一种金焰彩栾的微型嫁接方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及全缘叶栾树的微型嫁接方法，尤其是一种金焰彩栾的微型嫁接方法。
【背景技术】
[0002] 微型嫁接，它是植物组织培养与嫁接技术的结合。微嫁接又称试管嫁接，是在试管 内将砧木与接穗进行嫁接获得新植株的技术，是以组织培养为基础，嫁接植物在人工控制 的环境条件下培养，排除了外界环境因素对嫁接成活的影响。
[0003] 金焰彩楽（Koelreuteria bipinnata var · integrifoliola ' Jinyan'）是在黄山 栾树中选出的生长健康品种，其主要特性是树干或枝条呈黄色，春季新芽、叶呈桔红色，夏 季叶呈黄绿色，秋叶呈金黄色，具有很高的园艺观赏价值，该植物主要目前采用嫁接方法进 行繁殖，受环境影响较大成活率低，操作技术难以掌握，在采用组织培养繁殖该新品种也存 在繁殖困难的问题，即一定代数的继代培养，试管芽苗叶片会产生离层脱落的问题，严重影 响进一步继代繁殖。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是：克服现有技术中的不足，解决金焰彩栾的继代繁殖 问题，加快繁育速度，满足园林绿化市场需求，本发明以金焰彩栾组培芽苗为接穗，黄山栾 树组培芽苗为砧木进行试管嫁接技术研究，提供一种有效的无菌微型嫁接方法，为了保证 嫁接的成功率首先对培养基中的1/2MS进行改良，实验发现通过将砧木培养阶段、接穗培养 阶段以及嫁接后培养阶段的培养基的1/2MS改良后，试管苗生根快、生长速度快而且健壮。
[0005] 为加快繁育速度并且使试管苗生根快、生长速度快而且健壮。本发明采用的技术 方案如下：
[0006] -种金焰彩栾的无菌微型嫁接方法，主要包括以下步骤:砧木培养、砧木选择、接 穗培养、接穗选择、试管嫁接、嫁接后培养;所述的站木培养培养基为改良剂型一1/215+6_ BA 0 · 0 2mg/L+NAA(0 · 01-0 · 05)mg/L++IAA(0 · 03-0 · 08)mg/L+IBA(0 · 02-0 · 06)mg/L+蔗糖 (20-40)g/L，培育时间为15-45天;所述的砧木选择为采用黄山栾树生长健康单株组培芽 苗;所述的接穗培养为，以金焰彩栾播种苗嫩芽接种组培芽苗，培养基为改良剂型二1/2MS+ 6-BA 0·0 2mg/L+NAA(0·01-0·05)mg/L++IAA(0·03-0·08)mg/L+IBA(0·02-0·06)mg/L+蔗糖 (20-40) g/L，培育时间为15-45天，砧木和接穗培养前将材料表面的尘土洗刷干净，剪切成1 ~1.5cm带侧芽的茎段，然后进行表面灭菌;所述接穗选择为金焰彩栾播种苗嫩芽接种组培 的芽苗;方法为劈接;所述的嫁接后培养为:培养基为改良剂型三1/2MS+6-BA 0.0 2mg/L+ ΝΑΑ(0 · 01-0 · 05)mg/L++IAA(0 · 03-0 · 08)mg/L+IBA(0 · 02-0 · 06)mg/L+蔗糖(20-40)g/L，培育 时间为15-45天，光照强度为25001x，温度条件为25~27 °C时，光照12h。
[0007] 砧木培养的培养基改良剂型一 1/2MS成分为硝酸钾800mg/L、硝酸铵800mg/L、磷酸 二氢钾100mg/L、硫酸镁190mg/L、氯化钙285mg/L、碘化钾0 · 83mg/L、硼酸7 · 5mg/L、硫酸锰 22 · 3mg/L、硫酸锌8 · 6mg/L、钼酸钠0 · 25mg/L、硫酸铜0 · 025mg/L、氯化钴0 · 025mg/L、乙二胺 四乙酸二钠47.5mg/L、硫酸亚铁37.95mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素(h2mg/ L、盐酸吡咳醇0 · 8mg/L、烟酸0 · 5mg/L。
[0008] 接穗培养的培养基改良剂型二1/2MS成分为:硝酸钾810mg/L、硝酸铵820mg/L、磷 酸二氢钾l〇3mg/L、硫酸镁180mg/L、氯化|丐295111〖凡、碘化钾0.8mg/L、硼酸8. lmg/L、硫酸猛 20mg/L、硫酸锌9 · 3mg/L、钼酸钠0 · 15mg/L、硫酸铜0 · 03mg/L、氯化钴0 · 028mg/L、乙二胺四乙 酸二钠48 · 5mg/L、硫酸亚铁38 · 25mg/L、肌醇98 · 7mg/L、甘氨酸1 · 89mg/L、盐酸硫胺素 0 · 22mg/L、盐酸吡哆醇0 · 87mg/L、烟酸0 · 46mg/L。
[0009] 嫁接后培养的培养基改良剂型三1/2MS成分为:硝酸钾810mg/L、硝酸铵800mg/L、 磷酸二氢钾l〇2.5mg/L、硫酸镁181.6mg/L、氯化钙293.7mg/L、碘化钾0.82mg/L、硼酸 8 · 22mg/L、硫酸锰 18 · 78mg/L、硫酸锌9 · 3mg/L、钼酸钠0 · 15mg/L、硫酸铜 0 · 028mg/L、氯化钴 0.02811^/1^、乙二胺四乙酸二钠49.511^/1^、硫酸亚铁38.711^/1^、肌醇97.611^/1^、甘氨酸 1 · 99mg/L、盐酸硫胺素0 · 25mg/L、盐酸吡咳醇0 · 85mg/L、烟酸0 · 51mg/L。
[0010] 各个阶段的培养基中的改良1/2MS的成分不同，因为砧木培养、接穗培养以及嫁接 后培养的阶段需要的物质营养成分是不同的，接穗培养基中的改良剂型二1/2MS中的硝酸 钾、硝酸铵的含量较砧木培养基中的含量略高达到硝酸钾810mg/L、硝酸铵820m g//L此浓度 对于促进接穗的芽苗的生长具有优异的效果，但是此浓度用于在砧木培养基中却发现砧木 的组培芽苗的生长速度降低并且砧木芽苗细长，基本不再生长出壮苗，嫁接后培养的培养 基中同样不适用该浓度，该浓度会使有效芽数降低并且有效根减少，但是将硝酸铵的浓度 降低到硝酸铵800mg/L，试管苗生根快、生长速度快而且健壮。
[0011]盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇的含量也是至关重要的，经过实验得到，嫁接后培养的 培养基中将盐酸硫胺素的含量调整到〇. 25mg/L、盐酸吡哆醇含量调整到0.85mg/L试管苗生 根快、生长十分健壮，比盐酸硫胺素0.22mg/L、盐酸吡哆醇0.87mg/L时的含量时生根速度快 1/3〇
[0012] 进一步的，砧木培养阶段，黄山栾树生长健康的单株组培初代培养后萌发的嫩芽 分别带1、2、3、4片叶，砧木培养时间长短试验分别为15到45天。
[0013] 进一步的，接穗培养阶段，4月中旬金焰彩栾播种苗嫩芽接种组培的芽苗培养后萌 发的嫩芽分别带1、2、3片叶，砧木培养时间长短试验分别为15到45天。
[0014]进一步的，砧木和接穗组培前的灭菌方法为先用75%酒精浸泡约10S，无菌水冲洗 2次，再用0.1%HgCl，消毒5~6min，后用无菌水冲洗3次，接种到培养基中进行培养，无菌处 理大大提升了微嫁接的成功率。
[0015] 采用本发明的技术方案的有益效果是:本发明的金焰彩栾的无菌微型嫁接方法， 提高了金焰彩栾的成活率和萌发率。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0017] 实施例！
[0018]砧木培养为采用黄山栾树生长健康单株组培，组培前将材料表面的尘土洗刷干 净，然后剪切成1~1.5cm带侧芽的茎段，进行表面灭菌，灭菌时，先用75 %酒精浸泡约10S， 无菌水冲洗2次，再用0.1 %HgCl，消毒5~6min，后用无菌水冲洗3次，砧木选择为培育时间 为15天，组培后分别选择萌发带1、2、3、4片叶的嫩芽作砧木嫁接，培养基为1 /2MS+6-BA Ο. Ο 2mg/L+NAA 0.05mg/L++IAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L;接穗培养以4月中旬金焰 彩栾播种苗嫩芽接种组培芽苗，培养基为1/2MS+6-BA 0.0 2mg/L+NAA 0.05mg/L++IAA 0.05mg/L+IBA Ο . 02mg/L+蔗糖30g/L，培育时间为15天，组培前将材料表面的尘土洗刷干 净，然后剪切成1~1.5cm带侧芽的茎段，进行表面灭菌，灭菌时，先用75 %酒精浸泡约10S， 无菌水冲洗2次，再用0.1 %HgCl，消毒5~6min，后用无菌水冲洗3次，嫁接方法为劈接;嫁接 后培养为：在 1/2MS+6-BA 0·0 2mg/L+NAA 0.05mg/L++IAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖 30g/L的培养基中在光照强度为2500 lx，温度条件为25 °C时，光照12h。
[0019] 实施例2
[0020] 砧木培养为采用黄山栾树生长健康单株组培，组培前将材料表面的尘土洗刷干 净，然后剪切成1~1.5cm带侧芽的茎段，进行表面灭菌，灭菌时，先用75 %酒精浸泡约10S， 无菌水冲洗2次，再用0.1 %HgCl，消毒5~6min，后用无菌水冲洗3次，砧木选择为培育时间 为15天，组培后分别萌发带1、2、3、4片叶的嫩芽作砧木嫁接，培养基为1/2MS+6-BA 0.0 2mg/L+NAA 0.05mg/L++IAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L;接穗培养以4月中旬金焰 彩栾播种苗嫩芽接种组培芽苗，培养基为改良剂型二1/2MS+6-BA 0.0 2mg/L+NAA 0.05mg/ L++IAA0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L，培育时间为15天，组培前将材料表面的尘土洗 刷干净，然后剪切成1~1.5cm带侧芽的茎段，进行表面灭菌，灭菌时，先用75 %酒精浸泡约 10S，无菌水冲洗2次，再用0.1 %HgCl，消毒5~6min，后用无菌水冲洗3次，嫁接方法为劈接； 嫁接后培养为：在改良剂型三 1/2MS+6-BA0.0 2mg/L+NAA 0.05mg/L++IAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L的培养基中在光照强度为25001x，温度条件为25°C时，光照12h。
[0021] 实施例3
[0022]砧木培养为采用黄山栾树生长健康单株组培，组培前将材料表面的尘土洗刷干 净，然后剪切成1~1.5cm带侧芽的茎段，进行表面灭菌，灭菌时，先用75 %酒精浸泡约10S， 无菌水冲洗2次，再用0.1 %HgCl，消毒5~6min，后用无菌水冲洗3次，砧木选择为培育时间 为15天，组培后选择分别萌发带1、2、3、4片叶的嫩芽作砧木嫁接，培养基为改良剂型一1/ 2MS+6-BA 0·0 2mg/L+NAA 0.05mg/L++IAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L;接穗以4 月中旬金焰彩栾播种苗嫩芽接种组培芽苗，培养基为改良剂型二1/2MS+6-BA 0.0 2mg/L+ NAA 0.05mg/L++IAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L，培育时间为 15天，组培前将材料 表面的尘土洗刷干净，然后剪切成1~1.5cm带侧芽的茎段，进行表面灭菌，灭菌时，先用 75%酒精浸泡约10S，无菌水冲洗2次，再用0.1 %HgCl，消毒5~6min，后用无菌水冲洗3次， 嫁接方法为劈接;嫁接后培养为：在改良剂型三1/2MS+6-BA 0.0 2mg/L+NAA 0.05mg/L++ IAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L的培养基中在光照强度为25001x，温度条件为