以人尿为氮源培养湛江球等鞭金藻的培养基及培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种以人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻方法，属水产养殖领域。湛江球等鞭金藻营养丰富，是对虾、扇贝、海参、海胆的优质饵料，传统上采用f/2培养液且采用敞口水泥池培养，培养液成分单调，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，现在我采用封闭式光生物反应器充气培养，以人尿为主要氮源并在培养基中添加了适量生长素贮液，碳酸氢钠，吲哚乙酸，乙酸钠，苯甲酸钠，海藻酸丙二醇酯，β-胡萝卜素，α-萘乙酸，钛溶液等成分，不仅变废为宝，还可获得有重要饵料价值的海洋微藻，一举多得，营养更全面、均衡，操作方便，可实现工厂化生产，成本低，效益高，产量提高180％。
【专利说明】以人尿为氮源培养湛江球等鞭金藻的培养基及培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种用人尿培养湛江球等鞭金藻的方法。
【背景技术】
[0002]人尿是一种极好的有机肥，特别是尿液储存了六个月之后堪比金坷垃。尿液主要成分是:水95%,蛋白质0%,葡萄糖0%,尿素1.8%,尿酸0.05%,无机盐1.1 %。据实验，1000公斤人尿肥效相当于5公斤纯尿素,4000公斤人尿肥效相当于100公斤硫酸铵。人尿作为优质有机肥，具有来源广、养分全面、肥效持久、成本低廉、保护土壤和环境等优点，深受广大农民喜爱。科学地施用人粪尿，能收到事半功倍的效果。100公斤人尿中加入0.5公斤硫酸亚铁，可使人尿中的碳酸及时转化成性能稳定的硫酸铵，既能保肥除臭，又能防止氮素挥发。100公斤人尿中加入5公斤过磷酸钙，搅匀后存放一周，能使人尿中极易挥发的碳酸铵转化成性能稳定的磷酸铵，增加人粪尿中的磷元素，达到以磷保氮的目的。研究表明，人尿是唯一可以替代化肥的速效有机肥并保护土壤。如果一个人一生的尿液全部用于种植，可以生产2吨西红柿或3吨小麦。
[0003]另外，现代中医认为，尿“可滋阴降火，止血消瘀。治阴虚发热，劳伤咳血，吐血，衄血，产后血瘀，血晕，跌打损伤，血瘀作痛”。《唐本草》曰，尿“主卒血攻心,被打内有瘀血,煎服之，一服一升。又主症积腹满，诸药不差者服之皆下血片肉块。亦主久嗽上气失声”。《本草拾遗》曰，尿“主明目益声，润肌肤，利大肠，推陈致新，去咳嗽肺痿，唐病”。《日华子本草》记载，尿“止劳渴，嗽，润心肺，疗血闷热狂，扑损瘀血运绝及困乏。揩洒皮肤治皲裂，能润泽人。蛇犬等咬，以热尿淋患处。难产及胞衣不下，即取一升，用姜、葱各一分煎三、两沸，乘热饮，便下。吐血，鼻洪，和生姜一分，绞汁，乘热顿饮瘥”。《医林纂要》认为，尿“通利三焦，降热去瘀，滋补心血，降泻肾邪。”
[0004]虽然人尿在作物、蔬菜、果树种植和医药上得到了广泛应用，但在海洋微藻特别是饵料微藻的培养上应用极少，这限制了人尿的进一步开发利用，而我的实验研究表明，人尿对饵料微藻湛江球等鞭金藻的生长发育、产量提高效果极好，这不仅为人尿开发应用开辟了新途径，而且还能使人尿发挥出更大的经济价值。
[0005]湛江球等鞭金藻Isochrysis galbana隶属金藻门chrysophyta,金藻纲chrysophyceae,等鞭金藻目Isochrysidales,等鞭金藻科Isochrysidaceae,等鞭金藻属Isochrysis Parke，为裸露的单细胞运动个体。细胞椭圆形，幼细胞略扁平，有背腹之分，侧面为长椭圆形；具2根等长鞭毛，为细胞体长1-2倍；色素体2个，侧生，大而伸长，形状和位置常随细胞体变化而变化；胞内有I小而暗红色眼点；储藏物为油滴和白糖素，随细胞老化，白糖素体积渐大直至充满细胞后部；细胞金褐色。在海洋中营浮游生活，属低温品系，在-8°C冰冻后，还能复苏，适宜生长水温0-27°C，最适为13-18°C ;适宜生长盐度10-35，最适15-30 ;适宜光照度3000-30000Iux ;最适pH6_10。营二分裂法无性繁殖，纵裂。正常情况5小时分裂I次；环境不良时形成孢子囊，内生孢子。该藻营养极丰富，含大量蛋白质、不饱和脂肪酸、糖类和维生素，大小适口，细胞壁薄，易消化，是对虾、扇贝、贻贝、梭子蟹、舌鳎、金枪鱼、大黄鱼、鲳鱼、带鱼、海参、海胆优质开口饵料,有重要培养价值。
[0006]湛江球等鞭金藻传统上采用f/2培养液且采用敞口开放水泥池培养，培养液成分单调，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在我采用封闭式平板光生物反应器充气培养，以人尿为主要氮源并在培养基中添加了适量生长素贮液，碳酸氢钠，苹果酸钠，柠檬酸铁，P1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸钠，谷氨酸钠，苯甲酸钠，海藻酸丙二醇酯，β-胡萝卜素，α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液，磷酸二氢钾，麦饭石粉，牛粪浸出液，920植物生长刺激素，钛溶液等营养成分，不仅可以废物利用，变废为宝，而且可获得有重要饵料价值的微藻，一举多得。有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，操作方便，灵活掌握，可实现自动化、工厂化、程序化、规模化生产，成本低，效益高，湛江球等鞭金藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提高180%。
【发明内容】
[0007]为了克服湛江球等鞭金藻传统培养方法的缺点，本发明提供了一种以人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，配方如下:
[0008]人尿65晕升，生长素I&液1.5晕升,碳酸氢钠180晕克,苹果酸钠3晕克,梓檬酸铁4毫克，P1微量元素溶液2毫升，吲哚乙酸1.5毫克，乙酸钠3.5毫克，谷氨酸钠8毫克，苯甲酸钠3毫克，海藻酸丙二醇酯6毫克，胡萝卜素10毫克，α-萘乙酸0.1毫克，土壤浸出液1.5晕升，海泥浸出液I晕升，磷酸二氢钾8晕克，麦饭石粉7晕克,牛粪浸出液3晕升,920植物生长刺激素6国际单位，钛溶液I晕升，次氯酸钠消毒后的纯净海水1000晕升;
[0009]其中，生长素贮液配方:生物素I毫克，维生素B110毫克，烟酸0.1毫克，对氨基苯甲酸10毫克，蒸馏水1000毫升；Pi微量元素溶液配方:乙二胺四乙酸1000毫克，氯化钴I毫克，氯化锌5毫克，氯化铜40微克，氯化锰40毫克，氯化铁10毫克，蒸馏水1000毫升；
[0010]一种利用人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，具体步骤如下:
[0011 ] 培养容器为自制的平板式光生物反应器，长方体，玻璃制成，长100厘米，高90厘米，宽25厘米，玻璃胶粘合而成，玻璃厚度4毫米。最上一块玻璃不用粘合，可以随意取下，相当于盖子。上面打上4个孔，其中两个穿过电源导线，导线末端各连着一个40瓦节能灯，还有一个孔插入充气管，另一孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米。将反应器先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟,然后用冷开海水冲洗3遍，装入所述的培养基至水深65厘米，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的湛江球等鞭金藻接种，接种密度8X 10 4CelVmL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，50厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与2个散气石连接，用以充气(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)；另一根较短，16厘米，两端露出盖子即可，用以排气；两根玻璃管同样粗细；用干净的透明胶带将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: 1% ;连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室外培养，太阳光照射，反应器面积最大的一面对着太阳，以接受最多阳光，有利于藻的光合作用，最佳温度20±2°C，最佳光照强度4000-15000LUX ;夜间打开节能灯进行照明。培养的前6天，反应器上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在3000-8000Lux，避免强烈阳光对细胞造成光伤害；第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成；培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基10升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，湛江球等鞭金藻密度增加至1000X 104cell/mL，停止培养，从底部的水龙头将藻液放出，将光生物反应器用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；
[0012]所述消毒液由以下重量比的物质组成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0013]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
[0014]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。
[0015]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。
[0016]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0017]有益结果
[0018]湛江球等鞭金藻传统上采用f/2培养液且采用敞口的开放水泥池培养，培养液成分单调，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在我采用封闭式光生物反应器充气培养，以人尿为主要氮源并在培养基中添加了适量的生长素贮液，碳酸氢钠，苹果酸钠，柠檬酸铁，P1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸钠，谷氨酸钠，苯甲酸钠，海藻酸丙二醇酯，β-胡萝卜素，α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液，磷酸二氢钾，麦饭石粉，牛粪浸出液，920植物生长刺激素，钛溶液等营养成分，不仅可以废物利用，变废为宝，而且可获得有重要饵料价值的微藻，一举多得。有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，操作方便，灵活掌握，可实现自动化、工厂化、程序化、规模化生产，成本低，效益高，湛江球等鞭金藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提高180%。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1为湛江球等鞭金藻形态结构图；
[0020]其中附图标记为:1鞭毛，2色素体，3细胞核，4白糖素。
[0021]图2为利用人尿培养湛江球等鞭金藻方法图；
[0022]其中附图标记为:5平板式光生物反应器，6散气石，7水龙头，8藻液，9节能灯，10充气管，11排气管。
【具体实施方式】
[0023]人尿预处理:人尿使用前需经处理，具体做法是:将人尿置于敞口光生物反应器阳光下自然发酵48小时，后转入黑色塑料桶密闭发酵72小时，倒出，加热并煮沸30分钟，杀死其中细菌、病毒等微生物，冷却、静置、沉淀24小时，取上清液，倒入磨口塞玻璃瓶密封保存，备用。
[0024]光生物反应器消毒方法:光生物反应器先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟，然后用冷开海水冲洗3遍。
[0025]土壤浸出液制备方法:取树林中松散、富含有机质的上层土壤I公斤，加纯水2000毫升，煮沸30分钟，在暗处放置2天，过滤，滤液600毫升加纯水400毫升使用。
[0026]因柠檬酸铁(FeC6H5O7.5Η20)较难溶解，可加少量自来水在火炉上微热至80-90°C，并不断搅拌至全部融化。
[0027]海泥抽取液制备方法:取比较肥沃又不於黑的海泥，以I份泥加2份淡水，充分搅拌均匀，静置1-2分钟，取上层泥浆于铝锅中，按每1000毫升泥浆加I克NaOH的量加入NaOH，煮沸25分钟。煮时需不断搅拌均匀，煮后静置24小时取上清液，密封，置于4°C冰箱或冷库备用。
[0028]牛粪浸出液制备方法:取新鲜牛粪50公斤，加入麸皮3公斤，玉米面I公斤，自来水4升，充分搅拌，堆成圆锥状，自然发酵15天，后摊成薄层，阳光下暴晒3天，后取3公斤放入水桶中，加入10升蒸馏水，充分搅匀，静置，48小时后100目筛絹过滤，取滤液加热，煮沸45分钟，杀死其中的细菌、霉菌、病毒等，冷却，沉淀24小时，取上清液，即得牛粪浸出液，装入磨口塞试剂瓶，密封，置于4°C冰箱或冷库备用。
[0029]麦饭石粉是麦饭石粉制品，由麦饭石原矿经过筛选，粉碎，加工成面粉状，颗粒大小可以通过200目筛絹即可。
[0030]920植物生长刺激素为白色结晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(一般每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小时以上)，再按所需浓度兑水稀释。
[0031]次氯酸钠消毒海水方法:取海水，脱脂棉过滤，按I立方米海水中加入漂白粉75克的量加入漂白粉，使海水中有效氯含量达到20mg/L，用空气压缩机充气12小时后，用硫代硫酸钠中和余氯。硫代硫酸钠量由余氯的多少来确定，直到滴入淀粉碘化钾液不变色为止。
[0032]钛溶液配法:把736.6毫克草酸钛，溶解于100毫升蒸馏水中，加入5克氢氧化铵，使之成碱性，发生沉淀，用离心法将沉淀集中，用20毫升0.05mol/L的硫酸溶解即得。
[0033]接种用的湛江球等鞭金藻预先进行提纯(本领域常规方法，只要可实现提纯即可，例如凯氏提取法)，以确保接种时藻种处于生长旺盛的指数生长期。
[0034]各种营养盐要按配方中提供的顺序加入，以免发生化学反应。
[0035]各种无机营养盐和维生素需预先配成母液且置于4°C冰箱或冷库冷藏保存备用，放置时间不要超过30天。
[0036]所用化学药品纯度均需化学纯级别。
[0037]一种以人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的培养基，配方如下:
[0038]人尿65晕升，生长素忙液1.5晕升,碳酸氢钠180晕克,苹果酸钠3晕克,朽1檬酸铁4毫克，P1微量元素溶液2毫升，吲哚乙酸1.5毫克，乙酸钠3.5毫克，谷氨酸钠8毫克，苯甲酸钠3毫克，海藻酸丙二醇酯6毫克，β-胡萝卜素10毫克，α-萘乙酸0.1毫克，土壤浸出液1.5晕升，海泥浸出液I晕升，磷酸二氢钾8晕克，麦饭石粉7晕克,牛粪浸出液3晕升,920植物生长刺激素6国际单位，钛溶液I晕升，次氯酸钠消毒后的纯净海水1000晕升;
[0039]其中，生长素贮液配方:生物素I毫克，维生素B110毫克，烟酸0.1毫克，对氨基苯甲酸10毫克，蒸馏水1000毫升；Pi微量元素溶液配方:乙二胺四乙酸1000毫克，氯化钴I晕克，氣化锋5晕克，氣化铜40微克，氣化猛40晕克，氣化铁10晕克，蒸懼水1000晕升。
[0040]一种利用人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，具体步骤如下:
[0041]培养容器为自制的平板式光生物反应器5，如图2所示，长方体，玻璃制成，长100厘米，高90厘米，宽25厘米，玻璃胶粘合而成，玻璃厚度4毫米，最上一块玻璃不用粘合，可以随意取下，相当于盖子，上面打上4个孔，其中两个穿过电源导线，导线末端各连着一个40瓦节能灯，还有一个孔插入充气管，另一孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米，将反应器先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟，然后用冷开海水冲洗3遍，装入所述的培养基至水深65厘米，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的湛江球等鞭金藻接种，接种密度8 X 104cell/mL，盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，50厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与2个散气石连接，用以充气(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，16厘米，两端露出盖子即可，用以排气，两根玻璃管同样粗细，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: I连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，反应器面积最大的一面对着太阳，以接受最多阳光，有利于藻的光合作用，最佳温度20 ± 2°C，最佳光照强度4000-15000LUX，夜间打开节能灯进行照明，培养的前6天，反应器上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在3000-8000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基10升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，湛江球等鞭金藻密度增加至1000 X 104cell/mL,停止培养，从底部的水龙头将藻液放出，将光生物反应器用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；
[0042]所述消毒液由以下重量比的物质组成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30份、杠板归15份、黄柏15份、苦参5份、艾叶5份、辅料3份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30份、杠板归15份、黄柏15份、苦参5份、艾叶5份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0043]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10分钟。
[0044]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5分钟。
[0045]优选地，对选用的光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5分钟。
[0046]优选地，对选用的光生物反应器，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0047]实施例2
[0048]其他步骤同于实施例1，区别在于所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮40份、杠板归20份、黄柏20份、苦参10份、艾叶10份、辅料4份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于65°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮40份、杠板归20份、黄柏20份、苦参10份、艾叶10份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料4份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2:1:1;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0049]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒15分钟。
[0050]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒7.5分钟。
[0051]优选地，对选用的光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5.5分钟。
[0052]优选地，对选用的光生物反应器，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2.5分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2.5分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0053]实施例3
[0054]其他步骤同于实施例1，区别在于所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮50份、杠板归25份、黄柏25份、苦参15份、艾叶15份、辅料5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮50份、杠板归25份、黄柏25份、苦参15份、艾叶15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2:1:1;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0055]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒20分钟。
[0056]优选地，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒10分钟。
[0057]优选地，对选用的光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒6分钟。
[0058]优选地，对选用的光生物反应器，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0059]最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。
【权利要求】
1.一种以人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的培养基，其特征在于配方如下: 人尿65晕升，生长素忙液1.5晕升,碳酸氢钠180晕克,苹果酸钠3晕克,朽1檬酸铁4毫克，P1微量元素溶液2毫升，吲哚乙酸1.5毫克，乙酸钠3.5毫克，谷氨酸钠8毫克，苯甲酸钠3毫克，海藻酸丙二醇酯6毫克，β-胡萝卜素10毫克，α-萘乙酸0.1毫克，土壤浸出液1.5晕升,海泥浸出液I晕升，磷酸二氢钾8晕克,麦饭石粉7晕克,牛粪浸出液3晕升，920植物生长刺激素6国际单位，钛溶液I毫升，次氯酸钠消毒后的纯净海水1000毫升；其中，生长素贮液配方:生物素I毫克，维生素B110毫克，烟酸0.1毫克，对氨基苯甲酸10毫克，蒸馏水1000毫升；Pi微量元素溶液配方:乙二胺四乙酸1000毫克，氯化钴I毫克，氯化锌5毫克，氯化铜40微克，氯化锰40毫克，氯化铁10毫克，蒸馏水1000毫升。
2.一种利用人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于具体步骤如下: 培养容器为自制的平板式光生物反应器，长方体，玻璃制成，长100厘米，高90厘米，宽25厘米，玻璃胶粘合而成，玻璃厚度4毫米，最上一块玻璃不用粘合，可以随意取下，相当于盖子，上面打上4个孔，其中两个穿过电源导线，导线末端各连着一个40瓦节能灯，还有一个孔插入充气管，另一孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米，将反应器先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟,然后用冷开海水冲洗3遍,装入权利要求1所述的培养基至水深65厘米，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的湛江球等鞭金藻接种，接种密度8 X 104cell/mL，盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，50厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与2个散气石连接，用以充气(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，16厘米，两端露出盖子即可，用以排气，两根玻璃管同样粗细，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: 1% ;连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，反应器面积最大的一面对着太阳，以接受最多阳光，有利于藻的光合作用，最佳温度20±2°C，最佳光照强度4000-15000LUX，夜间打开节能灯进行照明，培养的前6天，反应器上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在3000-8000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基10升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，湛江球等鞭金藻密度增加至1000X 104cell/mL，停止培养，从底部的水龙头将藻液放出，将光生物反应器用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养； 所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
3.根据权利要求2所述的一种利用人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
4.根据权利要求2所述的一种利用人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。
5.根据权利要求2所述的一种利用人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。
6.根据权利要求2所述的一种利用人尿为主要氮源培养湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，对选用的所述光生物反应器，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
【文档编号】C12N1/12GK104232491SQ201410436474
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】王培磊 申请人:临沂大学