用于评估杂合性丢失的方法与材料的制作方法

用于评估杂合性丢失的方法与材料的制作方法
【专利摘要】本文件提供了用于评估样品(如：癌细胞)中是否存在杂合性丢失(LOH)标记的方法和材料。例如，提供了测定一个细胞(如：癌细胞)中是否存在LOH标记的方法和材料。还提供了鉴定有同源重组修复(HRD)缺陷的细胞(如：癌细胞)的材料和方法以及鉴定可能响应特殊癌症治疗方案的癌症患者的材料和方法。
【专利说明】用于评估杂合性丢失的方法与材料
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请请求在2011年12月21日提交的序列号为61/578, 713的美国临时专利申 请和2012年6月1日提交的序列号为61/654,402的美国临时申请之优先权，其内容在此 通过引用的方式全文并入本文。
[0003] 背景
[0004] 1.【技术领域】
[0005] 本文件相关于涉及评估样品（如：癌细胞）中是否存在杂合性丢失（L0H)谱的方 法和材料。例如，本文件提供了测定一个细胞（如：癌细胞）中是否包含L0H谱的方法和材 料。本文件还提供了鉴别有同源重组修复（HDR)缺陷的细胞（如：癌细胞）的材料和方法 以及鉴别可能响应特定癌症治疗方案的癌症患者的材料和方法。在本文中，除非明确指出， HDR缺陷和HRD (同源修复缺陷）当作同义词使用。
[0006] 2.背景介绍
[0007] 癌症是一个严重的公共卫生问题，仅在2009年就有562, 340的美国人口死于癌 症。American Cancer Society, Cancer Facts&Figures 2009(在美国癌症协会网站可得 到）。癌症治疗的主要挑战之一就是发现与患者自身癌症相关的临床上有用的特征，并且基 于这些特征给出最适合患者癌症的治疗方案。尽管在个性化医疗这个领域已经有了很大的 进步，但是仍然非常需要更好的分子诊断工具来特征化患者的癌症。
[0008] 概述
[0009] -般说来，本发明的一个方面突出了评估癌细胞或其基因组DNA中L0H的方法。在 一些实施例中，该方法包括，或大体由下列步骤组成，（a)在癌细胞或其来源的基因组DNA 中检测癌细胞中至少一对人类染色体上的L0H区域（如：除了人类X/Y性染色体对的任何 一对人类染色体）；和（b)测定所述L0H区域的数目和大小（如：长度）。在一些实施例中， L0H区域在若干代表整个基因组的染色体对中被分析（如：足够的染色体被分析，这样L0H 区域的数目和大小有望可以代表整个基因组的L0H区域的数目和大小）。在一些实施例中， 该方法进一步包括测定长于约1. 5、5、12、13、14、15、16、17 (优选14、14、16或更多，更优选 15或者更多）百万碱基但是短于L0H区域所在相应染色体整体长度的L0H区域（指示L0H 区域）的总数。二者择一地或另外地，这些指示L0H区域的总的叠加长度被测定。在一些 具体的实施例中，如果指示L0H区域的总数或指示L0H区域的总的叠加长度等于或大于预 定的参考数值，那么所述癌细胞或其基因组DNA或具有所述癌细胞或基因组DNA的患者被 鉴定具有HDR缺陷型L0H谱。
[0010] 还提供了一种评估癌细胞或其基因组DNA中L0H的另一方法，其包括，或大体由下 列步骤组成，（a)在癌细胞或来源于其的基因组DNA中检测癌细胞的至少一对人类染色体 上的L0H区域，其中所述"至少一对人类染色体"不是人类X/Y性染色体对；并且（b)在所述 人类染色体中测定长于第一长度的L0H区域的总数和/或总的叠加长度，其中第一长度为 约1.5或更多的（或5、10、13、14、15、16或更多，优选地15或更多）百万碱基，而所述L0H 区域短于包含该L0H区域的相应的整条染色体长度。在一些实施例中，如果那个总数或叠 加长度等于或大于预设的参考数，那么所述癌细胞或基因组DNA或具有所述癌细胞或基因 组DNA的患者被鉴定具有HDR缺陷型LOH标记。
[0011] 另一方面，本发明提供了预测癌细胞中BRCA1和BRCA2基因状态的方法。该方法包 括，或大体由下列步骤组成，在癌细胞中测定癌细胞的至少一对人类染色体上的L0H区域， 此L0H区域的长度长于第一长度的L0H区域的总数和/或总的叠加长度，所述L0H区域短 于包含该L0H区域的相应的整条染色体长度，其中所述"至少一对人类染色体"不是人类X/ Y性染色体对，其中所述第一长度为约1.5或更多的（或5、10或更多，优选约15或更多） 百万碱基；并且大于参考数的总数或叠加长度与BRCA1或BRCA2基因缺陷的可能性的增加 相关联。
[0012] 另一方面，本发明提供了预测癌细胞中HDR状态的方法。该方法包括，或大体由下 列步骤组成，在癌细胞中测定癌细胞的至少一对人类染色体上长于第一长度的L0H区域的 总数和/或总的叠加长度，所述L0H区域短于包含该L0H区域的相应的整条染色体长度，其 中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中所述第一长度约为1. 5或更多 的（或5、10或更多，优选约15或更多）百万碱基；并且使大于参考数的总数或叠加长度与 HDR缺陷的增加的可能性相关联。
[0013] 另一方面，本发明提供了预测癌症患者响应包含DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶 I抑制剂、放射治疗和/或PARP抑制剂的癌症治疗方案的方法。该方法包括，或大体由下 列步骤组成，在取自癌症患者的癌细胞中测定癌症患者的癌细胞中至少一对人类染色体上 的长于第一长度的L0H区域的总数和/或总的叠加长度，其中第一长度为约1. 5或更多的 (或5、10或更多，优选约15或更多）百万碱基，而所述L0H区域短于包含该L0H区域的相 应的整条染色体长度，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对；并且将大 于参考数的总数或叠加长度与患者响应癌症治疗方案的的增加的可能性相关联。在一些实 施例中，患者是未经治疗的患者。
[0014] 另一方面，本发明涉及预测癌症患者响应治疗方案的方法。该方法包括，或大体由 下列步骤组成，在取自癌症患者的癌细胞中测定癌症患者的癌细胞中的至少一对人类染色 体上长于第一长度的L0H区域的总数和/或总的叠加长度，其中第一长度为约1. 5或更多 的（或5、10或更多，优选约15或更多）百万碱基，而所述L0H区域短于包含该L0H区域的 相应的整条染色体长度，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对；并且将 大于参考数的总数或叠加长度与患者将不响应包括紫杉醇或多烯紫杉醇的癌症治疗方案 的升高的可能性相关联。
[0015] 另一方面，本发明有关于治疗癌症的方法。该方法包括，或大体由下列步骤组成， (a)在源自癌症患者的癌细胞或从其获得的基因组DNA中测定癌细胞的至少一对人类染色 体上长于第一长度的L0H区域的总数和/或总的叠加长度，其中第一长度为约1. 5或更多 的（或5、10或更多，优选约15或更多）百万碱基，而所述L0H区域短于包含该L0H区域的 相应的整条染色体长度，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对；并且（b) 如果该L0H区域的总数或叠加长度大于参考数，那么向癌症患者提供包含DNA损伤剂、蒽环 类药物、拓扑异构酶I抑制剂和PARP抑制剂的癌症治疗方案。在一些实施例中，该患者为 未经治疗的患者。
[0016] 在前面六段所描述的任何一个或多个方法的一些实施例中，下列中的任何一个或 多个可以视情况而定被应用。LOH区域可在至少二、五、十、或十二对人类染色体中被测定。 癌细胞可以是卵巢、乳腺或食管癌细胞。第一长度可以是约6、12或约15或更多百万碱基 (即600万、1千2百万、1千5百万或更多碱基）。该参考数可以是6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18或20或更大。所述至少一对人类染色体队可以排除17号人类染色体。 该DNA损伤剂可以是顺钼、卡钼、奥沙利钼或吡钼，该蒽环类药物可以是表阿霉素或多柔比 星，该拓扑异构酶I抑制剂可以是喜树碱、拓扑替康、或伊立替康，或该PARP抑制剂可以是 iniparib> olaparib,或 velapirib.
[0017] 另一方面，本发明突出了利用一种或多种选自DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I 抑制剂和PARP抑制剂的化合物用于制备治疗确定为带有总数为5、8、9、10、12、15、17、20或 更多的指示L0H区域的癌细胞的患者的癌症的药物制剂。该指示L0H区域可以在至少2、5、 10或21对人类染色体中被测定。该癌细胞可以是卵巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。该指示L0H 区域的长度为约6、12、或15或更多的百万碱基（即600万、1千2百万、或1千5百万或更 多碱基。该指示L0H区域可以存在于除17号人类染色体以外的染色体上。该DNA损伤剂 可以是钼类化疗药物，该蒽醌类可以是表阿霉素或阿霉素，该拓扑异构酶I抑制剂可以是 喜树碱、拓扑替康或伊立替康，或该PARP抑制剂可以是iniparib、olaparib或velapirib。 在一些实施例中，该患者是未经治疗的患者。
[0018] 另一方面，本发明突出了利用能够与人类基因组DNA的多个多态性区域杂交的多 个寡核苷酸来制备用于测定从癌症患者那里得到的人类癌细胞的至少一对染色体上的指 示L0H区域的总数或叠加长度的诊断试剂盒，并且此诊断试剂盒还可以用于测定（a)癌细 胞中BRCA1或BRCA2基因缺陷的可能性的增加，（b)癌细胞中HDR缺陷的可能性的增加，或 (c)癌症患者将会响应包含DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂、放射治疗、或PARP抑 制剂的治疗方案的可能性的增加。该指示L0H区域可以在至少2、5、10或21对人类染色体 中被测定。该癌细胞可以是卵巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。该指示L0H区域可具有约6、12 或15或更多百万碱基的长度。该指示L0H区域可以存在于除17号人类染色体以外的染色 体上。
[0019] 另一方面，本发明突出了一种测定癌症患者癌细胞的L0H状态的系统。该系统包 括，或大体由下列组成，（a)被配置成可以产生关于癌细胞至少一对人类染色体的基因组 DNA的多个信号的样品分析仪，以及（b)已编程为根据所述多个信号可以计算所述至少一 对人类染色体上的指示L0H区域数目的计算机子系统。计算机子系统经程序控制可将指 示L0H区域的数目或叠加长度与参考值作比较来确定（a)癌细胞中BRCA1和/或BRCA2基 因缺陷的可能性，（b)癌细胞中HDR缺陷的可能性，或（c)癌症患者将会响应包含DNA损伤 齐U、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂、放射治疗、或PARP抑制剂的治疗方案的可能性。该系统 可包括一个被配置用来显示（a)、（b)、或（c)可能性的输出模块。该系统可包括一个被配 置用来显示使用癌症治疗方案建议的输出模块。该指示L0H区域可以在至少2、5、10或21 对人类染色体中被测定。该癌细胞可以是卵巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。该指示L0H区域 可具有约6、12、或15或更多百万碱基的长度。该指示L0H区域可以存在于除17号人类染 色体以外的染色体上。该DNA损伤剂可以是钼-基化疗药物，该蒽醌类可以是表阿霉素或 阿霉素，该拓扑异构酶I抑制剂可以是喜树碱、拓扑替康或伊立替康，或该PARP抑制剂可以 是 iniparib> olaparib 或 velapirib。
[0020] 另一方面，本发明提供了一种体现在计算机可读介质中的计算机程序产品，当在 计算机上执行时，提供了沿着除了人类X和Y性染色体的一条或多条染色体检测任何L0H 区域的存在或缺乏的指令，并且该L0H区域具有约1. 5或更多（5、10或更多，优选15或更 多）百万碱基但是短于包含该L0H区域的整条染色体长度的长度；并且测定在一对或多对 染色体中的符合上述条件的L0H区域总数或叠加长度。该电脑程序产品可以包括其它的指 令。该指示L0H区域可以在至少2、5、10或21对人类染色体上被测定。该癌细胞可以是卵 巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。该指示L0H区域可具有约6、12、或15或更多的百万碱基的长 度。该指示L0H区域可以存在于除17号人类染色体以外的染色体上。该DNA损伤剂可以 是基于钼的化疗药物，该蒽醌类可以是表阿霉素或阿霉素，该拓扑异构酶I抑制剂可以是 喜树碱、拓扑替康或伊立替康，或该PARP抑制剂可以是iniparib、olaparib或velapirib。
[0021] 另一方面，本发明提供了一种诊断试剂盒。该试剂盒包括，或大体由下列组成，能 够与人类基因组DNA的多个多态性区域杂交的至少500个寡核苷酸；以及本文所提供的计 算机程序产品。该计算机程序产品可体现在计算机可读介质中，当在计算机上执行时，提供 了在除人类X和Y性染色体以外的一条或多条人类染色体中检测任何L0H区域的存在或缺 乏的指令，并且该L0H区域长度为约1. 5或更多（5、10或更多，优选地15或更多）百万碱 基但是短于包含所述L0H区域的整条染色体长度；以及测定该L0H区域在一对或多对染色 体对中的总数或叠加长度的指令。
[0022] 另一方面，本文件突出了评估患者癌细胞中是否存在L0H谱的方法。该方法包括， 或大体由下列步骤组成，（a)在癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色体上检测多于参考 数的L0H区域的存在，所述L0H区域长于第一长度并且短于包含所述相应L0H区域的整条 染色体长度，其中所述人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中该第一长度为约1. 5或更 多的百万碱基，并且（b)鉴别患者的癌细胞是否具有所述L0H谱。
[0023] 另一方面，本文件突出了一种评估患者癌细胞是否存在HDR缺陷状态的方法。该 方法包括，或大体由下列步骤组成，（a)在癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色体上检测 多于参考数的下述L0H区域的存在，其中任一所述L0H区域长于第一长度并且短于包含所 述相应L0H区域的整条染色体长度的，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色 体对，其中该第一长度约为1.5或更多的百万碱基，并且（b)鉴定患者为带有HDR缺陷状态 的癌细胞。
[0024] 另一方面，本文件突出了一种评估患者癌细胞中是否存在HDR路径中基因突变的 方法。该方法包括，或大体由下列步骤组成，（a)在癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色 体上检测出有多于参考数的L0H区域，任一所述L0H区域的长度应当大于第一长度并且短 于包含该L0H区域的整条染色体的长度，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染 色体对，其中该第一长度为约1. 5或更多的百万碱基，并且（b)鉴定患者为带有HDR路径中 基因突变的癌细胞。
[0025] 另一方面，本文件突出了测定是否患者有可能响应包括放射治疗、DNA损伤剂、蒽 环类、拓扑异构酶I抑制剂或PARP抑制剂的癌症治疗方案的方法。该方法包括，或大体由 下列步骤组成，（a)在癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色体上检测多于参考数的下述 L0H区域的存在，其中L0H区域应当长于第一长度并且短于包含相应L0H区域的整条染色体 长度，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中该第一长度为约1. 5或 更多的百万碱基，并且（b)鉴别可能响应癌症治疗方案的患者。
[0026] 另一方面，本文件突出了评估患者的方法。该方法包括，或大体由下列步骤组成， (a)测定包括具有L0H谱的癌细胞的患者，其中癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色体 上的有大于参考数的长于第一长度但是短于包含相应L0H区域的整条染色体长度的L0H区 域的存在表明癌细胞具有L0H谱，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对， 其中该第一长度约为1百5万或更多的碱基，并且（b)诊断含有具有L0H谱的癌细胞的患 者。
[0027] 另一方面，本文件突出了评估患者的方法。该方法包括，或大体由下列步骤组成， (a)测定包括具有HDR缺陷状态的癌细胞的患者，其中癌症患者的癌细胞的至少一对人类 染色体上的有多于参考数的长于第一长度但是短于包含相应L0H区域的整条染色体长度 的L0H区域的存在表明癌细胞具有HDR缺陷状态，其中所述的至少一对人类染色体不是人 类X/Y性染色体对，其中该第一长度约为1百50万或更多的碱基，并且（b)诊断含有具有 HDR缺陷状态的癌细胞的患者。
[0028] 另一方面，本文件突出了评估患者的方法。该方法包括，或大体由下列步骤组成， (a) 测定带有HDR路径基因的基因突变的癌细胞的患者，其中癌症患者的癌细胞的至少一 对的人类染色体总起来有多于参考数的长于第一长度但是短于包含相应L0H区域的整条 染色体长度的L0H区域的存在表明癌细胞具有基因突变，其中所述的"至少一对人类染色 体"不是人类X/Y性染色体对，其中该第一长度约1.5或更多的百万碱基，并且（b)诊断含 有具有基因突变的癌细胞的患者。
[0029] 另一方面，本文件突出了评估患者是否响应包含放射治疗或选自包含DNA损伤 齐U、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂和PARP抑制剂药物的癌症治疗方案的方法。该方法包括， 或大体由下列步骤组成，（a)测定包括具有L0H标记的癌细胞的至少一对人类染色体上的 多于参考数的长于第一长度的L0H区域，而所述L0H区域短于包含该L0H区域的相应的整 条染色体长度，其中第一长度约1.5或更多的百万碱基，其中所述至少一对人类染色体不 是人类X/Y性染色体对，多于参考数的这种L0H区域的存在表明癌细胞具有L0H标记；并且 (b) 至少部分基于L0H标记的存在，诊断有可能响应癌症治疗方案的患者。
[0030] 另一方面，本文件突出了一种执行患者癌细胞诊断分析的方法。该方法包括，或大 体由下列步骤组成，（a)检测癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长 度但是短于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的存在，其中所述至少一对人类染 色体不是人类X/Y性染色体对，其中第一长度约1. 5或更多的百万碱基，并且（b)鉴定包含 具有L0H标记的癌细胞的患者。
[0031] 另一方面，本文件突出了一种执行患者癌细胞诊断分析的方法。该方法包括，或大 体由下列步骤组成，（a)检测癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长 度但是短于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的存在，其中所述至少一对人类染 色体不是人类X/Y性染色体对，其中第一长度约1. 5或更多的百万碱基，并且（b)鉴定包含 具有HDR缺陷状态的癌细胞的患者。
[0032] 另一方面，本文件突出了一种执行患者癌细胞诊断分析的方法。该方法包括，或大 体由下列步骤组成，（a)检测癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长 度但是短于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的存在，其中所述至少一对人类染 色体不是人类X/Y性染色体对，其中第一长度约1. 5或更多的百万碱基，并且（b)鉴定包含 具有来自HDR途径基因的基因突变的的癌细胞的患者。
[0033] 另一方面，本文件突出了一种执行患者癌细胞诊断分析来确定是否该癌症患者有 可能响应包含给予放射治疗或选自包含DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂和PARP 抑制剂组合的药物的癌症治疗方案的方法。该方法包括，或大体由下列步骤组成，（a)检测 癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长度但是短于包含L0H区域的 整条染色体长度的L0H区域的存在，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体 对，其中第一长度约1.5或更多的百万碱基，并且（b)鉴定有可能响应癌症治疗方案的患 者。
[0034] 另一方面，本文件突出了一种诊断包含具有L0H谱的癌细胞的患者的方法。该方 法包括，或大体由下列步骤组成，（a)测定包括具有L0H谱的癌细胞的患者，其中癌症患者 的癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长度但是短于包含L0H区域 的整条染色体长度的L0H区域的存在表明癌细胞具有L0H标记，其中所述至少一对人类染 色体不是人类X/Y性染色体对，其中第一长度约1.5或更多的百万碱基，并且（b)诊断含有 具有L0H标记的癌细胞的患者。
[0035] 另一方面，本文件突出了一种诊断包含具有HDR缺陷状态的癌细胞的患者的方 法。该方法包括，或大体由下列步骤组成，（a)测定包括具有HDR缺陷状态的癌细胞的患 者，其中癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长度但是短 于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的存在表明癌细胞具有HDR缺陷状态，其中 所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中第一长度约1. 5或更多的百万碱 基，并且（b)诊断含有具有HDR缺陷状态的癌细胞的患者。
[0036] 另一方面，本文件突出了一种诊断包含具有HDR途径基因的基因突变的癌细胞的 患者的方法。该方法包括，或大体由下列步骤组成，（a)测定包括具有基因突变的癌细胞的 患者，其中癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长度但是 短于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的存在表明癌细胞具有基因突变，其中所 述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中第一长度约1. 5或更多的百万碱基， 并且（b)诊断含有具有基因突变的癌细胞的患者。
[0037] 另一方面，本文件突出了一种诊断患者是否作为包含放射治疗或选自包含DNA损 伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂和PARP抑制剂药物的癌症治疗方案的候选人的方法。 该方法包括，或大体由下列步骤组成，（a)测定包括具有L0H标记的癌细胞的患者,其中癌 症患者的癌细胞的至少一对人类染色体上的多于参考数的长于第一长度但是短于包含L0H 区域的整条染色体长度的L0H区域的存在表明癌细胞具有L0H标记，其中所述至少一对人 类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中第一长度约1. 5或更多的百万碱基，并且（b)至少 部分基于L0H标记的存在，诊断有可能响应癌症治疗方案的患者。
[0038] 如果没有另行规定，文中所用的所有的技术和科学术语与本专利相关领域的普通 技术人员的通常理解有着相同的含义。尽管与这里提到的那些类似或相同的方法或材料可 用于实践本发明，合适的材料和方法如下所述。在这里提到的所有的出版物、专利申请、专 利、以及其他的参考文献通过索引的方式全部并入。在冲突的情况下，以本说明书包括定义 为准。此外，这些材料、方法和实例只是说明性的，而不是意在限制本发明。
[0039] 本发明的一个或多个实施例的细节在说明书和以下的附图中被陈述。这些材料、 方法和实例只是说明性的，而不是意在限制本发明。本发明的其它特征、目的以及优点在说 明书、附图和权利要求书中是显而易见的。

【专利附图】

【附图说明】
[0040] 图1是利用SNP阵列测定的来自乳腺癌患者的乳腺癌细胞的沿着1号染色体上的 等位基因剂量的图。箭头表示杂合性区域和L0H区域之间的转换。
[0041] 图2是利用高通量测序法测定的来自如图1所示的相同乳腺癌患者的乳腺癌细胞 的沿着1号染色体的等位基因的剂量图。箭头表示杂合性区域和L0H区域之间的转换。
[0042] 图3是评估细胞（如，癌细胞）基因组L0H谱的示例流程的流程图。
[0043] 图4是可被用于实施本文中所描述的技术的计算机设备以及移动计算机设备的 一个示例的图解。
[0044] 图5是在来自62例人类患者的卵巢癌细胞中检测到的L0H区域的长度分布图。调 整后的长度是指被L0H区域覆盖了的染色体臂的比例。
[0045] 图6是具有完整的或缺陷的BRCA1和BRCA2基因的卵巢癌细胞样品的训练集合中 长于15Mb但短于整条染色体的L0H区域的数量图。圆圈的大小与具有这样数目的L0H区 域的样品数量成比例。
[0046] 图7是图6是具有完整的或缺陷的BRCA1和BRCA2基因的卵巢癌细胞样品的训练 集合和验证集合中长于15Mb但短于整条染色体的L0H区域的数量图。圆圈的大小与具有 这样数目的L0H区域的样品数量成比例。
[0047] 图8是具有体细胞BRCA突变、生殖系BRCA突变、低BRCA1表达或完整BRCA(BRCA 正常）的卵巢癌细胞样品中长于15Mb但短于整条染色体的L0H区域的数量图。圆圈的大 小与具有这样数量的L0H区域的样品数量成比例。
[0048] 图9是一张表格展示BRCA缺陷的、HDR缺陷的/BRCA完整的、以及HDR完整的卵 巢癌细胞样品的百分比。
[0049] 图10是所示癌症的肿瘤细胞系中长于15Mb但短于整条染色体的L0H区域的数量 图。圆圈的大小与具有这样数量的L0H区域的样品数量成比例。
[0050] 图11是肺癌样品中长于15Mb但短于整条染色体的L0H区域的数量图。
[0051] 图12是所示癌症或癌细胞系具有HDR缺陷的百分比图。
[0052] 图13包括当暴露于具有所示数量的长于15Mb但短于整条染色体的L0H区域的29 例乳腺癌细胞系后喜树碱（camptothecin)的IC50值（Logl0(IC50)图以及钼化合物（奥 沙利钼、顺钼和卡钼）、或蒽环类（阿霉素和表阿霉素）的平均Logl0(IC50)值图，或者当 暴露于具有所示数量的长于15Mb短于整条染色体的L0H区域的卵巢癌细胞系后紫杉醇的 IC50值（Logl0(IC50))图。虚线将域值数设置在9。
[0053] 图14是图13的标记版本，它将暴露于具有所示数量的长于15Mb短于整条染 色体的L0H区域的29例乳腺癌细胞系后的钼化合物（奥沙利钼、顺钼和卡钼）的平均 Logl0(IC50)值列图。
[0054] 图15是鉴定L0H位点和区域的示例计算过程的流程图。
[0055] 图16展示了 L0H区域长度与以染色体臂长度校正的这些L0H区域的长度的比值。 在这个图上的最大的校正值等于2,与LOH对整条染色体比值相对应。
[0056] 图17展示了肿瘤样品的HRD分值。蓝圈：BRCA1或BRCA2缺陷样品。红圈：BRCA1 和BRCA2完整样品。蓝圈和红圈的合并区域是相同的。每个单独的圈的面积与具有相应数 目的L0H区域的样品数呈比例。
[0057] 图17a.第一组的HRD分值（152例样品中的46例是BRCA1或BRCA2缺陷）。
[0058] 图17b.第二组的HRD分值（53例样品中的19例是BRCA1或BRCA2缺陷）。
[0059] 图17c.第三组的HRD分值（435例样品中的146例是BRCA1或BRCA2缺陷）。
[0060] 图17d.来自所有三组的总合的数据的HRD分值。A行：224例样品有BRCA1、或 BRCA2、或RAD51C基因缺陷；B :84例BRCA1突变体；C :43例BRCA2突变体；D :82例样品有 BRCA1低表达或甲基化；E :13例样品具有RAD51C甲基化。红圈：416例样品具有BRCA1、 BRCA2和RAD51C完整基因。
[0061] 图18a.癌细胞系中HRD分值的比较。红圈：具有完整BRCA1或BRCA2的细胞系。 A :30例完整的非卵巢细胞系；B :22例完整的卵巢细胞系。绿圈：6例具有BRCA1或BRCA2 杂合突变的携带者。紫圈：2例具有BRCA1或BRCA2隔代遗传的杂合突变的携带者。蓝圈 ： 7例具有BRCA1或BRCA2杂合突变或甲基化BRCA1的携带者。绿、红、蓝和紫圈的合并区域 是相同的。每个单独的圈的面积与具有相应数目的L0H区域的样品数呈比例。
[0062] 图18b.手术后生存期的HRD值的Kaplan-Meier图谱在中线处拆分。这些数据是 用具有拷贝数数据和生存资料的TGCA数据集的507例样品生成的。具有高和低HRD分值的 样品的中位生存期分别是 1499(95% CI = (1355-1769))和 1163(95% CI = (1081-1354)) 天。
[0063] 图19显示了第一研究组中L0H分值与用不同L0H区域长度的截止阈值计算的 HR缺陷之间的相关性。相应的logl0(p-值）如Y-轴所示。研究了 L0H区域长度的截止 阈值和HR缺陷与L0H分值相关的显著性之间的关系。该图显示L0H长度截止阈值可以是 ll-21Mb。以15Mb作为截止阈值，约在间隔的中间，可以用在一些优选的实施例中，因为它 被认为对存在于该数据中的统计噪音更敏感。
[0064] 图20显示了三组BRCA1和BRCA2缺陷样品中L0H分值的比较，来自所有三个研究 组群的叠加数据。A行：49例BRCA1生殖系突变携带者；A :25例BRCA1体细胞突变携带者； C :82例BRCA1甲基化或低表达携带者；D :27例BRCA1生殖系突变携带者；E :9例BRCA2体 细胞突变携带者。
[0065] 图21显示了 BRCAUBRCA2和RAD51C缺陷样品的L0H分值的比较关系。蓝圈对应 于BRCA1缺陷样品，红圈对应于BRCA2缺陷样品，绿圈对应于RAD51C缺陷样品。红、蓝和绿 圈下的合并区域是相同的。每个单独的圈的面积与具有相应数目的L0H区域的样品数量呈 比例。
[0066] 图22显示了响应和不响应包含钼疗法的治疗方案的患者的L0H( "HRD"）分值的 比较关系。每个单独的圈的面积与具有相应数目的L0H区域的样品数量呈比例。
[0067] 图23显示了 BRCA1或BRCA2缺陷样品的L0H( "HRD"）分值的比较关系。每个单 独的圈的面积与具有相应数目的L0H区域的样品数量呈比例。有显著污染的一个离群值的 样品被着重显示。
[0068] 图24显示了每个给定L0H( "HRD"）分值的病人组中非响应者的比例。
[0069] 发明详述
[0070] 本文件提供了用于评估样品（如：癌细胞）中是否存在L0H谱的方法和材料。例 如，本文件提供了测定一个细胞（如：癌细胞）中是否包含L0H谱（如，HDR缺陷L0H谱） 的方法和材料。
[0071] -般说来，存在于每条染色体（男性的每条常染色体）相同位点的序列的比对关 系可揭露是否这个在细胞基因组中的特定的位点是纯合的或杂合的。在人类基因组内的多 态性基因位点在一个个体内一般都是杂合的，因为个体通常接收来自生父的一份拷贝和来 自生母的一份拷贝。在某些情况下，在一个个体内的一个多态性基因位点或一连串多态性 基因位点是纯合的是因为从亲生父母继承相同的拷贝。
[0072] 杂合性丢失（L0H)可能起因于很多机制。例如，在某些情况下，一条染色体的一个 区域可以在体细胞中缺失。仍然存在于另一条染色体（男性的其它非性染色体）上的该区 域是一个L0H区域，因为只有该区域的一个拷贝（而不是两个）存在于受影响的细胞的基 因组内。这个L0H区域可是是任何长度（如，从少于约1.5Mb的长度到等于染色体整体长 度）。这种类型的L0H事件导致了拷贝数的减少。在其它情况下，一条染色体（男性的非性 染色体）上的一个区域在体细胞中被来自另一染色体的该区域的一个拷贝所替代，因此消 除了可能存在于被替代区域的任何的杂合性。在这种情况下，仍然存在于每条染色体上的 该区域是一个L0H区域并且可以简称为一个拷贝中性L0H区域。拷贝中性L0H区域可以是 任何长度（如，从少于约1. 5Mb的长度到等于染色体整体长度）。
[0073] 如本文中所述，一个细胞样品（如，癌细胞样品）可以被鉴定为含有"阳性L0H标 记状态"（或者称为"HDR缺陷型L0H标记"），如果该细胞的基因组被评估含有5个或更多 (如，6或更多、7或更多、8或更多、9或更多、10或更多、11或更多、12或更多、13或更多、 14或更多、15或更多、16或更多、17或更多、18或更多、19或更多、或20或更多）L0H区域， 该 L0H 区域（a)长于约 1 百 50 万碱基（如，长于 2、2.5、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、 16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、75 或 100 百万碱基（Mb)，优选地长于 14 或 15 或 16, 更优选地长于约15百万碱基），并且（b)少于包含该L0H区域的整条染色体的长度。在 某些情况下，一个癌细胞样品可以被认为含有阳性L0H标记状态，如果该细胞的基因组被 评估含有9个或更多L0H区域，该L0H区域（a)长于约15Mb并且（b)少于包含该L0H区域 的整条染色体的长度。除非另有说明，术语"指示L0H区域"指的是在除人类X/Y性染色体 对以外的一对染色体上的并且具有杂合性丢失特征的长度约1百50万或更多碱基但是短 于含有该指示L0H区域的整条染色体的长度的L0H区域。包含L0H区域的整条染色体的长 度可以通过检查生殖细胞或非肿瘤体细胞中对应的染色体对的较短的染色体长度测定的。 在一些实施例中，一个指示L0H区域是任何约2、2. 5、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、75或100个百万碱基〇\&)或更多（优选长于14或 15百万碱基，即大于1千4百万或1千5百万碱基）但小于包含该L0H区域的整条染色体 长度的L0H区域。
[0074] 被认定为具有阳性L0H标记（在这里也被称为"HDR缺陷L0H标记"）的细胞（如， 癌细胞）可被归类于具有HDR缺陷可能性的增加和/或具有HDR途径一个或多个基因缺陷 状态可能性的增加。例如，被认定为具有阳性L0H标记的癌细胞可被归类于具有HDR缺陷 状态可能性的增加。在某些情况下，被认定为具有阳性L0H标记的癌细胞可被归类于具有 HDR途径一个或多个基因缺陷状态可能性的增加。在本文中用到的，基因的缺陷状态意思是 基因的序列、结构、表达和/或活性或它的产物与正常相比是有缺陷的。例如其中包括但不 限于，低或无 mRNA或蛋白质表达、有害突变、超甲基化、弱活性（如，酶活性、结合其它生物 分子的活性）等。在本文中用到的，途径（如，HDR途径）的缺陷状态意思是这个途径中的 至少一个基因（如，BRCA1)是有缺陷的。特别有害的突变的例子包括移码突变、终止子突 变、以及导致RNA剪接改变的突变。HDR途径的基因的缺陷状态可以导致癌细胞中同源定向 修复的缺陷或减活。HDR途径基因的例子包括但不限于，表1所列基因。
[0075] 表1.部分HDR途径基因
[0076]

【权利要求】
1. 一种评估癌细胞或其基因组DNA中LOH的方法，其中所述方法包括： (a) 在癌细胞或来源于其的基因组DNA中检测所述癌细胞的至少一对人类染色体上的 L0H区域，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对；并且 (b) 检测所述至少一对人类染色体上的长于第一长度但是短于包含所述L0H区域的整 条染色体长度的L0H区域的总数，其中所述第一长度约1. 5百万或更多百万碱基。
2. -种预测癌细胞中BRCA1和BRCA2基因状态的方法，包括： 在癌细胞中检测所述癌细胞的至少一对人类染色体上的长于第一长度但是短于包含 L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的总数，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y 性染色体对，其中所述第一长度约1百50万或更多碱基；并且 将大于参考数的所述总数与BRCA1或BRCA2基因缺陷的可能性的增加相关联。
3. -种预测癌细胞中HRD状态的方法，包括： 在癌细胞中检测所述癌细胞的至少一对人类染色体上的长于第一长度但是短于包含 L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的总数，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y 性染色体对，其中所述第一长度约1千5百万或更多碱基；并且 将大于参考数的所述总数与HRD缺陷的可能性的增加相关联。
4. 一种预测癌症患者响应包含DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂、放射治疗，和 /或PARP抑制剂的癌症治疗方案的方法，所述方法包括： 在来自所述癌症患者的癌细胞中检测所述癌症患者的癌细胞中至少一对人类染色体 上的长于第一长度但是短于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的数目，其中所述 至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中所述第一长度约1. 5或更多百万碱基； 并且 将大于参考数的所述总数与所述癌症患者将会响应所述癌症治疗方案可能性的增加 相关联。
5. -种预测癌症患者响应治疗方案的方法，包括： 在来自所述癌症患者的癌细胞中检测所述癌症患者癌细胞的至少一对人类染色体上 的长于第一长度但是短于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的总数，其中所述至 少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中所述第一长度约1. 5或更多百万碱基；并 且 将大于参考数的所述总数与所述癌症患者将不会响应包括紫杉醇或多烯紫杉醇的治 疗方案可能性的增加相关联。
6. -种治疗癌症的方法，包括： (a) 在来自癌症患者的癌细胞或从其获得的基因组DNA中检测癌细胞中至少一对人 类染色体上的长于第一长度但是短于包含L0H区域的整条染色体长度的L0H区域的总数， 其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中所述第一长度约1. 5或更多 百万碱基；并且 (b) 如果所述L0H区域的总数大于参考数，给予所述癌症患者包含一种或多种选自由 DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂和PARP抑制剂组成的药物的癌症治疗方案。
7. 用一种或多种选自包含DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂和PARP抑制剂的 组合的药物制备对治疗已被鉴定为确定具有总数为5或更多的指示L0H区域的癌细胞的患 者的癌症有用的药剂。
8. -种测定癌症患者癌细胞的LOH状态的系统，包括： (a) 配置用来产生多个关于所述癌细胞至少一对人类染色体的基因组DNA的信号的样 品分析仪，以及 (b) 基于所述多个信号，用来计算所述至少一对人类染色体上的指示LOH区域数目的 程序化的计算机子系统。
9. 根据权利要求8的系统，其中所述计算机子系统被编程将所述指示LOH区域的数目 与参考值做比较来确定 (a) 所述癌细胞中BRCA1和/或BRCA2基因缺陷的可能性， (b) 所述癌细胞中HRD缺陷的可能性，或 (c) 所述癌症患者将会响应包含DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂、放射治疗、 或PARP抑制剂的治疗方案的可能性。
10. -种体现在计算机可读介质中的计算机程序产品，当在计算机上执行时，执行步骤 包括： 沿着除了人类X和Y性染色体的一条或多条染色体检测任何LOH区域的存在或缺乏， 并且所述LOH区域具有约1. 5或更多百万碱基但是短于包含LOH区域的整条染色体长度的 长度；并且 检测所述一对或多对染色体对中所述LOH区域的总数。
11. 一种诊断试剂盒包括： 能够与人类基因组DNA的多个多态性区域杂交的至少500个寡核苷酸；以及 权利要求10的计算机程序产品。
12. 利用能够与人类基因组DNA的多个多态性区域杂交的多个寡核苷酸制备对检测来 自癌症患者的人类癌细胞的至少一对染色体中对指示LOH区域总数有用的诊断试剂盒，并 用于检测： (a) 所述癌细胞中BRCA1或BRCA2基因缺陷可能性的增加， (b) 所述癌细胞中HRD缺陷可能性的增加，或 (c) 所述癌症患者将会响应包含DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂、放射治疗、 或PARP抑制剂的治疗方案可能性的增加。
13. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述LOH区域在至少2、5、10或21对人类染色 体中被测定。
14. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述癌细胞是卵巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。
15. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述LOH区域的总数是9、15、20或更多。
16. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述第一长度约6、12、或15或更多百万碱基。
17. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述参考值是6、7、8、9、10、11、12、或13或更 大。
18. 权利要求7或12的应用，其中所述指示LOH区域在至少2、5、10或21对人类染色 体中被测定。
19. 权利要求7或12的应用，其中所述癌细胞是卵巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。
20. 权利要求7或12的应用，其中所述指示LOH区域的总数是9、15、20或更多。
21. 权利要求7或12的应用，其中所述指示LOH区域具有约6、12、或15或更多百万碱 基的长度。
22. 权利要求8或9的系统，其中所述指示L0H区域在至少2、5、10或21对人类染色体 中被测定。
23. 权利要求8或9的系统，其中所述癌细胞是卵巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。
24. 权利要求8或9的系统，其中所述指示L0H区域的总数是9、15、20或更多。
25. 权利要求8或9的系统，其中所述指示L0H区域具有约6、12、或15或更多百万碱 基的长度。
26. 权利要求10的计算机程序产品，其中所述指示L0H区域在至少2、5、10或21对人 类染色体中被测定。
27. 权利要求10的计算机程序产品，其中所述癌细胞是卵巢癌、乳腺癌或食管癌细胞。
28. 权利要求10的计算机程序产品，其中所述指示L0H区域的总数是9、15、20或更多。
29. 权利要求10的计算机程序产品，其中所述指示L0H区域具有约6、12、或15或更多 百万碱基的长度。
30. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述至少一对人类染色体不是17号人类染色 体。
31. 权利要求7或12的应用，其中所述指示L0H区域不在17号人类染色体上。
32. 权利要求8或9的系统，其中所述指示L0H区域不在17号人类染色体上。
33. 权利要求10的计算机程序产品，其中所述指示L0H区域不在17号人类染色体上。
34. 权利要求4或6的方法，其中所述DNA损伤剂是顺钼、卡钼、奥沙利钼或吡钼；所述 蒽环类是表阿霉素或阿霉素；所述拓扑异构酶I抑制剂是喜树碱、托普替康或伊立替康；或 所述 PARP 抑制剂是 iniparib、olaparib 或 velapirib。
35. 权利要求12的应用，其中所述DNA损伤剂是钼-基化疗药物，所述蒽环类是表阿霉 素或阿霉素，所述拓扑异构酶I抑制剂是iniparib、olaparib或velapirib。
36. 权利要求9的系统，其中所述DNA损伤剂是钼-基化疗药物，所述蒽环类是表阿霉 素或阿霉素，所述拓扑异构酶I抑制剂是喜树碱、托普替康或伊立替康，或所述PARP抑制剂 是 iniparib> olaparib 或 velapirib。
37. 权利要求10的计算机程序产品，其中所述DNA损伤剂是钼-基化疗药物，所述蒽环 类是表阿霉素或阿霉素，所述拓扑异构酶I抑制剂是喜树碱、托普替康或伊立替康，或所述 PARP 抑制剂是 iniparib、olaparib 或 velapirib。
38. -种方法包括： (a) 在癌细胞或来源于其的基因组DNA中检测癌细胞的代表数量染色体对上的L0H区 域；并且 (b) 检测所述L0H区域的数目和大小。
39. 权利要求38的方法，所述代表数量的人类染色体代表整个基因组。
40. 权利要求38的方法，进一步包含将特定大小的L0H区域的数量增加与HRD缺陷的 可能性的增加相关联。
41. 权利要求40的方法，其中所述特定大小是长于约1. 5百万、2百万、2. 5百万、3 百万、4百万、5百万、6百万、7百万、8百万、9百万、10百万、11百万、12百万、13百万、14 百万、15百万、16百万、17百万、18百万、19百万、20百万、25百万、30百万、35百万、40 百万、45百万、50百万、75百万或100百万碱基并且少于包含LOH区域的整条染色体的长 度。
42. 权利要求40或41的方法，其中所述特定大小的6、7、8、9、10、11、12或13或更多数 目的LOH区域与HRD缺陷可能性的增加相互关联。
43. -种确定患者预后的方法包括： (a) 检测患者是否包括具有LOH标记的癌细胞，其中癌症患者的癌细胞的至少一对人 类染色体上的多于参考数的长于第一长度并且短于包含LOH区域的整条染色体长度的LOH 区域的存在表明癌细胞具有LOH标记，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色 体对，其中第一长度约1.5或更多的百万碱基，并且 (b) (1)至少部分基于LOH标记的存在，鉴别具有相对好的预后的患者，或者 (b) (2)至少部分基于LOH标记的不存在，鉴别具有相对不良预后的患者。
44. 一种包含选自由DNA损伤剂、蒽环类、拓扑异构酶I抑制剂和PRAP抑制剂组成的组 合的药物的组合物用于治疗选自由乳腺癌、卵巢癌、肝癌、食管癌、肺癌、头颈癌、前列腺癌、 结肠癌、直肠癌、结直肠癌和胰腺癌的组合的癌症患者，所述患者的癌细胞具有多于参考数 的在至少一对人类染色体上的LOH区域，所述LOH区域长于第一长度但是短于包含所述LOH 区域的整体染色体长度，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中所 述第一长度约1百50万或更多百万碱基。
45. 权利要求44的组合物，其中所述LOH区域在至少2、5、10或21对人类染色体中被 测定。
46. 权利要求44的组合物，其中所述LOH区域的总数是9、15、20或更多。
47. 权利要求44的组合物，其中所述第一长度约6、12或15或更多百万碱基。
48. 权利要求44的组合物，其中所述参考值是6、7、8、9、10、11、12或13或更大。
49. 一种治疗患者癌症的方法，包括： 在来自所述患者的样品中检测癌症患者的癌细胞的至少一对人类染色体上的长于第 一长度并且短于包含LOH区域的整条染色体长度的LOH区域的数量表明癌细胞具有LOH标 记，其中所述至少一对人类染色体不是人类X/Y性染色体对，其中所述第一长度约1. 5或更 多的百万碱基； 提供来自所述LOH区域的数目的测试值； 将检测值与来源于参考人群的所述LOH区域数量的一种或多种参考值（如，平均值、 中间值、百分位点、四分位数、五分位数、等）做比较；并且 给予所述患者一种抗癌药物，或推荐或规定或启动包含化疗和/或合成致死剂的治疗 方案，至少部分基于所述比较步骤，揭示了测试值是大于（如，至少2-、3-、4-、5-、6-、7_、 8-、9_或10-倍大于；至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10标准差大于）至少一个所述的参考值； 或 推荐或规定或启动不包含化疗和/或合成致死剂的治疗方案，至少部分基于所述比较 步骤揭示了测试值不大于（如，不大于2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-倍，不大于1、2、3、 4、5、6、7、8、9或10标准差）至少一个所述的参考值。
50. 权利要求49的方法，其中所述LOH区域在至少2、5、10或21对人类染色体中被测 定。
51. 权利要求49的方法，其中所述的LOH区域的总数是9、15、20或更多。
52. 权利要求49的方法，其中所述第一长度约6百万、1千2百万或1千5百万或更多 喊基。
53. 权利要求49的方法，其中所述参考值是6、7、8、9、10、11、12或13或更大。
54. 权利要求49的方法，其中所述化疗选自包含DNA损伤剂、蒽环类。拓扑异构酶I抑 制剂和/或所述综合致死剂是PARP抑制剂药物的组合。
55. 权利要求49的方法，其中所述DNA损伤剂是顺钼、卡钼、奥沙利钼或吡钼；所述蒽 环类是表阿霉素或阿霉素；所述拓扑异构酶I抑制剂是喜树碱、托普替康或伊立替康；或所 述 PARP 抑制剂是 iniparib、olaparib 或 velapirib。
【文档编号】C12N15/11GK104160037SQ201280070358
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2011年12月21日
【发明者】V·阿布科维奇, A·古廷, K·蒂姆斯, J·兰奇布瑞 申请人:美瑞德生物工程公司, V·阿布科维奇, A·古廷, K·蒂姆斯, J·兰奇布瑞