黑线仓鼠dna序列的制作方法
【专利摘要】本发明公开了黑线仓鼠的DNA序列。本发明为了提供一种快速鉴定黑线仓鼠的方法，通过形态特征的鉴定方法对该鼠种进行了鉴定，并获取了该种的COI基因序列。本发明还提供一种用于检测黑线仓鼠的DNA标准基因、其引物及其试剂盒。本发明采用传统的形态学鉴定与分子分类方法相结合，对所述黑线仓鼠进行鉴定，可确保物种鉴定的准确性和可靠性。
【专利说明】黑线仓鼠DNA序列
【技术领域】
[0001]本发明涉及黑线仓鼠，具体涉及黑线仓鼠的DNA序列。
【背景技术】
[0002]黑线仓鼠(Cricetulus Barabensis)隶属于仓鼠科(Cricetidae),仓鼠亚科，仓鼠属(Cricetulus)。黑线仓鼠又名搬仓、小仓鼠、腮鼠、纹背仓鼠。国外主要分布于蒙古、俄罗斯；国内主要分布于河北、山西、内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁、山东、江苏、安徽、河南、湖南、湖北、陕西、宁夏、甘肃等地。黑线仓鼠可以传播鼠疫、钩端螺旋体病和蜱传斑疹伤寒等疾病。同时黑线仓鼠也已在细胞遗传学、辐射遗传学、实验肿瘤和分子生物学等许多领域广泛使用。
[0003]长期以来，对鼠类的鉴定主要依靠形态学特征来实现，但近几年，随着DNA测序等技术的进步，人们陆续采用分子生物学方法对鼠类的DNA进行研究，以期建立新的分类方法，与传统分类方法相互作证。
[0004]线粒体COI基因是鼠类鉴定研究中应用最为广泛的分子标记，就目前而言，鼠类分子鉴定研究在国内研究较少，本发明意在提供一种快速鉴定黑线仓鼠的科学依据。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供黑线仓鼠的DNA序列。其DNA序列的获得，可为该种的快速鉴定提供科学依据。
[0006]为实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现:
[0007]对黑河地区的黑线仓鼠分别用试剂盒提取其DNA序列，然后由合成的引物扩增其黑线仓鼠的COI基因，PCR产物序列送由专业生物公司测定。测序结果通过手工校对，并用Mega4.0软件进行相似性分析，确保所得序列为目标序列。所述黑线仓鼠的COI基因序列如SEQ ID No:1 所示。
[0008]本发明提供一种用于检测黑线仓鼠的DNA标准基因，其特征在于该基因为COI基因，具有如SEQ ID NO:1所不的基因序列。
[0009]本发明还提供一种检测黑线仓鼠的DNA标准基因的引物，其特征在于该引物序列为:
[0010]正向引物5 ’ ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3 ’ ；
[0011]反向引物5 ’ CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3 ’。
[0012]本发明还提供一种用于检测黑线仓鼠的试剂盒，其特征在于包括上述的引物。
[0013]本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，包括:
[0014]I)从待测的鼠类肝脏中分离提取DNA ；
[0015]2)以该DNA为模板，采用上述引物进行扩增；
[0016]3)鉴定扩增所得序列，如果该序列与SEQ ID NO:1的同源性在98%以上，即可判断所测田鼠为黑线仓鼠。[0017]本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中步骤2)中:
[0018]采用聚合酶链式反应扩增模板。
[0019]本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中步骤3)中:
[0020]所述鉴定包括取适量步骤2)扩增出的产物用琼脂糖电泳分离，经染色剂Goldview染色后于凝胶成像系统检测，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性扩增出750bp左右的条带，则进行测序分析。
[0021]本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中扩增体系为:
[0022]
【权利要求】
1.一种用于检测黑线仓鼠的DNA标准基因，其特征在于该基因为COI基因，具有如SEQID NO:1所不的基因序列。
2.一种检测权利要求1所述基因的引物，其特征在于该引物序列为: 正向引物 5’ ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3’ ； 反向引物 5’ CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3’。
3.一种用于检测黑线仓鼠的试剂盒，其特征在于包括权利要求2所述的引物。
4.黑线仓鼠的分子鉴定方法，包括: O从待测的鼠类肝脏中分离提取DNA ； 2)以该DNA为模板，采用权利要求2所述引物进行扩增； 3)鉴定扩增所得序列，如果该序列与SEQID NO:1的同源性在98%以上，即可判断所测田鼠为黑线仓鼠。
5.权利要求4所述的分子鉴定方法，其中步骤2)中: 采用聚合酶链式反应扩增模板。
6.权利要求4或5所述的分子鉴定方法，其中步骤3)中: 所述鉴定包括取适量步骤2)扩增出的产物用琼脂糖电泳分离，经染色剂Goldview染色后于凝胶成像系统检测，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性扩增出750bp左右的条带，则进行测序分析。`
7.权利要求4或5所述的分子鉴定方法，其中扩增体系为:
8.权利要求4或5所述的分子鉴定方法，其中扩增反应程序为: 预变性94°C 5min，35个循环，其中变性94°C 30s、退火55°C 40s、延伸72°C 60s，最后延伸 72°C IOmin0
9.权利要求5所述的分子鉴定方法，其中: 取5μ L PCR扩增产物，用1%琼脂糖凝胶电泳，130V电压，电泳35min，染色剂Goldview染色，凝胶成像系统检测。
10.一种快速鉴定黑线仓鼠的方法，其特征在于: 采用传统的形态学鉴定与权利要求4-9任一项所述的分子鉴定方法相结合。
【文档编号】C12N15/12GK103695547SQ201310701607
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月18日 优先权日:2013年12月18日
【发明者】张晓龙, 曹晓梅, 张玲, 王静, 李明, 乔舜, 王海玲, 刘润吉 申请人:中国检验检疫科学研究院