一种寒兰人工种子制作方法
【专利摘要】本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子，具体步骤包括：选种、消毒、采种与原球茎诱导、原球茎增殖培养及人工种子的制作，将寒兰种子诱导产生的原球茎作为人工种子的繁殖体，可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。同时采用制作人工种子，可以适用于机械化生产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方便运输和储藏，本发明通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养高品质寒兰提供了技术支持。
【专利说明】
一种寒兰人工种子制作方法
技术领域
[0001] 本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种寒兰人工种子制作方法。
【背景技术】
[0002] 寒兰为兰科兰属地生植物，假鳞茎狭卵球形，包藏于叶基之内。叶带形，薄革质，暗 绿色，前部边缘常有细齿。花常为淡黄绿色而具淡黄色唇瓣，也有其他色泽，常有浓烈香气； 株型修长健美，叶姿优雅俊秀，花色艳丽多变，香味清醇久远，凌霜冒寒吐芳，实为可贵，因 此有"寒兰"之名，为国兰之一，生于林下、溪谷旁或稍荫蔽、湿润、多石之土壤上，海拔400-2400米。分布于中国、日本南部、朝鲜半岛南端。
[0003] 由于寒兰种子非常微小，几乎无胚乳，在自然条件下种子萌发率极低，因此在生产 实践中多采用分株方式或组织培养进行繁殖，但是分株培养繁殖率低，时间长，不能满足市 场需要，组织培养能在一定程度上解决快速繁殖的难题，但是依然存在转接次数多、成本 高、移栽成活率低等问题，特别是不方便运输储藏，所以人工种子繁殖方式应用越来越广 泛，目前，采用人工种子在寒兰繁殖方面还未见报道，并且大多数人工种子采用的繁殖体， 都是通过组织培养诱导假鳞茎、花梗腋芽或茎尖产生原球茎，这种方式往往使繁殖体产生 病毒的同时，使繁殖后的苗株发生突变，不能有效遗传苗株的优秀品质。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种寒兰人工种子制作方法，从而缩短组织培养周期、降 低成本的同时，提高生产效率。
[0005] 为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为:一种寒兰人工种子制作方法，用寒 兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子。
[0006] 如上所述的一种寒兰人工种子制作方法，包括以下步骤：
[0007] (1)选种:采取授粉130~140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；
[0008] (2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3~5min，再用 10 %的次氯酸钠溶液浸泡12~14 m i η，浸泡后用清水冲洗1~2 m i η，再用7 5 %的酒精消毒 lmin，接着用0.2%的升萊消毒3111；[11，然后用无菌水冲洗2~31]1；[11，冲洗后将蒴果放置在无菌 的培养皿中备用；
[0009] (3)采种与原球茎诱导:将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子 移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱 导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：l/2MS+90~ 110mg/L肌醇+0 · 4~0 · 6mg/L烟酸+0.4~0 · 6mg/L VB6+0 · 1 ~0 · 2mg/L VB1+1 ~3mg/L甘氛酸 + 1~2g/L蛋白胨+160~180mg/L磷酸二氢钠+18~22g/L鹿糖+8~10g/L琼脂+90~110g/L香 蕉汁;pH为5.4~5.8，温度为22~25°(：，光照时间为1211/(1，光照强度为1500~20001叉；
[0010] (4)原球茎增殖培养:将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖 培养基为：1/2MS+0 · 8~1 · 5mg/L 6-BA+0 · 1~0 · 3mg/L NAA+8~12 %椰汁，培养条件：培养温 度24~26°C，光照时间为12h/d，光照强度为1500~20001x;增殖培养后的寒兰原球茎用于 制作人工种子的繁殖体；
[0011] (5)人工种子的制作:将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工 种皮包埋后，即得人工种子;所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.5~0.7mg/L NAA+8~12 %椰汁 +0 · 4~0 · 6mg/L BA+20~25g/L蔗糖+20~25g/L苹果酸+0 · 4~0 · 6 %多灵菌+0 · 2 %活性炭+ 15~25mg/L脱落酸;所述人工种皮为:3 %海藻酸钠+2 %壳聚糖+2 % CaCl2。
[0012] 本发明的有益效果是:将寒兰种子诱导产生的原球茎作为人工种子的繁殖体，可 以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。同时采用制作人工 种子，可以适用于机械化生产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方 便运输和储藏，本发明通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规 模化、产业化培养高品质寒兰提供了技术支持。
【具体实施方式】
[0013] 下面对本发明【具体实施方式】做进一步的阐述。
[0014] 本发明提供的一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁 殖体制作人工种子，从而可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优 秀品质。具体步骤如下：
[0015] (1)选种:采取授粉130~140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；由于这时的寒兰蒴 果较成熟，能大大增加种子的诱导成功率，例如采用授粉80天的寒兰蒴果，这时蒴果还不够 成熟，以致使种子的诱导成功率大大下降；
[0016] 表1为授粉后不同时间的种子诱导率 「00171
[0018] 由表1可以看出采取授粉130~140天后的寒兰蒴果，能大大增加种子的诱导成功 率。
[0019] (2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3~5min，再用 10 %的次氯酸钠溶液浸泡12~14 m i η，浸泡后用清水冲洗1~2 m i η，再用7 5 %的酒精消毒 lmin，接着用0.2%的升萊消毒3111；[11，然后用无菌水冲洗2~31]1；[11，冲洗后将蒴果放置在无菌 的培养皿中备用;消毒是在保证蒴果内部种子活性的同时，保证蒴果的灭菌。
[0020] (3)采种与原球茎诱导:将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子 移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱 导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：l/2MS+90~ 110mg/L肌醇+0 · 4~0 · 6mg/L烟酸+0.4~0 · 6mg/L VB6+0 · 1 ~0 · 2mg/L VB1+1 ~3mg/L甘氛酸 + 1~2g/L蛋白胨+160~180mg/L磷酸二氢钠+18~22g/L鹿糖+8~lOg/L琼脂+90~llOg/L香 蕉汁;pH为5.4~5.8，温度为22~25°(：，光照时间为1211/(1，光照强度为1500~200011;通过 本步骤主要是为了使寒兰种子诱导出原球茎；
[0021] 表2为诱导培养基的多种实施例
[0022]
[0023] 通过本诱导培养基，能大大增加种子的诱导率，作为优选，所述诱导培养基为：1/ 2MS+100mg/L肌醇+0 · 5mg/L烟酸+0 · 5mg/L VB6+0 · 15mg/L VBl+2mg/L甘氨酸+2g/L蛋白胨+ 170mg/L磷酸二氢钠+20g/L蔗糖+9g/U京脂+100g//L香蕉汁，即为表2中诱导培养基1的成分 及用量。
[0024] (4)原球茎增殖培养:将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖 培养基为：1/2MS+0 · 8~1 · 5mg/L 6-BA+0 · 1~0 · 3mg/L NAA+8~12 %椰汁，培养条件：培养温 度24~26°C，光照时间为12h/d，光照强度为1500~20001x;增殖培养后的寒兰原球茎用于 制作人工种子的繁殖体;通过本步骤主要是为了使诱导出的原球茎进行增殖，培养出更多 的原球茎，提高生产效率。
[0025] (5)人工种子的制作:将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工 种皮包埋后，即得人工种子;所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.5~0.7mg/L NAA+8~12 %椰汁 +0 · 4~0 · 6mg/L BA+20~25g/L蔗糖+20~25g/L苹果酸+0 · 4~0 · 6 %多灵菌+0 · 2 %活性炭+ 15~25mg/L脱落酸;所述人工种皮为:3 %海藻酸钠+2 %壳聚糖+2 % CaCl2。
[0026] 表3为人工胚乳溶液的多种实施例
[0027]
[0028] 通过本人工胚乳溶液，能增加人工种子的萌芽率和储藏时间，作为优选，所述人工 胚乳溶液为：1/2MS+0.6mg/L NAA+10%椰汁+0·5mg/L BA+23g/L蔗糖+23g/L苹果酸+0·5% 多灵菌+0.2 %活性炭+20mg/L脱落酸，即为表3中人工胚乳溶液1的成分及用量。制作人工种 子的过程为现有技术，这里不做详细阐述。通过采用制作人工种子，可以适用于机械化生 产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方便运输和储藏，本发明通过 生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养高品质寒 兰提供了技术支持。
[0029] 本发明并不限于上述实例，在本发明的权利要求书所限定的范围内，本领域技术 人员不经创造性劳动即可做出的各种变形或修改均受本专利的保护。
【主权项】
1. 一种寒兰人工种子制作方法，其特征在于：用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖 体制作人工种子。2. 根据权利要求1所述的一种寒兰人工种子制作方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 选种:采取授粉130~140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂； (2) 消毒:先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3~5min，再用10%的 次氯酸钠溶液浸泡12~14mi η，浸泡后用清水冲洗1~2m i η，再用7 5 %的酒精消毒lm i η，接着 用0.2 %的升萊消毒3min，然后用无菌水冲洗2~3min，冲洗后将蒴果放置在无菌的培养皿 中备用； (3) 采种与原球茎诱导：将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入 有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱导培 养基上，并使种子均勾地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+90~110mg/L 肌醇+〇 · 4~0 · 6mg/L烟酸+0 · 4~0 · 6mg/LVB6+0 · 1 ~0 · 2mg/L VB1+1 ~3mg/L甘氛酸+1 ~2g/L 蛋白胨+160~180mg/L磷酸二氢钠+18~22g/L鹿糖+8~10g/L琼脂+90~110g/L香蕉汁;pH 为5.4~5.8，温度为22~25°(：，光照时间为1211/(1，光照强度为1500~20001叉； (4) 原球茎增殖培养:将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养 基为：1/2MS+0 · 8~1 · 5mg/L 6-BA+0 · 1~0 · 3mg/L NAA+8~12 %椰汁，培养条件：培养温度24 ~26°C，光照时间为12h/d，光照强度为1500~20001x;增殖培养后的寒兰原球茎用于制作 人工种子的繁殖体； (5) 人工种子的制作：将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工种皮 包埋后，即得人工种子;所述人工胚乳溶液为 ：1/21^+0.5~0.711^/0^\+8~12%椰汁+0.4 ~0 · 6mg/L BA+20~25g/L鹿糖+20~25g/L苹果酸+0 · 4~0 ·6%多灵菌+0 · 2%活性炭+15~ 25mg/L脱落酸;所述人工种皮为:3 %海藻酸钠+2 %壳聚糖+2 % CaCl2。
【文档编号】A01H4/00GK106035091SQ201610547741
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月12日
【发明人】宋林贵, 王维青
【申请人】成都东山兰韵农业有限公司