专利名称：一种绣凹螺琼胶酶的制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种绣凹螺琼胶酶的制备方法及其应用背景技术天然多糖酶降解是制备寡聚糖的一个重要途径。酶降解由于具有特异性，可选择性地酶解切断多糖的特定链，从而制得特定的寡聚糖，并且反应条件温和，降解过程易于控制，在多糖降解中运用日益增多。海洋无脊椎动物是海洋生物中分布广泛，种类较多的一大类动物。有关海洋无脊椎动物消化酶类的研究，大都是定性地分析某一生物器官内酶类的存在，以此来阐明与消化生理的关系；分析养殖动物不同发育阶段体内消化酶类的变化；用于大型经济海藻制备单细胞和原生质体的研究，鱼卵受精专一性研究，核质移植实验和培养新品种等。但是，利用无脊椎动物消化酶类作为多糖降解酶的应用研究较少，特别是有关从软体动物中获得琼胶酶的研究尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种绣凹螺琼胶酶的制备方法及其应用，并将绣凹螺琼胶酶用作琼胶的降解剂，以弥补现有技术的上述不足。
一种绣凹螺琼胶酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤以绣凹螺软体组织为原料，经匀浆，离心取上清液，加硫酸铵离心沉淀，透析，浓缩，用凝胶柱分离纯化，得绣凹螺琼胶酶。
将绣凹螺琼胶酶用作琼胶的降解剂。
本发明的绣凹螺琼胶酶可用于制备琼胶寡糖，该琼胶寡糖单体可用于生产、研究琼胶寡糖的生物活性物质或中间体。
具体实施例方式实施例1.
取绣凹螺软体组织500g，加入100ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液匀浆。该匀浆液于-18℃冰冻24h，然后取出溶化，在4℃下离心，取上清液加入固体硫酸铵至30％饱和度，时而搅拌至8h后离心，取上清液，并加入固体硫酸铵至80％饱和度，生成沉淀，不断搅拌，6h后离心，倾去上清液。向所得沉淀物加入50ml 0.01mol/L Tris-HCl缓冲溶液，使其溶解，离心分离，将上清液移入透析袋中，对0.0lmol/LTris-HCl缓冲溶液透析，透析液经柱层析，冷冻干燥制得绣凹螺琼胶酶。取10g琼胶糖，加入100ml蒸馏水并加热使其溶解，冷至40℃，加入1％(W/V)上述绣凹螺琼胶酶，于36℃水浴中保温36h，水解结束后，将水解液加热煮沸5min，于40℃减压浓缩至50ml，加入4倍体积95％的乙醇，离心分离，上清液经浓缩，冷冻干燥得寡糖混合物。取2g寡糖混合物，加1ml水溶解后注入Superdex30色谱柱，室温下以蒸馏水进行洗脱，将各糖峰洗脱液分别合并，减压浓缩，冷冻干燥，得新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖，其结构式依次分别为
实施例2.
取绣凹螺软体组织1000g，加入250ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液匀浆。该匀浆液于-18℃冰冻24h，然后取出溶化，在4℃下离心，取上清液加入固体硫酸铵至40％饱和度，时而搅拌，8h后离心，取上清液并加入固体硫酸铵至90％饱和度，生成沉淀，不断搅拌6h后离心，倾去上清液。向所得沉淀加入80ml 0.01mol/L Tris-HCl缓冲溶液，使其溶解，离心分离，将上清液移入透析袋中，对0.01mol/L Tris-HCl缓冲溶液透析，透析液经柱层析，冷冻干燥制得绣凹螺琼胶酶。取100g琼胶糖，加入10000ml蒸馏水并加热至99℃摇动使其溶解，冷至40℃，加入1％(W/V)上述绣凹螺琼胶酶，于36℃水浴中保温36h，水解结束后，将水解液加热煮沸5min，于40℃下减压浓缩至200ml，加入4倍体积95％的乙醇，离心分离，将上清液经浓缩，冷冻干燥得寡糖混合物。取10g寡糖混合物，加2ml水溶解后注入Superdex30色谱柱，室温下以蒸馏水进行洗脱，将各糖峰洗脱液分别合并，减压浓缩，冷冻干燥，得新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖。
权利要求
1.一种绣凹螺琼胶酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤以绣凹螺软体组织为原料，经匀浆、离心取上清液、加硫酸铵离心沉淀、透析、浓缩，用凝胶柱分离纯化，冻干，得绣凹螺琼胶酶。
2.将绣凹螺琼胶酶用作琼胶的降解剂。
全文摘要
一种绣凹螺琼胶酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤以绣凹螺软体组织为原料，经匀浆、离心取上清液、加硫酸铵离心沉淀、透析、浓缩，用凝胶柱分离纯化、冻干，得绣凹螺琼胶酶。并将绣凹螺琼胶酶用作琼胶的降解剂。本发明的绣凹螺琼胶酶可用于制备琼胶寡糖，该琼胶寡糖单体可用于生产、研究琼胶寡糖的生物活性物质或中间体。
文档编号C12N9/24GK1513989SQ0313897
公开日2004年7月21日 申请日期2003年8月4日 优先权日2003年8月4日
发明者毛文君, 管华诗 申请人:中国海洋大学