专利名称：朱顶红无菌苗再切割成苗方法
技术领域：
本发明涉及一种朱顶红无菌苗再切割成苗方法，提高朱顶红组培苗的繁殖 与生长速率，属于农业生物技术中的园林植物与观赏园艺领域。
技术背景朱顶红(///ff^o^T^^别名孤挺花、华胄兰、百子莲等，是石蒜科孤挺花 属多年生草本植物，原产秘鲁和巴西一带，是世界各地广泛应用的观赏球根花 卉。我国在1912~1949年期间，南京、上海等地已有朱顶红的盆栽观赏。但高 档朱顶红繁殖困难，我国朱顶红种球一直依赖从荷兰等国进口。目前，通过组 织培养或鳞茎扦插繁殖是国际上朱顶红快速繁殖的主要技术手段。朱顶红的鳞茎、叶片和花葶都能经过诱导能产生幼苗。多年来，学者们一 直在研究最佳的诱导培养基。虽然不同的品种需要不同的配方，但是他们的诱 导方式相似，添加的激素也相似，只是浓度不同而已。诱导培养基为MS+BA(6-苄基氨基腺嘌呤)2 4mg/L+NAA(萘乙酸)0 lmg/L，活性炭(AC) 2g/L，蔗糖 30g/L， Ph5.8，琼脂6 8g/L。生根培养基为不添加激素的MS培养基。现有朱顶红种苗的诱导培养方法周期较长、效率较低，且成本也比较高， 不能满足工厂化、规模化生产的要求。 发明内容本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种朱顶红无菌苗再切割成苗 方法，能快速有效地大量生产优质朱顶红种苗，适合工厂化生产。为实现这样的目的，本发明的技术方案中，利用朱顶红组织培养产生的无菌 苗为外植体，通过重复切割小鳞茎、培养、繁殖，不断获得子代。在诱导成苗 和壮苗培养过程中，调节培养基的pH值、蔗糖浓度，添加植物生长抑制剂以及 提高培养基中磷、钾元素的含量等技术手段，促进小鳞茎的诱导率和壮苗，提 高朱顶红组培苗生长与繁殖速率。同时采用1/2MS培养基代替MS培养基以降低 成本。移苗则采用两步移苗方式来提高幼苗成活率。
本发明的方法具体步骤为1、 无菌苗的获得选择优良品种的朱顶红鳞茎进行组织培养。培养基为 l/2MS + BA2mg/L + NAAlmg/L, pH5.8，糖30g/L， AC 2g/L，琼脂6 8g/L; 培养条件为温度20 3(TC，光照16h光期/8h暗期。 一个月后即能获得无菌 苗。2、 无菌苗的切割当得到的无菌苗鳞茎直径达到3 5rnrn时即可进行切割， 对切割后的无菌苗继续诱导培养。诱导培养基为1/2MS + BA 4mg/L + NAA lmg/L + KH2PO440 120mg/L+TIBA(三碘苯甲酸)0. 5mg/L ， pH 5. 8 7. 0，蔗 糖30 60g/L， AC 2g/L，琼脂6 8g/L。培养条件为温度20 30。C，光照 16h光期/8h暗期。 一般1个月左右能够得到长lcm的无菌幼苗。3、 幼苗壮苗对长lcm的无菌幼苗进行壮苗培养，培养基为1/2MS + BA 4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO460mg/L + TIBA0. 5mg/L， pH5.8 7.0，蔗糖30 60g/L ， AC 2g/L，琼脂6 8g/L。培养条件为温度20 30°C，光照16h光 期/8h暗期。4、 无菌苗的再切割当得到的壮苗培养后的无菌苗小鳞茎直径达到3 5mm 时，即可将其中一部分无菌苗继续切割，再对切割后的无菌苗进行新的诱导培 养和壮苗培养；如此重复不断获得子代。将另一部分不再切割的无菌苗进行移 苗。5、 移苗将经壮苗培养且不再切割的无菌苗移植至蛭石中，保持水分充足，待幼苗叶片长至5 7cm时即可再次移苗到露地。移苗时，环境温度在10度以 上， 一般为10 3(TC，并避免阳光直射。本发明利用朱顶红组织培养产生的无菌苗为外植体，通过重复切割小鳞茎、 培养、繁殖，不断获得子代。这种技术不随小鳞茎切割次数的增加而降低繁殖 能力，因此，每当朱顶红无菌苗小鳞茎长到一定大小后就能继续切割，能够不 受季节限制的不断得到大量优质朱顶红种苗。产生的朱顶红小苗生根率可达到100%,因此不需要进行生根培养。与直接利用带菌的母球进行组织培养相比， 本发明减少了消毒等复杂过程，縮短了诱导成苗的周期，简化了生产的流程。 在诱导成苗和壮苗培养过程中，通过调节培养基的酸碱度、蔗糖浓度，加入磷
酸二氢钾和三碘苯甲酸等手段，促进小鳞茎的诱导率和壮苗。采用1/2MS培养 基代替MS培养基可以有效降低生产成本。幼苗的壮苗过程也是一个很重要的步骤，它能迅速补充幼苗生长需要的营养元素，使之快速成苗并促进小鳞茎长大。 强壮的小鳞茎不仅有利于下一次的切割，也有利于移苗后小苗的成活。朱顶红 生命力比较强，可以直接将无菌苗移植至蛭石中，待幼苗长大后可再次移苗到 露地。用两步移苗的方式进行移苗，可提高幼苗的成活率。本发明能快速有效地大量生产优质朱顶红种苗，是一种新型实用的适合工 厂化生产的方法。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述。以下实施例不 构成对本发明的限定。 实施例l1、 无菌苗的获得选择优良朱顶红品种苹果花(Apple Blossom)鳞茎进 行组织培养，先剥除外层的老鱗片和底部的老根，用清水洗干净后切去顶部2/3 鳞片，将基部的鳞片和基盘8 16分切。分别用肥皂水和清水冲洗后消毒接种。培养基为1/2 MS + BA 2mg/L + NAA lmg/L， pH 5. 8，糖30g/L， AC2g/L， 琼脂6g/L。培养条件为温度25'C，光照16h光期/8h暗期。 一个月后产生 无菌苗。2、 无菌苗的切割当无菌苗鳞茎直径达到3 5mm时，用得到的无菌苗小 鳞茎为材料进行切割，并对切割后的无菌苗继续诱导培养，诱导培养基为1/2MS + BA4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO450mg/L+三碘苯甲酸0.5mg/L ，调节pH值 至6.6，添加蔗糖45g/L， AC 2g/L，琼脂6g/L。培养条件为温度20 30。C， 光照16h光期/8h暗期；得到长lcm的无菌幼苗。3、 幼苗壮苗对长lcm的无菌幼苗进行壮苗培养，培养基为1/2MS + BA 4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO460mg/L + TIBA0.5mg/L， pH 6.2，蔗糖60g/L ， AC2g/L，琼脂8g/L;培养条件为温度20 30。C，光照16h光期/8h暗期。4、 无菌苗的再切割当得到的壮苗培养后的无菌苗小鳞茎直径达到3 5mm 时，将其中一部分无菌苗继续切割，再对切割后的无菌苗进行新的诱导培养和
壮苗培养。如此重复切割、培养、壮苗，可不断获得朱顶红品种苹果花的子代。 需要移苗时，可任意选择经壮苗培养后不再切割的无菌苗进行移苗。5、移苗将一部分经壮苗培养且不再切割的无菌苗移植至蛭石中，每天补充水分，保持水分充足，待幼苗叶片长至5 7cm时，再次将朱顶红小苗从蛭石 中移植到露地。第一次移苗时在夏季，选择在保护地栽培，适当遮荫，避免阳 光直射，使环境温度在3(TC以下。 一周后去除遮荫物，这些朱顶红小苗就能正 常生长。 实施例21、 无菌苗的获得选择优良朱顶红品种维拉(Vera)鳞茎进行组织培养， 培养基为1/2 MS + BA 2mg/L + NAA lmg/L， pH 5. 8，糖30g/L， AC2g/L，琼脂6g/L。培养条件为温度25'C，光照16h光期/8h暗期。 一个月后产生 无菌苗。2、 无菌苗的切割当得到的无菌苗鳞茎直径达到3 5mm时即进行切割， 对切割后的无菌苗继续诱导培养，诱导培养基为1/2MS + BA 4mg/L + NAA lmg/L + KH2PO4 60mg/L+三碘苯甲酸0.5mg/L ， pH6.8，蔗糖40g/L， AC2g/L， 琼脂8g/L;培养条件为温度20 30。C，光照16h光期/8h暗期；得到长lcm 的无菌幼苗；3、 幼苗壮苗对长lcm的无菌幼苗进行壮苗培养，培养基为1/2MS + BA 4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO480mg/L + TIBA0.5mg/L， pH 6.0，蔗糖50g/L ， AC2g/L，琼脂8g/L。培养条件为温度20 3(TC，光照16h光期/8h暗期；4、 无菌苗的再切割当得到的壮苗培养后的无菌苗小鳞茎直径达到3 5mm 时，将其中一部分无菌苗继续切割，再对切割后的无菌苗进行新的诱导培养和 壮苗培养；如此重复切割、培养、壮苗，可不断获得朱顶红品种维拉的子代。 同时，选择一部分经壮苗培养后不再切割的无菌苗进行移苗。5、 移苗将一部分经壮苗培养且不再切割的无菌苗移植至蛭石中，每天补充水分，保持水分充足。待幼苗叶片长至5 7cm时再次移苗到露地。第一次移 苗时在冬季，选择在保护地栽培，环境温度保持在l(TC以上。 一周后这些朱顶 红小苗就能正常生长。
权利要求
1、一种朱顶红无菌苗再切割成苗方法，其特征在于包括如下步骤1)无菌苗的获得选择朱顶红鳞茎进行组织培养，培养基为1/2 MS+BA2mg/L+NAA1mg/L，pH5.8，糖30g/L，AC2g/L，琼脂6～8g/L；培养条件为温度20～30℃，光照16h光期/8h暗期；一个月后即获得无菌苗；2)无菌苗的切割当得到的无菌苗鳞茎直径达到3～5mm时即进行切割，对切割后的无菌苗继续诱导培养，诱导培养基为1/2MS+BA 4mg/L+NAA1mg/L+KH2PO4 40～120mg/L+三碘苯甲酸0.5mg/L，pH5.8～7.0，蔗糖30～60g/L，AC 2g/L，琼脂6～8g/L；培养条件为温度20～30℃，光照16h光期/8h暗期；得到长1cm的无菌幼苗；3)幼苗壮苗对长1cm的无菌幼苗进行壮苗培养，培养基为1/2MS+BA 4mg/L+NAA 1mg/L+KH2PO4 60mg/L+TIBA 0.5mg/L，pH5.8～7.0，蔗糖30～60g/L，AC 2g/L，琼脂6～8g/L；培养条件为温度20～30℃，光照16h光期/8h暗期；4)无菌苗的再切割当得到的壮苗培养后的无菌苗小鳞茎直径达到3～5mm时，将其中一部分无菌苗继续切割，再对切割后的无菌苗进行新的诱导培养和壮苗培养；如此重复不断获得子代；将另一部分不再切割的无菌苗进行移苗；5)移苗将经壮苗培养且不再切割的无菌苗移植至蛭石中，保持水分充足，待幼苗叶片长至5～7cm时再次移苗到露地；移苗时，环境温度在10～30℃，并避免阳光直射。
全文摘要
本发明涉及一种朱顶红无菌苗再切割成苗方法，属于园林植物与观赏园艺领域。利用朱顶红组织培养产生的无菌苗为外植体，通过重复切割小鳞茎、培养、繁殖，不断获得子代。在诱导成苗和壮苗培养过程中，调节培养基的pH值、蔗糖浓度，添加植物生长抑制剂以及提高培养基中磷、钾元素的含量等技术手段，促进小鳞茎的诱导率和壮苗，提高朱顶红组培苗生长与繁殖速率。同时采用1/2MS培养基代替MS培养基以降低成本。移苗则采用两步移苗方式来提高幼苗成活率。
文档编号C12N5/04GK101129131SQ20071004648
公开日2008年2月27日 申请日期2007年9月27日 优先权日2007年9月27日
发明者史益敏, 露 叶, 邵素娟 申请人:上海交通大学