H200-0.35mg/L,CoCl2.6H20 0-0.03mg/L,Na2-EDTA 0-37mg/L,FeSO4.7H20 24_29mg/L，肌醇0-105mg/L，甘氨酸0-2.8mg/L,Vbi 0.2-12.0mg/L，VB6 0.3-1.2mg/L，烟酸0.4-1.4mg/L，6-苄基腺嘌呤1.0-3.0mg/L，萘乙酸0.05-0.5mg/L，蔗糖20_30g/L，琼脂4.0-7.0g/L。
[0007]所述的添加物为土豆汁、香蕉汁和椰子汁的混合物，前二者的总浓度为20-300g/L，椰子汁的加入体积为l_255mL/L，混合物的比例M(土豆):M(香蕉):V(椰子汁)=5-100:2-l50:l-50o
[0008]本发明一种提高铁皮石斛茎段繁殖系数的培养基定为A培养基，其配制为现有配制方法，区别是用所提取的汁液代替蒸馏水进行配制，其中添加物的获取方式如下:
[0009]①土豆汁获取方法:称取所需要克数的土豆，切成绿豆大小，放入锅中，加入配制体积70%左右的水，煮沸30分钟，然后用8层纱布过滤即得。
[0010]②香蕉汁获取方法:称取所需要克数的香蕉，把香蕉压成糊状，放入锅中，加入配制体积70%左右的水，煮沸30分钟，然后用2层纱布过滤即得。
[0011 ]③椰子汁获取方法:直接从椰子中量取所需体积。
[0012]本发明的有益之处:采用此培养基能提高铁皮石斛茎段繁殖系数，并且缩短继代周期，可为缓解铁皮石斛的供需矛盾和保护铁皮石斛野生资源提供一条思路。
【具体实施方式】
[0013]实施例1
[0014]取野生铁皮石斛茎段，用0.1%洗衣粉溶液浸泡5分钟，流水冲I小时，于无菌超净工作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.10%氯化汞中消毒8分钟，无菌水洗6次，用解剖刀将已消毒后的茎段切成每个腋芽一段，接种于MS培养基中，另含6-BA 1.0mg/L，NAA 0.2mg/L，20天后待腋芽伸长，茎段恢复生长后，接种于A培养基中生长，A培养基的组成为:
[0015]KNO3 75mg/L,NH4NO3 103mg/L,KH2PO4 18mg/L,MgS04.7H20 240mg/L，CaCl2.2H20144mg/L，KCl lmg/L，KI 0.7mg/L,H3BO3 0.6mg/L,MnSO4.4H20 3mg/L,ZnSO4.7H20 1.4mg/L,Na2MoO4.2H20 0.lmg/L,CuSO4.5H20 0.15mg/L，CoCl2.6H2O 0.01mg/L，Na2-EDTA 1mg/L,FeSO4.7H20 24mg/L，肌醇 12mg/L，甘氨酸 1.2mg/L，VB1 0.2mg/L，VB6 0.3mg/L，烟酸
0.4mg/L，6-苄基腺嘌呤1.01^/1，萘乙酸0.0511^/1，鹿糖2(^/1，琼脂4.(^/1。所加土豆和香蕉提取混合物总浓度为2(^/1，添加物比例1(土豆):1(香蕉)1(椰子汁)=5:2:1。培养温度25±1°C，每天光照12小时，光照强度1000-30001ux，培养周期为50天。50天后统计铁皮石斛丛生芽情况，增殖系数达到6-9，较未加入添加物的培养基提高了 3-5倍。
[0016]实施例2
[0017]取野生铁皮石斛茎段，用0.1 %洗衣粉溶液浸泡5分钟，流水冲I小时，于无菌超净工作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.10%氯化汞中消毒8分钟，无菌水洗6次，用解剖刀将已消毒后的茎段切成每个腋芽一段，接种于MS培养基中，另含6-BA 1.0mg/L，NAA 0.2mg/L，20天后待腋芽伸长，茎段恢复生长后，接种于A培养基中生长，A培养基的组成为:
[0018]KNO3 80mg/L,NH4NO3 113mg/L，KH2P04 19mg/L,MgS04.7H20 250mg/L，CaCl2.2H20154mg/L，KCl 23mg/L，KI 0.9mg/L,H3BO3 0.76mg/L,MnSO4.4H20 5mg/L,ZnSO4.7H201.6mg/L, Na2MoO4.2H20 0.lmg/L, CuSO4.5H20 0.25mg/L, CoCl2.6H2O 0.01mg/L,Na2-EDTA12mg/L，FeS04.7H2O 25mg/L，肌醇 15mg/L，甘氨酸1.4mg/L，VBi 0.3mg/L，VB6 0.4mg/L，烟酸0.511^/1，6-苄基腺嘌呤1.21^/1，萘乙酸0.151^/1，蔗糖258/1，琼脂4.(^/1。所加土豆和香蕉提取混合物总浓度为5(^/1，添加物比例姒土豆):1(香蕉):￥(椰子汁)=15:42:19。培养温度25±1°C，每天光照12小时，光照强度1000-30001ux，培养周期为50天。50天后统计铁皮石斛丛生芽情况，增殖系数达到6-9，较未加入添加物的培养基提高了 3-5倍。
[0019]实施例3
[0020]取野生铁皮石斛茎段，用0.1 %洗衣粉溶液浸泡5分钟，流水冲I小时，于无菌超净工作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.10%氯化汞中消毒8分钟，无菌水洗6次，用解剖刀将已消毒后的茎段切成每个腋芽一段，接种于MS培养基中，另含6-BA 1.0mg/L，NAA 0.2mg/L，20天后待腋芽伸长，茎段恢复生长后，接种于A培养基中生长，A培养基的组成为:
[0021]KNO3 1000mg/L,NH4NO3 1113mg/L，KH2P04 190mg/L,MgS04.7H20 550mg/L，CaCl2.2H20 254mg/L，KCl 43mg/L，KI 0.9mg/L，H3B03 3.6mg/L,MnS04.4H20 25mg/L,ZnSO4.7H208.6mg/L,Na2MoO4.2H20 0.3mg/L,CuS04.5H20 0.25mg/L，CoCl2.6H2O 0.03mg/L，Na2-EDTA32mg/L，FeS04.7H2O 26mg/L，肌醇95mg/L，甘氨酸2.4mg/L，VBi 10mg/L，VB6 0.9mg/L，烟酸0.711^/1，6-苄基腺嘌呤1.81^/1，萘乙酸0.251^/1，鹿糖258/1，琼脂5.(^/1。所加土豆和香蕉提取混合物总浓度为10(^/1，添加物比例1(土豆):1(香蕉):￥(椰子汁)=25:65:34。培养温度25±1°C，每天光照12小时，光照强度1000-30001ux，培养周期为50天。50天后统计铁皮石斛丛生芽情况，增殖系数达到6-9，较未加入添加物的培养基提高了 3-5倍。
[0022]实施例4
[0023]取野生铁皮石斛茎段，用0.1 %洗衣粉溶液浸泡5分钟，流水冲I小时，于无菌超净工作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.10%氯化汞中消毒8分钟，无菌水洗6次，用解剖刀将已消毒后的茎段切成每个腋芽一段，接种于MS培养基中，另含6-BA 1.0mg/L，NAA 0.2mg/L，20天后待腋芽伸长，茎段恢复生长后，接种于A培养基中生长，A培养基的组成为:
[0024]KNO3 2300mg/L,NH4NO3 1513mg/L，KH2P04 290mg/L,MgSO4.7H20 600mg/L，CaCl2.2H20 354mg/L，KCl 53mg/L，KI I.2mg/L，H3B03 4.6mg/L,MnS04.4H20 20mg/L,ZnSO4.7H207.6mg/L,Na2MoO4.2H20 0.2mg/L,CuSO4.5H20 0.35mg/L,CoCl2.6H2O 0.03mg/L，Na2-EDTA35mg/L，FeSCU.7H2O 28mg/L，肌醇 105mg/L，甘氨酸2.5mg/L，VBi llmg/L，VB6 0.7mg/L，烟酸
0.9mg/L，6-苄基腺嘌呤2.4mg/L，萘乙酸0.35mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6.0g/L。所加土豆和香蕉提取混合物总浓度为200g/L，添加物比例M(土豆):M(香蕉):V(椰子汁)= 78:43: 5。培养温度25±1