专利名称：鱿鱼墨天然黑色素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种鱿鱼墨天然黑色素的制备方法。
背景技术：
鱿鱼墨占鱿鱼体重的I. 3%左右，其主要成分是真黑素与蛋白质结合的黑素蛋白、酪氨酸的聚合物、水和脂肪等。虽然近几年国内对鱿鱼加工副产物，如鱿鱼卵、肝脏、精巢组织等提取物的生物活性进行了相关研究，但是有关鱿鱼墨的综合利用程度还远远滞后于鱿鱼加工现状。我国中医素有“逢黑必补”的养生理念，但长久以来我国对鱿鱼墨的利用价值未受重视。在国外，美国和日本已把鱿鱼墨黑色素作为一种天然黑色素应用于食品生产中。目前天然黑色素纯品国际市场售价高达30万元/吨，因此，鱿鱼墨黑色素作为食品添加剂生产黑色营养保健食品市场空间巨大。此外，研究证实鱿鱼墨天然黑色素具有抗氧化、 提高免疫力、体外抑制流感病毒及艾滋病病毒的功效。所以，鱿鱼墨天然黑色素在新药开发方面前景广阔。鱿鱼墨黑色素不溶于常见的有机溶剂，具有在碱性溶液中溶解而在酸性溶液中沉淀的特性，通常采用碱溶酸沉法，酸性溶液可以除去与黑色素结合的蛋白质、碳水化合物以及脂类物质，但需要经过多次酸碱交替处理，才能得到精制的黑色素。酸碱法提取的黑色素通常会使其天然形态和化学结构受到一定程度的损伤，1979年Giesen提出用温和的蛋白酶水解法来提取黑色素，可以不损伤黑色素原有结构。国内学者阎克路等曾采用木瓜蛋白酶水解牦牛绒黑色素，得到黑色素的形态结构和化学组成改变均小于盐酸水解法。目前也出现了采用酶解法制备鱿鱼墨黑色素，如专利号为CN200610146291. O的中国专利《一种鱿鱼墨黑色素的制备方法及其应用》，其特征在于取鱿鱼墨汁，加入蒸馏水搅拌、洗涤，用粗滤布除去杂物后，用碱液调pH至5. O 10. O ;在搅拌下，加酶水解12 24h，酶解温度为35 70°C，90 100°C加热终止反应；用酸液调pH至I. O 5.0，3000 5000 Xg室温下离心收集沉淀；所得沉淀物经蒸馏水反复洗涤、离心，至洗涤水为中性，真空冷冻干燥。但是它是采用单一的蛋白酶来进行水解，制备时间长，生产效率低且比较麻烦。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种鱿鱼墨天然黑色素的制备方法，采用复合酶解法进行制备，具有工艺简单、酶解时间短、水解率高的特点。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为一种鱿鱼墨天然黑色素的制备方法，其特征在于包括以下步骤I)加热预处理将鱿鱼墨捣碎后，加入一定量水，使料液质量比为I : 9 11，在95 100°C加热3 8min，然后快速冷却至室温；2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶进行复合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值为
5 6，酸性蛋白酶的酶解pH值为I. 5 2. 5，酶解温度为50 60°C，总酶解反应时间为
3 5h，总加酶量为鱿鱼墨质量的I. 5 4. 0% ;
3)灭酶离心处理将鱿鱼墨水解液在95 100°C下加热3 8min，然后快速冷却至室温，经6000 8000r/min下离心处理,取黑色素沉淀留用；4)最后将得到的黑色素沉淀反复用水清洗，除去可溶性成分，然后30 40°C烘干即可。作为改进，所述步骤2)中的中性蛋白酶、酸性蛋白酶的加入量之比为2. 5 3.5 1，所述中性蛋白酶和酸性蛋白酶的酶解时间相等。作为优选，所述中性蛋白酶的酶解pH值为5. 5，酸性蛋白酶的酶解pH值为2. 0，酶解温度为55°C，总酶解反应时间为4h，总加酶量为鱿鱼墨质量的3. 0%。最后，所述步骤I)中的料液质量比优选为I . 10。与现有技术相比，本发明的优点在于本发明以鱿鱼墨为原料，采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶复合酶解法来制备鱿鱼墨黑色素，使得酶解时间从原来的12 24h降低至只需4h就能完成，大大缩短了制备时间，提高了生产效率，并且鱿鱼墨的水解度大，制得的鱿鱼墨黑色素纯度高，可用于保健食品及医药制剂中。本发明原料丰富易得、制备工艺简单、生产效率高，适于工业化生产。
图I是本发明的鱿鱼墨黑色素制备方法的制备工艺流程图；图2是本发明的复合酶解时间对鱿鱼墨水解度的影响；图3是本发明的复合酶解加入总酶量对鱿鱼墨水解度的影响。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。一种鱿鱼墨天然黑色素的制备方法，步骤为I)加热预处理将鱿鱼墨捣碎后，加入一定量水，使料液质量比为I : 10，在95 100°C加热5min，然后快速冷却；2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶进行复合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值为5. 5，酸性蛋白酶的酶解pH值为2. 0，酶解温度为55°C，总酶解反应时间4h(中性蛋白酶和酸性蛋白酶各自水解2h)，总加酶量为鱿鱼墨质量的3. O %，其中中性蛋白酶和酸性蛋白酶按照3 I比例加入相应酶量；3)灭酶离心处理将鱿鱼墨水解液在95 100°C下加热5min，然后快速冷却至室温，经7000r/min下离心处理，取黑色素沉淀留用；4)最后将得到的黑色素沉淀反复用水清洗，除去可溶性成分，然后30 40°C烘干即可。下面对本发明的制备工艺参数及制得的鱿鱼墨黑色素理化性能作进一步详细说明一、蛋白酶的选择选用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶，分别在各酶最适pH值和最适温度范围下水解鱿鱼墨，比较水解度大小,确定实验用酶。水解度越大,表示与鱿鱼墨结合在一起的蛋白质残留量越低，黑色素的纯度也就越高，具体结果见表I。
表I蛋白酶水解鱿鱼墨的水解效果比较
权利要求
1.一种鱿鱼墨天然黑色素的制备方法，其特征在于包括以下步骤； 1)加热预处理将鱿鱼墨捣碎后，加入一定量水，使料液质量比为I: 9 11，在95 100°C加热3 8min，然后快速冷却至室温； 2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶进行复合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值为5 6，酸性蛋白酶的酶解pH值为I. 5 2. 5，酶解温度为50 60°C，总酶解反应时间为3 5h,总加酶量为鱿鱼墨质量的I. 5 4% ; 3)灭酶离心处理将鱿鱼墨水解液在95 100°C下加热3 8min，然后快速冷却至室温，经6000 8000r/min下离心处理，取黑色素沉淀留用； 4)最后将得到的黑色素沉淀反复用水清洗，除去可溶性成分，然后30 40°C烘干即可。
2.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的中性蛋白酶、酸性蛋白酶的加入量之比为2. 5 3. 5 1，所述中性蛋白酶和酸性蛋白酶的酶解时间相等。
3.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述中性蛋白酶的酶解PH值为5.5，酸性蛋白酶的酶解pH值为2. O,酶解温度为55°C，总酶解反应时间为4h，总加酶量为鱿鱼墨质量的3.0%。
4.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述步骤I)中的料液质量比为I 10。
全文摘要
本发明涉及一种鱿鱼墨天然黑色素的制备方法，其特征在于步骤为1)加热预处理；2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶进行复合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值为5～6，酸性蛋白酶的酶解pH值为1.5～2.5，酶解温度为50～60℃，总酶解反应时间为3～5h，总加酶量为鱿鱼墨质量的1.5～4.0％；3)灭酶离心处理，取黑色素沉淀留用；4)最后将得到的黑色素沉淀反复用水清洗，烘干即可。本发明以鱿鱼墨为原料，采用复合酶解法来制备鱿鱼墨黑色素，使得酶解时间从原来的12～24h降低至只需4h就能完成，大大缩短了制备时间，提高了生产效率，并且鱿鱼墨的水解度较高，制得的鱿鱼墨黑色素纯度高，可用于保健食品及医药制剂中。本发明原料丰富易得、制备工艺简单、生产效率高，适于工业化生产。
文档编号C12P1/00GK102776238SQ201110120820
公开日2012年11月14日 申请日期2011年5月9日 优先权日2011年5月9日
发明者宋茹, 李厚宝, 韦荣编 申请人:浙江海洋学院