京科528三系配套杂交种制种方法
【专利摘要】本发明公开了一种京科528三系配套杂交种制种方法，本发明提供了一种杂交制种的方法，包括如下步骤：以玉米不育系S 90110-2为不育系，玉米自交系90110-2为保持系，玉米自交系京2437为恢复系，进行三系配套制种，得到杂交种京科528。本发明的实验证明，本发明利用育成的不育系S 90110-2、保持系90110-2和恢复系京2437进行京科528三系配套杂交种制种，配制的不育化杂交种京科528种子在产量、抗性及其他农艺性状上与常规制种方法生产的京科528种子基本相同。CGMCC No865720131225
【专利说明】京科日28 H系配套杂交种制种方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物【技术领域】，尤其涉及一种京科528 H系配套杂交种制种方法。
【背景技术】
[0002] 强优势杂交种的选育和推广是提高玉米产量的重要途径。利用常规的制种方法配 制杂交种需要对母本进行人工去雄，不仅耗费大量的劳动力，增加种子生产成本，且存在由 于去雄不及时、不彻底影响种子质量的潜在风险。利用雄性不育系制种是保证种子纯度提 高玉米产量的一种有效方法。
[0003] 早在上世纪五六十年代，国内外就开始了对玉米不育化制种的研究。细胞质雄性 不育由于容易实现不育系、保持系和恢复系的配套，是玉米育种中利用的主要类型。细胞质 雄性不育系可划分为T、S和C型。60年代初，T型不育系引入我国。由于对玉米小斑病"T 小种"专化性侵染，T型不育系的应用受到严重限制。70年代，我国育种工作者从国外引进 C型、S型不育系。C型不育系虽然不育性较稳定、彻底，但其恢复系通常需要重新转育，周 期长且步骤繁琐，导致该型不育系在实践中难W普及应用。S型不育系是3种类型中最大的 一个组，已有研究证明昌7-2等黄改系材料是其天然强恢复系。但S型不育系的育性因基 因型背景的不同而有较大差异，在特定的遗传背景下育性高度稳定。国内优良玉米杂交种 的父本多属黄改种质，因此充分利用S型不育系可W节省恢复系的转育工作，是实现快速 不育化制种研究和应用的有效途径。
[0004] 实现玉米细胞质雄性不育化制种的关键是不育系、保持系和恢复系的选育。选育 不育系最常用的方法是回交转育法，即用稳定的不育系作非轮回亲本，选择优良自交系作 轮回亲本，进行多代回交，育成不育性稳定的优良不育自交系，而原轮回亲本便是该不育系 的保持系。但仅仅利用传统的回交转育方法，一般需回交5-6代，转育周期较长，延缓了不 育化制种技术在玉米杂交种上的应用。利用回交转育方法进行恢复系的选育比不育系更为 复杂，在回交的同时要进行测交，W测交结果作为恢复系的选择标准；或在回交转育中利用 不育细胞质提供育性的指标性状。由于选育过程相对繁琐，在恢复系尚未育成或只有部分 恢复性的情况下，须将不育化的杂交种子与正常杂交种种子按适当比例惨合使用，该就给 种子生产在技术和管理上提出了更高的要求。因此，如何加快不育系的选育速度、简化恢复 系的选育过程，是目前雄性不育化制种技术亟需解决的问题。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的是提供一种杂交制种的方法。
[0006] 本发明提供的方法，包括如下步骤；W玉米不育系S 90110-2为不育系，玉米自交 系90110-2为保持系，玉米自交系京2437为恢复系，进行H系配套制种，得到杂交种京科 528。
[0007] 上述方法中，所述不育系S 90110-2为按照包括如下步骤的方法转育：
[0008] a)玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本杂交，得到雄性不育杂交子代Fi ;
[000引 b) w所述雄性不育杂交子代Fi为母本、与90110-2回交，得到雄性不育BCi代群 体；
[0010] C) W所述雄性不育BCi代单株为母本、与90110-2继续回交，得到雄性不育BC2代 群体；
[0011] d) W所述雄性不育BC2代单株为母本、与90110-2继续回交，得到90110-2的雄性 不育系。
[0012] 上述方法中，在步骤b)和C)之间，还包括BCi代分子鉴定的步骤，所述BCi代分子 鉴定为利用40对SSR核也引物中在S京724和90110-2间存在差异的15对引物umc210化3、 phi053k2、bnlg2291k4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、umcl545y2、umcll25y3、bnlg240kl、 phi065k9、phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、umc2160k3、umcl936k4 和 phi041y6 分别对 所述雄性不育BCi代群体单株进行PCR扩增，选择与90110-2遗传相似度在96-97. 5%的 BCi代单株；
[0013] 所述选择与90110-2遗传相似度在96-97. 5%的BCi代单株的方法包括如下步骤： 比对BCi代单株的SSR图谱和采用同样的引物扩增90110-2的SSR图谱，计算遗传相似度；
[0014] 所述遗传相似度计算公式；[1-差异等位基因数/(2X比较总位点数）]X 100%
[0015] 所述差异等位基因数为用SSR核也引物扩增得到的所述雄性不育BCi代单株SSR 谱带带型与所述90110-2的SSR谱带带型不一致的等位基因数目；所述比较总位点数为 40。
[0016] 在步骤C)和d)之间，还包括BC2代分子鉴定的步骤，所述BC2代分子鉴定为用引 物A对所述雄性不育BC,代群体单株进行PCR扩增，选择扩增图谱与用同样引物A对所述 90110-2进行PCR扩增得到的图谱相同的雄性不育BC2代单株；
[0017] 所述引物A为BC2代单株对应的母本BCi代与90110-2相比扩增带型不同的SSR 引物；
[0018] 所述核也引物umc2105k3是由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序 列10所示的单链DNA分子组成；
[0019] 所述核也引物地i〇53k2是由序列表中序列11所示的单链DNA分子和序列表中序 列12所示的单链DNA分子组成
[0020] 所述核也引物bnlg229化4是由序列表中序列15所示的单链DNA分子和序列表中 序列16所示的单链DNA分子组成；
[0021] 所述核也引物bnlg2305k4是由序列表中序列19所示的单链DNA分子和序列表中 序列20所示的单链DNA分子组成；
[002引所述核也引物bnlgl61k8是由序列表中序列21所示的单链DNA分子和序列表中 序列22所示的单链DNA分子组成；
[0023] 所述核也引物umcl545y2是由序列表中序列25所示的单链DNA分子和序列表中 序列26所示的单链DNA分子组成；
[0024] 所述核也引物umcll25y3是由序列表中序列27所示的单链DNA分子和序列表中 序列28所示的单链DNA分子组成；
[00巧]所述核也引物bnlg240kl是由序列表中序列29所示的单链DNA分子和序列表中 序列30所示的单链DNA分子组成；
[0026] 所述核也引物地i065k9是由序列表中序列33所示的单链DM分子和序列表中序 列34所示的单链DNA分子组成；
[0027] 所述核也引物地i96100yl是由序列表中序列45所示的单链DNA分子和序列表中 序列46所示的单链DNA分子组成；
[0028] 所述核也引物umc2115k3是由序列表中序列57所示的单链DNA分子和序列表中 序列58所示的单链DNA分子组成；
[0029] 所述核也引物umcl429y7是由序列表中序列59所示的单链DNA分子和序列表中 序列60所示的单链DNA分子组成；
[0030] 所述核也引物umc2160k3是由序列表中序列65所示的单链DNA分子和序列表中 序列66所示的单链DNA分子组成；
[0031] 所述核也引物umcl936k4是由序列表中序列67所示的单链DNA分子和序列表中 序列68所示的单链DNA分子组成；
[0032] 所述核也引物地i041y6是由序列表中序列77所示的单链DNA分子和序列表中序 列78所示的单链DNA分子组成。
[0033] 上述方法中，为了减少工作量，在步骤b)和C)之间的BCi代分子鉴定前还包括BCi 代表型鉴定的步骤，所述BCi代表型鉴定为选取所述雄性不育BCi代群体中表型与90110-2 一致的BCi代单株；
[0034] 在步骤C)和d)之间的BC2代分子鉴定前还包括BC2代表型鉴定的步骤，所述BC2 代表型鉴定为选取所述雄性不育BC,代群体中表型与90110-2 -致的BC,代单株。
[00巧]上述表型与所述玉米90110-2 -致为表型与玉米90110-2完全相同或接近；表型 具体为株高、穗位高、株型、雄穗分枝数和/或果穗性状等。
[0036] 上述方法中，所述不育系S京724为按照包括如下步骤的方法选育；W玉米S型细 胞质雄性不育系MD32 CGMCC No. 8657为供体、玉米自交系京724为受体，进行回交转育，得 到京724的雄性不育系S京724。
[0037] 上述方法中，所述回交次数为3次。
[0038] 上述方法中，所述回交转育包括如下步骤：
[0039] 1) W玉米雄性不育系MD32 CGMCC No. 8657为供体、玉米自交系京724为受体，杂 交，得到雄性不育杂交子代Fi;
[0040] 2) W雄性不育杂交子代Fi为母本与京724回交，得到雄性不育BCi代群体；
[0041] 3) W雄性不育BCi代单株为母本与京724继续回交，得到雄性不育BC,代群体；
[0042] 4) W雄性不育BC2代单株为母本与京724继续回交，得到京724的雄性不育系S 京 724。
[0043] 上述方法中，在步骤2)和步骤3)之间，还包括如下分子鉴定A的步骤：从所述雄 性不育BCi代群体中选取与所述玉米京724遗传相似度在92. 5-95%的雄性不育BCi代单 株。
[0044] 上述方法中，所述从所述雄性不育BCi代群体中选取与所述玉米京724遗传相似 度在92. 5-95 %的雄性不育BCi代单株的方法包括如下步骤：用40对SSR核也引物分别对 雄性不育BCi代单株和玉米自交系京724进行PCR扩增，得到SSR谱带，通过比较BCi代单 株和玉米自交系京724的SSR图谱，计算遗传相似度；
[0045] 所述遗传相似度计算公式；[1-差异等位基因数/(2X比较总位点数）]X 100%
[0046] 所述差异等位基因数为用SSR核也引物扩增得到的所述雄性不育BCi代单株SSR 谱带带型与所述玉米自交系京724的SSR谱带带型不一致的等位基因数目；所述比较总位 点数为40。
[0047] 上述40对SSR核也引物中各个引物的序列分别为序列表中序列1-80所示，具体 见实施例的表1。
[0048] 上述方法中，为了减少工作量，在所述分子鉴定A前还包括如下步骤；从所述雄性 不育BCi代群体中选取表型与所述玉米京724 -致的雄性不育BCi代单株。
[0049] 上述方法中，在步骤3)和步骤4)之间，还具体包括如下分子鉴定B的步骤：从所 述雄性不育BC2代群体中选取与所述玉米京724遗传相似度在98. 75% -100%的雄性不育 BC2代单株。
[0050] 所述从所述雄性不育BC2代群体中选取与所述玉米自交系京724遗传相似度在 98. 75% -100%的雄性不育BC2代单株的方法包括如下步骤；用引物A分别对雄性不育BC2 代单株和玉米自交系京724进行PCR扩增，得到SSR谱带，通过比较BC,代单株和玉米自交 系京724的SSR图谱，计算遗传相似度；
[0051] 所述引物A为BC2代单株对应的母本BCi代与京724相比扩增带型不同的SSR引 物；
[0052] 所述遗传相似度计算公式；[1-差异等位基因数/(2X比较总位点数）]X 100%
[0053] 所述差异等位基因数为用引物A扩增得到的所述雄性不育BC,代单株SSR谱带带 型与所述玉米自交系京724的SSR谱带带型不一致的等位基因数目；
[0054] 所述比较总位点数为40。
[00巧]上述方法中，在所述分子鉴定B前还具体包括如下步骤：从所述雄性不育BC,代群 体中选取表型与所述玉米京724 -致的雄性不育BC2代单株。
[0056] 上述表型与所述玉米京724 -致为表型与玉米京724完全相同或接近；表型具体 为株高、穗位高、株型、雄穗分枝数和/或果穗性状等。
[0057] 本发明的另一个目的是提供培育不育系S 90110-2的方法。
[0058] 本发明提供的方法，包括如下步骤：
[0059] a)玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本杂交，得到雄性不育杂交子代Fi ;
[0060] b) W所述雄性不育杂交子代Fi为母本、与90110-2回交，得到雄性不育BCi代群 体；
[006。 C) W所述雄性不育BCi代单株为母本、与90110-2继续回交，得到雄性不育BC2代 群体；
[006引 d) W所述雄性不育BC2代单株为母本、与90110-2继续回交，得到90110-2的雄性 不育系；
[0063] 在步骤b)和C)之间，还包括BCi代分子鉴定的步骤，所述BCi代分子鉴定为用上 述 SSR 核也引物 umc210化3、地i053k2、bnlg229化4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、umcl545y2、 umcll25y3、bnlg240kl、phi065k9、phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、umc2160k3、 umcl936k4和地i041y6分别对所述雄性不育BCi代群体单株进行PCR扩增，选择与90110-2 遗传相似度在96-97. 5%的BCi代单株；
[0064] 在步骤c)和d)之间，还包括BC2代分子鉴定的步骤，所述BC2代分子鉴定为用引 物A对所述雄性不育BC,代群体单株进行PCR扩增，选择扩增图谱与用同样引物A对所述 90110-2进行PCR扩增得到的图谱相同的雄性不育BC2代单株；
[006引所述引物A为BC2代单株对应的母本BCi代与90110-2相比扩增带型不同的SSR 引物；
[0066] 在步骤b)和C)之间的BCi代分子鉴定前还具体包括BCi代表型鉴定的步骤，所述 BCi代表型鉴定为选取所述雄性不育BCi代群体中表型与90110-2 -致的BCi代单株；
[0067] 在步骤C)和d)之间的BC2代分子鉴定前还具体包括BC2代表型鉴定的步骤，所述 BC2代表型鉴定为选取所述雄性不育BC2代群体中表型与90110-2 -致的BC2代单株。
[0068] 上述玉米不育系S 90110-2在杂交制种中的应用也是本发明保护的范围。
[0069] 本发明的实验证明，本发明具体有如下优势：
[0070] 1、由于昌7-2等黄改材料是S型细胞质雄性不育系的强恢复系，京科528父本京 2437为黄改种质，因此选择京2437具有强恢复性的S型不育系作为母本90110-2不育系转 育的供体，节省了选育父本恢复系的繁琐工作；
[0071] 2、选用已获得的与母本90110-2亲缘关系较近的不育系S京724为供体，结合分 子标记辅助选择技术实现快速转育，仅回交H代即可获得玉米不育系S 90110-2,具有配合 力高、抗倒性好、耐密植等优点；
[0072] 3、选用的S型不育系MD32不育性稳定、花粉败育彻底，在已报道的玉米杂交种雄 性不育化制种研究中未见使用；
[0073] 总之，本发明利用育成的不育系S 90110-2、保持系90110-2和恢复系京2437进行 京科528 H系配套杂交种制种，配制的不育化杂交种京科528种子在产量、抗性及其他农艺 性状上与常规制种方法生产的京科528种子基本相同，且节省了常规制种中母本人工去雄 的时间和成本，消除了由于去雄不及时、影响种子质量的潜在风险。
【具体实施方式】
[0074] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[00巧]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0076] 实施例1、雄性不育系S京724的选育
[0077] -、不育系供体MD32细胞质雄性不育类型的确定
[0078] 1、玉米不育系MD32
[0079] 玉米不育系MD32选育过程；利用构建的X系群体（W XI132为基础）进行"高大 严"选系，从中选择优良S5高代系与外引杂交种构建新的选系基础群体。在自交后代中发 现不育株，雄穗花药不外露，选择同穗行表型相近的姊妹株对其进行成对授粉。杂交后代全 部表现彻底不育，植株表型也趋向基本一致。遂将该材料命名为玉米雄性不育系MD32。
[0080] 玉米不育系MD32不育性彻底；花药不外露；
[0081] 玉米不育系MD32不育性稳定；在多种遗传背景下，不育性表现彻底；
[0082] 玉米不育系MD32综合性状优良；种子芽势胚盛，出苗力强，幼苗叶銷色紫色，叶片 宽大，叶色浓绿，株型半紧凑，果穗筒型，粒型半硬粒型，综合抗性好。
[0083] 玉米不育系MD32于2013年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中也（简称CGMCC，地址；北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物 研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No. 8657,该植株分类命名为玉米狂ea mays)。
[0084] 2、不育系MD32细胞质雄性不育类型的确定
[0085] 提取玉米不育系MD32幼苗的DNA作为模板，用如下表1的引物进行PCR扩增，得 到扩增产物在Agarose凝胶上，90V电泳1小时30分钟。根据扩增片段图谱鉴别玉米MD32 胞质不育类型。
[0086] 结果，利用C、T型引物对MD32的DNA进行PCR扩增时，均未检测到扩增产物；利 用S型引物对其进行检测时，PCR产物片段大小为88化P。因此确定MD32为S型细胞质雄 性不育系。
[0087] 表1为鉴定胞质类型的引物
[0088]
【权利要求】
1. 一种杂交制种的方法，包括如下步骤：以玉米不育系s 90110-2为不育系，玉米自交 系90110-2为保持系，玉米自交系京2437为恢复系，进行三系配套制种，得到杂交种京科 528。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 所述不育系S 90110-2为按照包括如下步骤的方法转育： a) 玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本杂交，得到雄性不育杂交子代匕； b) 以所述雄性不育杂交子代匕为母本、与90110-2回交，得到雄性不育代群体； c) 以所述雄性不育代单株为母本、与90110-2继续回交，得到雄性不育％代群体； d) 以所述雄性不育BC2代单株为母本、与90110-2继续回交，得到90110-2的雄性不育 系。
3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于： 在步骤b)和c)之间，还包括代分子鉴定的步骤，所述代分子鉴定为利用40 对SSR核心引物中在S京724和90110-2间存在差异的15对引物umc2105k3、phi053k2、 bnlg2291k4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、umcl545y2、umcll25y3、bnlg240kl、phi065k9、 phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、umc2160k3、umcl936k4 和 phi041y6 分别对所述雄性不 育BC；代群体单株进行PCR扩增，选择与90110-2遗传相似度在96-97. 5%的BQ代单株； 在步骤c)和d)之间，还包括BC2代分子鉴定的步骤，所述BC2代分子鉴定为用引物A对 所述雄性不育BC2代群体单株进行PCR扩增，选择扩增图谱与用所述引物A对所述90110-2 进行PCR扩增得到的图谱相同的雄性不育BC2代单株； 所述引物A为BC2代单株对应的母本代与90110-2相比扩增带型不同的SSR引物； 所述核心引物umc2105k3是由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序列10 所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物Phi053k2是由序列表中序列11所示的单链DNA分子和序列表中序列12 所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物bnlg2291k4是由序列表中序列15所示的单链DNA分子和序列表中序列 16所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物bnlg2305k4是由序列表中序列19所示的单链DNA分子和序列表中序列 20所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物bnlgl61k8是由序列表中序列21所示的单链DNA分子和序列表中序列 22所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物umcl545y2是由序列表中序列25所示的单链DNA分子和序列表中序列 26所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物umcll25y3是由序列表中序列27所示的单链DNA分子和序列表中序列 28所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物bnlg240kl是由序列表中序列29所示的单链DNA分子和序列表中序列 30所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物Phi065k9是由序列表中序列33所示的单链DNA分子和序列表中序列34 所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物phi96100yl是由序列表中序列45所示的单链DNA分子和序列表中序列 46所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物umc2115k3是由序列表中序列57所示的单链DNA分子和序列表中序列 58所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物umcl429y7是由序列表中序列59所示的单链DNA分子和序列表中序列 60所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物umc2160k3是由序列表中序列65所示的单链DNA分子和序列表中序列 66所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物umcl936k4是由序列表中序列67所示的单链DNA分子和序列表中序列 68所示的单链DNA分子组成； 所述核心引物Phi041y6是由序列表中序列77所示的单链DNA分子和序列表中序列78 所示的单链DNA分子组成。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于： 在步骤b)和c)之间的代分子鉴定前还包括代表型鉴定的步骤，所述此"戈表 型鉴定为选取所述雄性不育代群体中表型与90110-2 -致的代单株； 在步骤c)和d)之间的BC2代分子鉴定前还包括BC2代表型鉴定的步骤，所述BC2代表 型鉴定为选取所述雄性不育BC2代群体中表型与90110-2 -致的BC2代单株。
5. 根据权利要求2-4中任一所述的方法，其特征在于： 所述不育系S京724为按照包括如下步骤的方法选育：以玉米S型细胞质雄性不育系 MD32 CGMCC No. 8657为供体、玉米自交系京724为受体，进行回交转育，得到京724的雄性 不育系S京724。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述回交次数为3次； 所述回交转育具体包括如下步骤： 1) 以玉米雄性不育系MD32 CGMCC No. 8657为供体、玉米自交系京724为受体，杂交，得 到雄性不育杂交子代匕； 2) 以雄性不育杂交子代匕为母本与京724回交，得到雄性不育代群体； 3) 以雄性不育代单株为母本与京724继续回交，得到雄性不育BC2代群体； 4) 以雄性不育BC2代单株为母本与京724继续回交，得到京724的雄性不育系S京724。
7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于：在步骤2)和步骤3)之间，还包括如下 分子鉴定A的步骤：从所述雄性不育代群体中选取与所述玉米京724遗传相似度在 92. 5-95 %的雄性不育代单株。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于：在所述分子鉴定A前还包括如下步骤：从 所述雄性不育代群体中选取表型与所述玉米京724 -致的雄性不育代单株； 在步骤3)和步骤4)之间，还具体包括如下分子鉴定B的步骤：从所述雄性不育BC2R 群体中选取与所述玉米京724遗传相似度在98. 75% -100%的雄性不育BC2代单株； 在所述分子鉴定B前还具体包括如下步骤：从所述雄性不育BC2代群体中选取表型与 所述玉米京724 -致的雄性不育BC2代单株。
9. 一种培育不育系S 90110-2的方法，包括如下步骤： a) 玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本杂交，得到雄性不育杂交子代匕； b) 以所述雄性不育杂交子代匕为母本与90110-2回交，得到雄性不育代群体； C)以所述雄性不育BCi代单株为母本与90110-2继续回交，得到雄性不育BC2代群体； d)以所述雄性不育BC2代单株为母本与90110-2继续回交，得到90110-2的雄性不育 系； 在步骤b)和c)之间，还包括代分子鉴定的步骤，所述代分子鉴定为用权利 要求 3 中的 SSR 核心引物 umc2105k3、phi053k2、bnlg2291k4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、 umcl545y2、umcll25y3、bnlg240kl、phi065k9、phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、 umc2160k3、umcl936k4、phi041y6分别对所述雄性不育BCi代群体单株进行PCR扩增，选择 与90110-2遗传相似度在96-97. 5%的代单株； 在步骤c)和d)之间，还包括BC2代分子鉴定的步骤，所述BC2代分子鉴定为用引物A对 所述雄性不育BC2代群体单株进行PCR扩增，选择扩增图谱与用同样引物A对所述90110-2 进行PCR扩增得到的图谱相同的雄性不育BC2代单株； 所述引物A为BC2代单株对应的母本代与90110-2相比扩增带型不同的SSR引物； 在步骤b)和c)之间的代分子鉴定前还具体包括代表型鉴定的步骤，所述BQ 代表型鉴定为选取所述雄性不育代群体中表型与90110-2 -致的代单株； 在步骤c)和d)之间的BC2代分子鉴定前还具体包括BC2代表型鉴定的步骤，所述BC 2代表型鉴定为选取所述雄性不育BC2代群体中表型与90110-2 -致的BC2代单株。
10.权利要求1-9所述方法中的所述玉米不育系S 90110-2在杂交制种中的应用。
【文档编号】C12Q1/68GK104396732SQ201410743446
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月8日 优先权日:2014年12月8日
【发明者】赵久然, 宋伟, 邢锦丰, 王元东, 段民孝, 刘春阁, 冯培煜, 张如养, 王凤格, 毛振武, 李瑞媛, 王乃顺, 王文广, 张莎莎 申请人:北京市农林科学院