本发明涉及使用发酵或/和酶的方法制备肽或蛋白质，尤其是一种海产废弃物提取营养液的方法。
背景技术：
：我们知道，在渔业生产过程中产生大量的海产品废弃物，不仅浪费了资源而且对环境造成了污染。如果能对海产品废弃物设计针对性的开发，将大大节约自然资源，带来良好的经济效益。在对海产品废弃物进行经济开发的过程中，一大困难在于海产品废弃物的新鲜度往往难以保证。与海产品正常原料相比，海产品废弃物需要从不同生产设施和不同生产步骤中收集、汇总并且用于后续的加工。在这过程中其可能出现轻微的自溶现象，并且导致组胺含量升高，产生严重的腥臭气味，并且将此气味带入到最终的产品中。对海产品下脚料进行加工，并且降低最终产品中的组胺含量，是本领域技术人员一直期待克服的技术问题。技术实现要素：为了克服现有海产废弃物制品组胺含量过高的不足，本发明的目的在于提供一种工艺合理、技术先进、操作性强的一种海产废弃物提取营养液的方法，采用该方法提取的营养液富含多肽、游离氨基酸、可溶性蛋白等营养物质，并且具有较低的组胺含量。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种海产废弃物提取营养液的方法，其特征在于：其经过以下步骤：（i）将海产废弃物进行预处理：除去贝类外壳和海产废弃物中明显腐烂的部分，并且将海产废弃物粉碎成5-10mm大小的颗粒，并且和1-1.5倍重量的水混合；（ii）将50-70重量份的步骤i的海产废弃物中加入胰蛋白酶至3000-6000u/ml，并且在40-45摄氏度下酶解12-18小时，并且在85-95摄氏度下加热15-30分钟进行灭活；（iii）将100-120重量份的的步骤i的海产废弃物中加入的碱性蛋白酶至1400-4000u/ml，并且在在40-45摄氏度下酶解12-18小时，并且在85-95摄氏度下加热15-30分钟进行灭活；（iv）混合步骤ii和iii的酶解混合物，并且按照1.5-3.0×106cfu/ml的量接种奥默柯达酵母，并且在40-45摄氏度下发酵12-18小时，并且在85-95摄氏度下加热15-30分钟进行灭活；（v）将步骤iv得到的发酵混合物过滤得到提取液。在本发明优选的方面，在步骤i中，所述的海产废弃物是动物性海产废弃物。在本发明优选的方面，在步骤ii中，将55重量份的步骤i的海产废弃物中加入胰蛋白酶至4500u/ml，并且在42摄氏度下酶解16小时。在本发明优选的方面，在步骤iii中，将120重量份的的步骤i的海产废弃物中加入碱性蛋白酶至2400u/ml，并且在在42摄氏度下酶解16小时。在本发明优选的方面，在步骤iv中，按照2.0×106cfu/ml的量接种奥默柯达酵母。在本发明优选的方面，在步骤iv中，所述的奥默柯达酵母是保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmccno.9510奥默柯达酵母（kodomaeaohmeri）。在本发明优选的方面，在步骤v之后，还包括将提取液通过蒸发或者冷冻干燥方法制得干燥提取物的步骤。本发明的方法所制备的提取物中富含多肽、游离氨基酸、可溶性蛋白等营养物质，并且具有较低的组胺含量。通过选择特定的酶解条件和两锅酶解混合串联发酵方法，使得发酵产物中组胺的含量降低。通过选择特定的酵母，实现了营养物质最大程度的保留。通过处理海产废弃物成为营养提取液，避免了其在自然条件下腐烂，进而保护了环境。本发明的方法工艺合理、技术先进、操作性强，可以广泛用于海产废弃物的加工，能够产生极高的经济效益和社会效益。具体实施方式以下结合试验数据对本发明的技术方案进行说明。除非另外地说明，本发明的奥默柯达酵母（kodomaeaohmeri）的保藏编号为cgmccno.9510，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。该酵母在中国发明专利申请cn201510124621.5中公开。该专利申请的公开号为cn106148210a，公开日为2016.11.23。以上的酵母菌株可得自中国普通微生物菌种保藏管理中心，并且其相关的专利申请在本申请的申请日之前已经公布。除非另外地说明，所述的酵母是通过培养种子液的形式加入到原料的。除非另外地说明，本实施例中的蛋白酶均购自东恒华道生物科技有限公司。两种酶均为80万u/克的干粉。在加入时，首先将该干粉加水制成10万u/ml的酶溶液，然后将一定体积的酶溶液加入到海鲜混合物中，达到期待的量。以下的实施例的动物性海产废弃物是从海产品加工厂、渔民码头等地收购来的动物性海产废物混合物。取1kg的动物性海产废弃物进行分类和称重，发现其中有小鱼和鱼类残体380克，小螃蟹、螃蟹残体及虾类247克，贝类138克，其余为无法区分其物种的碎海产废弃物。实施例1一种海产废弃物提取营养液的方法，其经过以下步骤：（i）将动物性海产废弃物进行预处理：除去贝类外壳和海产废弃物中明显腐烂的部分，并且将海产废弃物粉碎成5-10mm大小的颗粒，并且和1倍重量的水混合；（ii）将55重量份的步骤i的海产废弃物中加入胰蛋白酶至4500u/ml，并且在42摄氏度下酶解16小时，并且在85摄氏度下加热15分钟进行灭活；（iii）将120重量份的的步骤i的海产废弃物中加入碱性蛋白酶至2400u/ml，并且在在42摄氏度下酶解16小时，并且在85摄氏度下加热15分钟进行灭活；（iv）混合步骤ii和iii的酶解混合物，并且按照2.0×106cfu/ml的量接种奥默柯达酵母，并且在42摄氏度下发酵16小时，并且在85摄氏度下加热15分钟进行灭活；（v）将步骤iv得到的发酵混合物过滤得到淡黄色清澈营养提取液。实施例2一种海产废弃物提取营养液的方法，其经过以下步骤：（i）将动物性海产废弃物进行预处理：除去贝类外壳和海产废弃物中明显腐烂的部分，并且将海产废弃物粉碎成5-10mm大小的颗粒，并且和1.5倍重量的水混合；（ii）将50重量份的步骤i的海产废弃物中加入胰蛋白酶至3000u/ml，并且在45摄氏度下酶解18小时，并且在85摄氏度下加热30分钟进行灭活；（iii）将100重量份的的步骤i的海产废弃物中加入碱性蛋白酶至4000u/ml，并且在在40摄氏度下酶解12小时，并且在95摄氏度下加热15分钟进行灭活；（iv）混合步骤ii和iii的酶解混合物，并且按照1.50×106cfu/ml的量接种奥默柯达酵母，并且在40摄氏度下发酵18小时，并且在85摄氏度下加热15分钟进行灭活；（v）将步骤iv得到的发酵混合物过滤得到淡黄色清澈营养提取液。实施例3一种海产废弃物提取营养液的方法，其经过以下步骤：（i）将动物性海产废弃物进行预处理：除去贝类外壳和海产废弃物中明显腐烂的部分，并且将海产废弃物粉碎成5-10mm大小的颗粒，并且和1.2倍重量的水混合；（ii）将70重量份的步骤i的海产废弃物中加入胰蛋白酶至6000u/ml，并且在40摄氏度下酶解12小时，并且在95摄氏度下加热15分钟进行灭活；（iii）将110重量份的的步骤i的海产废弃物中加入碱性蛋白酶至1400u/ml，并且在在45摄氏度下酶解18小时，并且在95摄氏度下加热30分钟进行灭活；（iv）混合步骤ii和iii的酶解混合物，并且按照3.0×106cfu/ml的量接种奥默柯达酵母，并且在45摄氏度下发酵12小时，并且在85摄氏度下加热15分钟进行灭活；（v）将步骤iv得到的发酵混合物过滤得到淡黄色清澈营养提取液。对比例1本对比例与实施例1相比略去了步骤ii，只采取步骤iii的胰蛋白酶酶解串联步骤iv的发酵。对比例2本对比例与实施例1相比略去了步骤iii，只采取步骤ii的胰蛋白酶酶解串联步骤iv的发酵。对比例3本对比例与实施例1相比略去了步骤iv，在步骤ii和ii之后直接进行混合和步骤v的过滤得到提取液的步骤。多肽、游离氨基酸或者可溶性蛋白含量和组胺含量的测定将实施例1-3、对比例1-3所得到的提取液进行多肽、游离氨基酸或者可溶性蛋白含量和组胺含量的测定。其中，多肽、游离氨基酸或者可溶性蛋白的测定方法采取凯氏定氮法来进行，具体地该方法参见gb/t5009.5—1985。对组胺的测定使用hplc方法来进行，并且使用标准品内标法来进行定量。其试验结果显示在表1中。在本发明中，除非另外地说明，将“多肽、游离氨基酸或者可溶性蛋白”均视作“总蛋白量”，并且按照蛋白质中所包含的平均氮含量（16wt.%）折算提取液中的蛋白质含量。需要说明的是，尽管对于组胺含量使用mg/kg来表示更为方便，但是考虑到欧洲食品标准里均为mg/kg作为标准的单位，所以按照其密度进行矫正之后，得到了mg/kg的数值，并且在表1中给出。表1：实施例1-3和对比例1-3的提取液中总蛋白的量（mg/l）和组胺含量（mg/kg）组号总蛋白量（g/l）组胺含量（mg/kg）实施例14.22106实施例23.7489实施例33.51126对比例11.41175对比例22.12213对比例30.84719由以上的数据可以看出，在不进行发酵只进行酶解的情况下，组胺含量极高，远远超出欧洲食品标准（400mg/kg），难以作为调味液来进行使用。与此同时，其中的多肽、游离氨基酸或者可溶性蛋白的含量较低，原料没有得到充分的利用。在进行了发酵的情况下（对比例1-2），组胺含量大幅度降低了，并且多肽含量得到了降低。在实施例1的情况下，组胺含量进一步降低，并且其营养成分含量得到提升。在实施例2的情况下，组胺的含量最低，并且也具有较高的总蛋白量。申请人还惊喜地发现，分离了提取液之后的残渣也没有明显的腥臭味。申请人将其晾晒至半干之后，用作厂区植物的花肥。发现此花肥的肥力较高，约相当于堆渥鸡粪肥料肥力的1.5-2倍，并且不会产生鸡粪肥料的不愉快气味。在此情况下，相当于对海产废弃物进行了充分的利用，没有带来任何的浪费，并且产生任何的最终废弃物。当前第1页12