允许促进养殖型动物的幼年生长的益生组合物的制作方法

文档序号:15879053发布日期:2018-11-09 17:33阅读:121来源:国知局

被描述为“附加器官”的肠道微生物群落(或肠道微生物丛)通过行使众多生物学功能来发挥对于宿主有益的关键作用,例如有助于消化的效率、底物的代谢、针对病原体的斗争或者免疫应答的确立和稳态。

2001年由世界卫生组织(who)和联合国粮农组织(fao)定义,益生菌是“当以足够的量摄入时对于健康产生超过传统营养效应之外的正面效应的活微生物”。

wo2015173386涉及允许在营养不良的情况下促进人和动物的幼年生长的乳杆菌组合物。然而,在该营养缺乏的背景下,该组合物虽然允许改善幼年生长,但是它独自不允许在用该组合物进行处理的处于营养不良的受试者中完全恢复最佳生长。相反地,并不期望在常规营养下乳杆菌属细菌组合物对于动物的幼年生长具有显著的效应。

某些养殖业参与者求助于施用生长激素或抗生素来促进养殖型动物的生长。工作还描述了施用益生菌来提高体重增加。

对于这样的有效的解决方案依然存在需求,所述有效的解决方案允许促进养殖型动物的生长,而无需求助于施用生长激素或生长因子或者抗生素,并且诱导骨骼生长。

因此,本发明的目标在于提出对于该需求的益生解决方案,其采用允许在断奶前和/或断奶后(尤其是在断奶后)的经历常规营养的养殖型动物中促进幼年生长(即体重和线性生长)的组合物。

本发明的另一个目标在于促进igf-1的产生。

本发明的另一个目标在于提供这样的组合物,其基于使用具有肠道向性的细菌菌株,尤其是共生的或者作为益生菌可接受的菌株。

本发明的另外一个目标在于提供这样的组合物,其尤其促进动物的线性生长(其也称为骨骼生长,这是由于骨生长而引起的)、在肌肉质量方面的体重增加、瘦体质量(主要是肌肉质量和骨骼质量)的增加和/或骨长度的增加。

本发明的另外一个目标在于提供这样的组合物和方法,其允许支持按照现行法规(尤其是欧洲法规)的健康和/或营养主张。

本发明基于这样的事实,即某些在动物物种中具有肠道向性的细菌菌株具有在经历用于所考虑的动物物种或动物的常规饲养营养(按照提供用于平衡生长的配给量的现行饲养实践进行喂养的动物)的该同一物种或另一物种的受试者中促进幼年生长的效应。因此,已经能够证明乳杆菌属(lactobacillus)的细菌菌株在处于用于小鼠的常规饲养营养饮食制度下的小鼠模型中能够促进幼年生长,和此外,已经能够在这些在小鼠中的生长结果与在这些条件下用这些细菌处理的小鼠中的胰岛素样生长因子1(igf-1)血清滴度的增加之间建立联系。

因此,本发明涉及具有肠道向性的细菌菌株,优选地乳酸细菌,特别地乳杆菌属的细菌,特别地植物乳杆菌的用途和施用,以便促进养殖型脊椎动物的幼年生长,特别是对于断奶后生长。幼年生长或断奶后生长的优化可以按照单独采取或相联合的各种不同客观标准来进行测量。这些客观标准尤其包括:线性生长(从口鼻部或嘴至尾巴基部的大小),体重增加,其优选地被报告与线性生长或与肌肉质量增加相关(目的是摆脱由于脂肪质量增加而引起的体重增加),瘦体质量(其中将会包括肌肉质量和骨骼质量),骨的长度或身体的长度(对于鱼类),其中根据本发明的用途导致一个或多个所观察的标准的增加。有利地,这些标准伴随有igf-1血清滴度(在下面在小鼠中所例示的)的增加。还可以仅保留igf-1血清滴度的增加这一标准,尤其是一旦与其他标准建立相关性。

因此,本发明的目标在于用于动物的益生组合物或食物,其包含至少一种细菌菌株,特别是乳酸细菌,所述益生组合物或食物在养殖型动物中促进幼年生长,优选地通过刺激幼年生长,尤其是线性生长,和/或igf-1水平。该组合物旨在用于在养殖型动物中促进幼年生长的用途。

所述细菌具有“肠道向性”,这意味着所述细菌具有通过胃屏障的能力(要么天然地,要么通过在胃保护型制剂中进行施用),并且能够在肠中坚持,以便产生促进幼年生长的效应。

按照本发明的一个有利的特征,所述细菌可以在用根据本发明的组合物进行处理的动物中促进igf-1的产生。igf-1水平的增加尤其可以与经刺激的幼年生长(依照上述的生长标准是合格的)相关联。因此,本发明涉及允许在用根据本发明的组合物进行处理的幼年动物中促进或增加igf-1的产生的益生组合物。

本发明尤其提出了属于下列科的细菌菌株:乳杆菌科(lactobacillaceae)、链球菌科(streptoccaceae)、肠球菌科(enterococcaceae)、明串珠菌科(leuconostocaceae)、双歧杆菌科(bifidobacteriaceae)。依照一种方式,本发明使用一种或多种乳杆菌属菌株,特别是下列物种之一:德氏乳杆菌(lactobacillusdelbrueckii)、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)、类干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)。

更特别地,所述细菌为属于植物乳杆菌、发酵乳杆菌、干酪乳杆菌、类干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌这些物种的细菌。依照一种方式,所述菌株选自植物乳杆菌、发酵乳杆菌、干酪乳杆菌这些物种。

本发明的目标尤其在于一种益生组合物,其包含至少一种具有肠道向性的德氏乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、干酪乳杆菌或类干酪乳杆菌的菌株,所述益生组合物用于旨在通过刺激线性生长和/或igf-1水平来在常规饲养营养下促进养殖型脊椎动物的幼年生长的用途。

本发明的目标还在于一种益生组合物,其包含至少一种具有肠道向性的乳酸细菌菌株,优选地乳杆菌属菌株,所述益生组合物用于旨在在常规饲养营养下增加养殖型脊椎动物中的igf-1水平的用途。

依照本发明目标的一个实施方案,所述细菌菌株选自植物乳杆菌wjl、植物乳杆菌g821(cncmi-4979)、植物乳杆菌nizo2877、干酪乳杆菌atcc393、干酪乳杆菌l919、类干酪乳杆菌atcc25302、类干酪乳杆菌shirota、发酵乳杆菌atcc9338、鼠李糖乳杆菌l900、鼠李糖乳杆菌l908、鼠李糖乳杆菌gg。依照一种方式,所述菌株选自植物乳杆菌wjl、植物乳杆菌g821、干酪乳杆菌atcc393、干酪乳杆菌l919、发酵乳杆菌atcc9338。

在一个特别的实施方案中,所述细菌是植物乳杆菌这一物种的细菌,例如菌株wjl,或菌株g821,其于2015年5月11日以登记号cncmi-4979保藏于国家微生物保藏中心(collectionnationaledeculturedemicroorganismes)(institutpasteur)。已经通过植物乳杆菌nizo2877这一菌株的实验进化(即通过天然变体的积累和选择)而获得了菌株g821。

依照一种方式,根据本发明的组合物包含至少一种从这些群中选择的细菌菌株,其具有所要求的特性并且允许促进幼年生长。当然,根据本发明的组合物可以包含多于一种符合本发明的需求的细菌菌株。尤其,所述组合物包含选自相同物种或不同物种的2种或更多种这些细菌菌株。

依照一个令人感兴趣的实施方案,所述细菌为植物乳杆菌。合适的菌株为植物乳杆菌g821、植物乳杆菌nizo2877和植物乳杆菌wjl(eun-kyoungkim等人,genomeannouncements,2013年11/12月,vol.1,no.6e00937-13,genbankaute00000000,lactobacillusplantarumwjl,wholegenomeshotgunsequencingproject)。该菌株wjl最初已分离出并且可以从果蝇中分离(jhryu等人,science2008,319:777-782)。

合适菌株的其他例子为下列:干酪乳杆菌atcc393、干酪乳杆菌l919(koryszewska-baginskaa.等人,2013年9月26日,genomeannounc)、类干酪乳杆菌atcc25302、类干酪乳杆菌shirota(yukin等人,intjfoodmicrobiol.1999年4月1日,48(1):51-7)、发酵乳杆菌atcc9338、鼠李糖乳杆菌l900(aleksandrzak-piekarczykt.等人,genomeannounc,2013年8月15日)、鼠李糖乳杆菌l908(koryszewska-baginskaa.等人,2014年2月20日,genomeannounc)、鼠李糖乳杆菌gg(kankainenm.等人,procnatlacadsciusa,2009年10月6日)。

因此,本发明在技术上提供了教导,即具有肠道向性的细菌菌株促进在常规营养条件下进行饲养的动物的幼年生长。但是,本发明并不局限于该教导,它还向技术人员提供允许其可靠地测定对于本发明来说有用的细菌菌株的工具。各种不同的标准可以作为测试的基础,其中单独地或相联合地进行使用。在这些标准中,将会注意到在模型动物(例如小鼠)中的igf-1血清水平、模型小鼠的生长(其例如通过动物的股骨长度或线性生长来举例说明)或者体重增加(其尤其与线性生长和/或与肌肉质量增加和/或与瘦体质量增加相关)。在这些标准或相似标准的基础之上,对于技术人员来说可能的是,制定这样的测试,其比较在待测试细菌存在或不存在下所饲养的个体。

“无菌(的)”生物是指在没有微生物并因此没有肠道微生物区系的环境中饲养的生物(例如小鼠)。

“单菌(的)”生物是指在单一微生物存在下进行饲养并因此携带该单一微生物作为肠道微生物区系的相关联的无菌生物(例如小鼠)。

根据本发明,可能的是,通过使用无菌小鼠模型来测定具有肠道向性的细菌菌株是否允许在常规营养的情况下促进生长,所述无菌小鼠模型使得能够与微生物丛的不存在和/或与参照细菌菌株的存在相比较地实施在待测试细菌存在下小鼠的线性生长的监测。该模型可以以最初的意图进行使用。

依照本发明的一个特征,根据本发明的细菌菌株的特征在于,它们对于下面的线性生长测试作出阳性反应:

-从相同的小鼠品系(典型地,balb/c小鼠)开始,建立无菌亲本小鼠品系和单菌亲本小鼠品系(与待测试细菌相关联的),并且产生幼年鼠,将所述幼年鼠与亲本一起用包含大约40%碳水化合物、大约25%蛋白质和大约9%脂质的常规营养培养基进行饲养直至其断奶(在第21天);为了形成单菌幼年鼠组,使用与待测试细菌菌株单相关联的亲本;

-在第21天:拥有来自这两个品系中每一个品系的8只经断奶的幼年鼠,从而形成单菌组和无菌组,并且将它们以包含大约40%碳水化合物、大约25%蛋白质和大约9%脂质的常规营养饮食制度进行饲养;

-在第56天:通过对每个个体从口鼻部端部至尾巴基部进行测量,测定关于所考虑的组的小鼠的大小平均值;另一种可能的测量在于处死个体、从中取出股骨和测量这些股骨的长度;

-如果单菌组的个体的平均大小和/或股骨的平均长度分别以下述程度大于无菌组的个体的平均大小和/或股骨的长度,那么认为所述乳酸细菌菌株对于所述测试作出阳性反应:在tukey统计学检验中具有小于0.05的p值。

因此,本发明的目标在于包含至少一种具有肠道向性的细菌菌株(特别是乳酸细菌)的组合物,所述组合物用于为了在常规营养的背景下促进幼年生长而进行使用,其中所述细菌菌株对于在小鼠上的线性生长测试作出阳性反应。作为例子,可以提及下述菌株:植物乳杆菌wjl。其他菌株可以从具有肠道向性的细菌中,和尤其是从上面提及的物种和菌株中,尤其是从植物乳杆菌g821、干酪乳杆菌atcc393、干酪乳杆菌l919、类干酪乳杆菌atcc25302、类干酪乳杆菌shirota、发酵乳杆菌atcc9338、鼠李糖乳杆菌l900、鼠李糖乳杆菌l908、鼠李糖乳杆菌gg这些菌株中鉴定出来。

在本发明的一个实施方案中,使用菌株wjl或具有“明显的”效应的其他菌株作为参照菌株以便鉴定和选择这样的细菌菌株,其具有“明显的”对于幼年生长的效应,即与该参照菌株例如wjl的效应接近的效应(非显著地不同于参照菌株例如wjl的效应),或者“强的”对于幼年生长的效应(显著地大于参照菌株例如wjl的效应)。

为此,将所述小鼠测试(包括8只小鼠/条件)应用于参照菌株例如wjl和待测试菌株(平行地,优选地或者可以拥有对于菌株wjl事先产生的参照数据,例如在实施例中所给出的数据)。然后,比较关于所述两个菌株而获得的平均值。如果单菌组的个体的平均大小和/或股骨的长度的平均值并不显著地不同于关于参照组(例如wjl)的相应的平均值,那么认为所测试的细菌菌株为具有明显的效应的菌株,其中在tukey统计学检验中具有大于0.05的p值。如果关于待测试菌株的所述平均值显著地大于关于参照菌株例如wjl的平均值,那么该效应是强的,这是当统计学检验的p值小于0.05时的情况。如果关于待测试菌株的所述平均值(其已在前面的测试中相关于无菌小鼠进行了描述)显著地小于关于参照菌株例如wjl的平均值,那么该效应被视为中间的,这是当统计学检验的p值小于0.05时的情况。

根据本发明的组合物优选地将会包含至少一种具有这样的明显或强的效应的细菌菌株。

根据本发明的细菌菌株的特征可以在于,它们对于血清igf-1水平具有正面影响。因此,在无菌小鼠模型的基础之上,可能的是证明,用常规培养基并且在细菌存在下进行饲养的小鼠(单菌小鼠)具有更大的生长和同时更高的血清igf-1水平,相对于用该常规培养基但在细菌不存在下进行饲养的这些相同小鼠(无菌小鼠)而言。这使得能够提出这样的测试,其使得能够测定细菌菌株是否具有增加igf-1血清水平的潜力,该测试可以任选地与线性生长测试相联合地进行应用以便明确或提炼所述菌株对于生长的效应。

在该情况下,根据本发明的细菌菌株的特征在于,它们对于下面的血清igf-1水平测试作出阳性反应:

-从相同的小鼠品系(典型地,balb/c小鼠)开始,建立无菌亲本小鼠品系和单菌亲本小鼠品系(与待测试细菌相关联的),并且产生幼年鼠,将所述幼年鼠与亲本一起用包含大约40%碳水化合物、大约25%蛋白质和大约9%脂质的常规营养培养基进行饲养直至其断奶(在第21天);为了形成单菌幼年鼠组,使用与待测试细菌菌株单相关联的亲本;

-在第21天:拥有来自这两个品系中每一个品系的8只经断奶的幼年鼠,从而形成单菌组和无菌组,并且将它们以包含大约40%碳水化合物、大约25%蛋白质和大约9%脂质的常规营养饮食制度进行饲养;

-在第56天:抽取每个组的幼年鼠的血液,并测定关于每个组的igf-1的平均血清水平;igf-1血清水平的该测量优选地在经稀释的(1:25)血清上进行;优选地使用igf-1检测的商业elisa试剂盒,其中依照制造商的使用说明书;

-如果单菌组的igf-1的平均血清水平以下述程度大于无菌组的平均血清水平,那么认为所述乳酸细菌菌株对于所述测试作出阳性反应:在tukey统计学检验中具有小于0.05的p值。

因此,本发明的目标在于包含至少一种具有肠道向性的细菌菌株(特别是乳酸细菌)的组合物,所述组合物用于为了在常规营养下促进幼年生长而进行使用,其中所述细菌菌株增加血清igf-1水平。它尤其是对于上面所描述的在小鼠上的igf-1测试作出阳性反应的细菌菌株。

本发明的目标还在于包含至少一种具有肠道向性的细菌菌株(特别是乳酸细菌)的组合物,所述组合物用于为了在常规营养下促进幼年生长而进行使用,其中所述细菌菌株对于在小鼠上的线性生长测试作出阳性反应并在这些相同小鼠中增加igf-1血清水平。它尤其是对于上面所描述的在小鼠上的线性生长测试和igf-1测试作出阳性反应的细菌菌株。

作为例子,可以提及下述菌株:植物乳杆菌wjl。其他菌株可以从具有肠道向性的细菌中,和尤其是从上面提及的物种和菌株中,尤其是从植物乳杆菌g821、干酪乳杆菌atcc393、干酪乳杆菌l919、类干酪乳杆菌atcc25302、类干酪乳杆菌shirota、发酵乳杆菌atcc9338、鼠李糖乳杆菌l900、鼠李糖乳杆菌l908、鼠李糖乳杆菌gg这些菌株中鉴定出来。

在本发明的一个实施方案中,使用菌株wjl或具有“明显的”效应的其他菌株作为参照菌株以便鉴定和选择这样的细菌菌株,其具有“明显的”对于igf-1血清水平的效应,即与该参照菌株例如wjl的效应接近的效应(非显著地不同于参照菌株例如wjl的效应),或者“强的”对于igf-1血清水平的效应(显著地大于参照菌株例如wjl的效应)。

为此,将所述用于测量igf-1血清水平的小鼠测试(包括8只小鼠/条件)应用于参照菌株例如wjl和待测试菌株(平行地,优选地或者可以拥有对于参照菌株例如wjl事先产生的参照数据,例如在实施例中所给出的数据)。然后,比较关于所述两个菌株而获得的igf-1血清水平平均值。如果单菌组的igf-1水平平均值并不显著地不同于关于参照组(例如wjl)的平均值,那么认为所测试的细菌菌株为具有明显的效应的菌株,其中在tukey统计学检验中具有大于0.05的p值。如果当p值小于0.05时,关于待测试菌株的所述平均值显著地大于关于参照菌株例如wjl的平均值,那么该效应是强的。如果当p值小于0.05时,关于待测试菌株的所述平均值(其事先对于前面的无菌测试进行了描述)显著地小于关于参照菌株例如wjl的平均值,那么该效应被视为中间的。

因此,根据本发明的组合物优选地将会包含具有这样的明显或强的效应的细菌菌株,和特别地该细菌菌株同时对于线性生长和对于igf-1血清水平具有明显或强的效应。

所述组合物可用于广义上的养殖型动物,其尤其包括牧场动物(家畜)、家禽饲养场动物、水生动物、伴侣动物。尤其,所述组合物可用于哺乳动物,尤其是农用动物(牛、绵羊、山羊、猪、禽类)、伴侣动物(狗、猫)和体育运动用动物(马、单峰驼、双峰驼),其优选地处于断奶和性成熟之间,或者处于断奶和成年阶段(以达到成年大小、骨骼生长结束为特征)之间,这在本文中被称为幼年动物。所述组合物可以施用给经阉割的动物,尤其是在阉割之前和/或在阉割后的余下的骨骼生长时间段中。所述组合物还可用于在鱼类饲养。在一个实施方案中,所述动物为食肉动物。在另一个实施方案中,所述动物为反刍动物。

所述组合物尤其可以包含大约105至大约1012,尤其是大约106至大约1012,优选地大约108至大约1012个根据本发明的形成菌落的细菌细胞(cfu)/克组合物这样的量。按照英语的技术表述,术语“cfu”表示“菌落形成单位”。“组合物的克数”优选地涉及由细菌、共组分和赋形剂或载体形成的益生组合物。“细菌细胞”涉及按照本发明的单一细菌菌株,或者至少两种按照本发明的细菌的混合物。

所述组合物尤其可以包含以活的形式的乳酸细菌。所述组合物可以以随时可用的形式,或者以待与食物、赋形剂或食用液体例如饮用水相混合或者用之进行稀释的形式存在。

所述组合物可以是细菌悬浮液,其可以进行冷冻和在使用前进行解冻。

所述组合物可以是冻干粉末,其可以就这样以粉剂、颗粒剂、片剂、大丸剂、胶囊、明胶胶囊的形式进行使用,或者在接纳在合适的载体中之后进行使用。该组合物可以包含惯用的冻干赋形剂。

所述组合物可以是口服施用形式(例如,粉剂、明胶胶囊、片剂、大丸剂),其以使得能够通过胃并在肠中释放细菌的胃保护型形式。

依照一个实施方案,所述组合物是胃保护型固体组合物,例如片剂、大丸剂、明胶胶囊、胶囊,其使得能够通过胃并在肠中释放细菌。根据一种方式,所述形式,尤其是颗粒剂,可用于在水介质中的给食之中,尤其是用于鱼类。

依照一个实施方案,所述组合物是液体或者待溶解在液体中或者待悬浮在液体例如饮用水中,在这种情况下,所述组合物最初是固体的,例如粉剂,颗粒剂,可溶解的片剂,例如泡腾片,或在液体中潮解的片剂。

依照一个实施方案,所述组合物是固体的,例如粉剂、颗粒剂、片剂、大丸剂,并且旨在或适合于与食物相混合。

依照一个实施方案,所述组合物是固体的,其以随时可用而无需与食物相混合(但是尽管如此,可以与食物相混合)的形式,例如可口的片剂或大丸剂。

本发明的目标还在于用于进行饲养的食物,其包含至少一种根据本发明的细菌或组合物。作为例子,所述食物包含与至少碳水化合物、蛋白质和脂质相混合的根据本发明的组合物。所述食物可以以液体、乳状液或固体的形式存在,并且在固体形式中,作为例子,可以提及颗粒剂、大丸剂、薄片、添加有所述组合物的青贮饲料、添加有所述组合物的草料。所述食物尤其可以是完全食物、功能性食物、代乳食物、配方食物、浓缩补充剂。

本发明的目标还在于用于促进养殖型动物的幼年生长的益生性处理方法,其包括向根据本发明的动物施用根据本发明的组合物。优选地,所述组合物通过口服途径进行施用。优选地,所述组合物在从断奶至性成熟的时间段内施用数次。

本发明的目标还在于整合了该益生性处理的动物饲养方法。

该益生性处理或饲养方法包括向年幼动物(优选地断奶后的)施用足够量的上面所描述的组合物。所述方法将会包括以一次或几次施用根据本发明的组合物的剂量,所述施用可以在受试者的生长期(直至性成熟)内分期进行。所述剂量可以是分成几部分的以有助于施用。施用频率尤其在每天一剂(单一的或分成几部分的)和每月一剂之间。典型地,施用频率将会在每天一剂(单一的或分成几部分的)和每周一剂之间,甚至每2、3、4、5或6天一剂。每个剂量(单一的或分成几部分的)尤其相当于几克至几十克的组合物。

所述方法尤其包括施用这样的组合物,其包含大约105至大约1012,尤其是大约106至大约1012,优选地大约108至大约1012个形成菌落的细菌细胞(cfu)/克组合物这样的量(细菌细胞涉及按照本发明的单一细菌菌株,或者至少两种按照本发明的细菌的混合物)。

所述方法优选地包括施用包含以活的形式的乳酸细菌的组合物。

所述组合物的形式可以是固体的或液体的,并且可以采取上面给出的形式中的任一种。

在一个实施方案中,根据本发明的组合物,尤其是在所述处理方法中所使用的组合物,包含至少一种不在所处理的物种中天然地存在的细菌菌株。在该设定下,当存在几种不同的细菌时,它们之一不是天然地存在的就足够了。另一方面,该细菌经证明在所述动物物种中具有肠道向性,并且符合根据本发明的活性菌株的定义。

本发明还涉及通过使用无菌小鼠模型来筛选能够在常规营养下促进幼年生长的细菌的方法。

所述方法包括下列步骤:

-拥有来自源于相同小鼠株系(典型地,balb/c小鼠)的两个品系的幼年鼠,所述两个品系即无菌亲本小鼠品系和单菌亲本小鼠品系(与待测试细菌相关联的);

-将它们以包含大约40%碳水化合物、大约25%蛋白质和大约9%脂质的常规营养饮食制度进行饲养;

-在合适的饲养期结束时,测定每个组的一个或多个参数的值的平均值,这些参数与生长(例如,体重增加,线性生长,例如通过测量个体的大小或其股骨的长度)相关和/或与血清igf-1水平相关;

-如果单菌组的所测量的参数的平均值以下述程度大于无菌组的所测量的参数的平均值,那么认为所述乳酸细菌菌株对于所述测试作出阳性反应:在tukey统计学检验中具有小于0.05的p值。

优选地,所述筛选方法重新采取上面所描述的关于线性生长或igf-1血清水平的小鼠测试的特征。

所述筛选方法还可以是与参照菌株(例如菌株wjl)的比较测试,并且该测试在这种情况下重新采取上面对于小鼠测试所描述的特征。

所描述的各种不同测试完全可以用各种不同的营养饮食制度来进行,在它适合于小鼠的适当营养的限度内。

现在,将借助于作为非限制性实例而选取的本发明的实施方案来更详细地描述本发明。

研究了在三个来自相同无菌小鼠集群的个体组中的雄性后代(最少8只个体):第一组由无菌幼年鼠组成(无菌(germfree;gf)组),第二组由来自与植物乳杆菌wjl这一菌株单相关联的亲本的幼年鼠组成(wjl组),和第三组由来自与植物乳杆菌nizo2877这一菌株单相关联的亲本的幼年鼠组成(nizo2877组)。将亲本和幼年鼠用常规营养培养基(40%碳水化合物、25.1%蛋白质、9.1%脂质和3646kcal/kg)进行饲养直至幼年鼠断奶(出生后第21天),然后将经断奶的幼年鼠用常规营养培养基进行饲养直至第56天。

研究了阐明这些个体的幼年生长的四个参数:主要参数为在断奶后35天的时间段(从第21天至第56天)期间的线性生长或大小增加(口鼻部至尾巴基部的测量),然后为三个次要参数,其为(1)在断奶后35天的时间段(从第21天至第56天)期间的体重增加;(2)在第56天,代表了所测试的群体的一批个体(至少8只个体)的股骨长度;和最后,(4)在第56天,在至少8只个体中生长因子igf-1的血清水平。

通过使用t检验进行了统计学分析,其中使用软件graphpad(graphpadprism5.04,sandiego,usa);p值<0.05被认为是显著的。

(1)体重和大小增加:

在第21天和第56天,通过短暂暴露于异氟烷来使小鼠麻醉,以使得能够测量小鼠的体重和大小(从口鼻部至尾巴基部)。

表1:以“g/天”表示的体重增加,第21天-第56天

关于非成对系列的t-检验

lp=植物乳杆菌

表2:以“cm/天”表示的大小增加,第21天-第56天

关于非成对系列的t-检验

(2)股骨长度:

在第56天处死小鼠,取出无肌肉的股骨,并用游标卡尺测量其长度。

表3:在第56天,以mm表示的股骨长度

关于非成对系列的t-检验

(3)在血清中igf-1的滴度:

在从在第56天处死的小鼠的血液开始获得的血清上测量igf-1的滴度。所述测量在经稀释的(1:25)血清上进行,其中使用试剂盒elisaready-set-go(ebioscience,usa),依照制造商的使用说明书。

表4:在第56天,以ng/ml表示的igf-1水平

关于非成对系列的t-检验

结果阐明了植物乳杆菌wjl这一菌株于对于线性生长的“明显的”效应(相对于无菌条件而言更高的平均值和p值<0.05)和植物乳杆菌nizo2877这一菌株的“中间的”效应(相对于无菌条件而言更高的平均值和p值<0.05,和相对于植物乳杆菌wjl条件而言更低的平均值和p值<0.05)。植物乳杆菌wjl这一菌株的效应用次要参数得到了证实,所述次要参数为相对于无菌条件而言的体重增加、igf-1水平和股骨长度(更高的平均值和p值<0.05)。然而,植物乳杆菌nizo2877这一菌株的中间的效应未在该研究的次要参数上得到证实。因此,所述次要参数不可以用于鉴定所测试的菌株的定量效应,只有所述主要参数(线性生长)允许该鉴定。

所有这些结果通过科学证据证明了某些乳杆菌属菌株的促进幼年生长的效应,并且例示了某些菌株对于线性生长的“明显的”效应或“中等的”效应。“强的”效应将会用某些菌株来获得,该强的效应相应于相对于植物乳杆菌wjl条件而言更高的线性生长平均值和p值<0.05。

在此所引用的所有公共文献通过提及而合并入本文。同样地,技术人员将能够参考这些各种各样的文献和在此已提及的商业菌株保藏物。

当前第1页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1