本发明涉及食品领域，具体涉及一种细胞修复口服液及其制备方法。
背景技术：
：百香果提取物具有抗焦虑和治疗失眠、可减缓食物通过消化道的速度，从而促进消化的作用。天然酵素可以促进食物的消化，调节微生物的可能液质，自然平衡原有的丰富微量成分，能促进细胞的新陈代谢，增强体力，促使遭受破坏的细胞新生，有助于细胞的修复。燕窝为雨燕科apodidae金丝燕属collocalia的几种鸟类，吞食海中小鱼或其他蚕螺海藻等小生物消化后，分泌出的胃液与其绒羽混合凝结于悬崖峭壁上，而筑成的巢窝。燕窝是与人参、鹿茸齐名的名贵补药之一。知母、黄柏具有清热、泻火、解毒之功效。燕窝中含有大量粘蛋白、糖蛋白、唾液酸、微量元素、表皮生长因子等多种生物活性成分，具有抗病毒、促细胞分裂、提高免疫力作用。一方面传统食用方法是炖煮或加工成燕窝罐头，燕窝基本保持原有大分子蛋白结构，分子量在几十万道尔顿以上，存在水不溶性的特点，使得人体吸收利用率低，现有技术酶解燕窝的肽段主要集中在1000以上；另一方面，特别是小分子具有以下特点:(1)不需消化，直接吸收。(2)吸收时不需消耗人体能量。(3)不增加人体胃肠功能负担。(4)具有优先吸收特点。(5)吸收快速，比人体吸收大分子蛋白质快129600秒钟，较人体氨基酸快64800秒。(6)以自身能量推动吸收。(7)100%被吸收。(8)在人体吸收功能降低时，人体能够被动吸收。(9)具有载体作用，可将人体其它营养载在基体上，输送到人体细胞组织。(10)具有极强的活性和生理功能多样性。现有细胞修复口服液吸收、效果均不够理想，提供一种易于吸收、效果好的细胞修复口服液亟待解决。技术实现要素：为解决现有细胞修复口服液吸收和效果不够理想的技术问题，提供一种细胞修复口服液，包含燕窝萃取胶原蛋白，分子量主要集中在180~500，易于吸收，与百香果提取物、天然酵素、知母、黄柏的联合使用，加强食物的消化吸收利用，提高免疫力，达到提高细胞修复的效果。为实现上述技术问题，通过如下技术方案予以实现：一种细胞修复口服液，包含如下重量份原料：燕窝萃取胶原蛋白10~30份、天然酵素1~5份、纯化水50~80份、矫味剂1~10份。优选的，所述细胞修复口服液还包含如下重量份的原料：知母提取物2~10份、黄柏提取物2~5份、百香果提取物20~50份。优选的，所述知母提取物的制备方法为：1kg知母药材，加入8~12kg水，50~100℃提取4~8h，提取液过滤，滤液浓缩后得到200~300g浸膏；所述黄柏提取物的制备方法为：1kg的黄柏药材，加入8~12kg水，60~100℃提取4~8h，提取液过滤，滤液浓缩后得到200~300g浸膏；所述百香果提取物的制备方法为：将1kg百香果的果肉打碎，过滤，滤液浓缩后得到100~200g浸膏。优选的，所述燕窝萃取胶原蛋白分子量为500~180的高斯分布峰面积百分比为燕窝萃取胶原蛋白分子量1000-500的高斯分布峰面积百分比的3倍，是分子量为5000~1000的多肽的高斯分布峰面积百分比的7倍。优选的，所述的燕窝萃取胶原蛋白的分子量具有如下高斯分布：分子量范围峰面积百分比（%，λ=220nm）>10000310000~500055000~100081000~50019500~18057<1808优选的，所述燕窝萃取胶原蛋白的制备方法为：步骤一、清洗：将新鲜燕窝清洗干净，与去离子水按1:20~1:50混合，浸泡至燕窝吸水完全；步骤二、变性：将浸泡液升温至90~95℃，保持10~15分钟，使蛋白质变性；步骤三、酶解：把浸泡液降温至30~45℃，按燕窝干重的0.05%~0.5%重量加入重组蛋白酶，调节ph至5~6.5，在37~45℃保温4~6小时，ph为自然ph，不需控制步骤四、灭活：80~90℃保温2~4小时；步骤五、过滤得澄清微黄色液体；步骤六、浓缩，进行喷雾干燥或冷冻干燥得到淡黄色粉末。优选的，所述重组蛋白酶的完整基因的dna序列为：acgaatgatgttggggggggcggatacatcgataaagctcctagtcaaagaaaaattgttagcgttacattaaccgctcaagtacacaggcatattgctcattgtcttgttgataatatatcagcaagagttggtagtgattatgatatagcaatccgaacttacgtggctattttgacattctcacaagatgacggtgtcaacactggcggtgatgcagttaattggggagctacatcggaatcctcaaaaacattgttggttcctactctatccgctgttagcggtggtccgggaaaagatgcttgccagggagactctaataatgtacaattgggagttgtcattttttgggcttgtgccatgtacaagtattattttttactattgaaagatggtagctgtaagaaaagttacttgctttgtgggggataccaagcgttagaaaagggtaaggagtattaccaatccatcatcagcaaagataaaggcactatacacggtaaagtgacgaataactattcgaccaaatcgatgcccaattataattctacactaccggtacctgcgaaaatcgtaagtgaaaacaatggggctaagacaacattatttgtcaccggtgacagaatgagtgtgtcatgcaaaaaagtagcagaaaacttttctctttgtgcaggcgtctctcaaggatcatttggaagtggctgtgcccgtcctggaaaccctggtgtatatgcaaatgtcacagcactccgtggttggatacgaaagactgcaggagtttta优选的，所述矫味剂为食用糖或木糖醇。优选的，一种细胞修复口服液的制备方法，其特征在于：（1）按重量份将燕窝萃取胶原蛋白、百天然酵素、矫味剂、知母提取物、黄柏提取物、百香果提取物、水混合均匀；（2）将步骤（1）所得混合物液体过滤，封装，热处理灭菌即得。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述过滤采用筛网为5~10目。有益效果：本发明所用的燕窝萃取胶原蛋白主要分子量集中在180~500，由于其为二肽到三肽，可以直接被胃肠道吸收，不需要分解，吸收率高达99%，具有非常高的利用率。燕窝萃取胶原蛋白与百香果提取物、天然酵素、知母、黄柏的联合使用，加强食物的消化吸收利用，提高免疫力，有助于细胞修复能力的提高。具体实施例实施例1重组蛋白酶的制备一、工程菌的构建重组蛋白酶的完整基因的dna序列为：acgaatgatgttggggggggcggatacatcgataaagctcctagtcaaagaaaaattgttagcgttacattaaccgctcaagtacacaggcatattgctcattgtcttgttgataatatatcagcaagagttggtagtgattatgatatagcaatccgaacttacgtggctattttgacattctcacaagatgacggtgtcaacactggcggtgatgcagttaattggggagctacatcggaatcctcaaaaacattgttggttcctactctatccgctgttagcggtggtccgggaaaagatgcttgccagggagactctaataatgtacaattgggagttgtcattttttgggcttgtgccatgtacaagtattattttttactattgaaagatggtagctgtaagaaaagttacttgctttgtgggggataccaagcgttagaaaagggtaaggagtattaccaatccatcatcagcaaagataaaggcactatacacggtaaagtgacgaataactattcgaccaaatcgatgcccaattataattctacactaccggtacctgcgaaaatcgtaagtgaaaacaatggggctaagacaacattatttgtcaccggtgacagaatgagtgtgtcatgcaaaaaagtagcagaaaacttttctctttgtgcaggcgtctctcaaggatcatttggaagtggctgtgcccgtcctggaaaccctggtgtatatgcaaatgtcacagcactccgtggttggatacgaaagactgcaggagtttta。用常规的分子生物学方法构建含重组蛋白酶基因到大肠杆菌bl21(de3)中，构建重组蛋白酶工程菌。二、发酵：重组工程菌发酵，接种重组工程菌阳性克隆200μl到20ml的lb培养基中，于37℃下摇床振荡培养过夜，按5‰接种量接过夜菌于500ml的lb培养基中，37℃下摇床振荡培养到对数期，接种到装有6l培养基的发酵罐中，初始参数为：发酵温度37℃，搅拌速度350rpm，通气量20l/min，ph为6.8，不断提高搅拌转速与通气量(转速最大1000rpm，通气量最大35l/min)以维持溶氧始终在30％以上，培养基配方如下：发酵培养基：葡萄糖6g/l，酵母浸出粉25g/l，十二水合磷酸氢二钠10g/l，磷酸二氢钾4g/l，硫酸铵6g/l，七水硫酸镁1.13g/l，二水氯化钙0.073g/l，补料培养基：酵母浸出粉25g/l，葡萄糖35g/l，50%氨水和30%磷酸用于发酵过程中ph调控。当培养基中养分耗尽，溶氧迅速上升时开始补料，通过控制泵的转速合理控制补料速度，同时在补料速度、转速、通气三者的合理控制下，保证控制溶氧在30%以上。补料6h后，降温至23℃，调节ph至7.5，加入终浓度为0.1mmol/l的iptg进行有氧诱导(即保证溶氧不低于20%)8h后出罐。出罐后离心得菌体湿重160g/l，发酵过程中菌体生长曲线及相关取样点电泳，表达量达全菌蛋白的60%以上。发酵结束离心收集的菌体按重量体积比1：10加入破碎缓冲液(25mmol/ltris-hcl+5mmol/ledta)，高压均质机800bar破碎后收集沉淀和上清电泳，包涵体纯度重组蛋白酶原超过85%。三、重组蛋白酶原的纯化发酵结束后，离心收集菌体，按重量体积比1：10加入破碎缓冲液(25mmol/ltis-hcl+5mmol/ledta，ph7.5)，高压均质机800bar条件下破碎两遍，离心收集包涵体沉淀，包涵体湿重为30g/l发酵液。将沉淀按重量体积比1：15加入洗涤缓冲液(2mol/l尿素+2.0%triton)，室温磁力搅拌1小时，离心收集的沉淀用洗涤缓冲液洗涤两次。再用包涵体溶解缓冲液(8mol/l尿素+10mmol/ledta+25mmol/ltris-hcl，ph7.5)按重量体积比1：10溶解过夜。溶解后的包涵体经离心、超滤去除杂质后，稀释到蛋白浓度0.2mg/ml，在复性缓冲液(0.2mol/l尿素+10mmol/lcacl2+50mmol/ltris-hcl，gsh：gssg＝1mmol/l：0.5mmol/l，ph10)中，4℃复性过夜，复性后的重组蛋白原经蛋白激酶(1：150)在室温下酶解6小时后即可得到具有活性的粗酶液。粗酶液经疏水层析，条件是：疏水层析条件：缓冲液a-50mmtris-hcl+1.5m(nh4)2so4，ph8.0；缓冲液b-50mmtris-hcl，ph8.0；0-100%b线性梯度50cv；离子交换，条件是：缓冲液a-50mmtris-hcl，ph8.0；缓冲液b-20mmtris-hcl+2mnacl，ph8.0；0-100%b线性梯度20cv；即可得到具有高纯度和活性蛋白酶产品。纯化的重组蛋白酶经电泳分析，纯度达到95%以上。实施例2一种细胞修复口服液的制备一种细胞修复口服液，包含如下重量份原料：燕窝萃取胶原蛋白10份、百香果提取物20份、天然酵素1份、纯化水50份、知母提取物2份、黄柏提取物2份、矫味剂1份。所述知母提取物的制备方法为：1kg知母药材，加入8kg水，50℃提取4h，提取液过滤，滤液浓缩后得到200g浸膏；所述黄柏提取物的制备方法为：1kg的黄柏药材，加入8kg水，60℃提取4h，提取液过滤，滤液浓缩后得到200g浸膏；所述百香果提取物的制备方法为：将1kg百香果的果肉打碎，过滤，滤液浓缩后得到100g浸膏。所述燕窝萃取胶原蛋白分子量为500~180的高斯分布峰面积百分比为燕窝萃取胶原蛋白分子量1000-500的高斯分布峰面积百分比的2~3倍，是分子量为5000~1000的多肽的高斯分布峰面积百分比的5~7倍。所述燕窝萃取胶原蛋白的制备方法为：步骤一、清洗：将新鲜燕窝清洗干净，与去离子水按1:20混合，浸泡至燕窝吸水完全；步骤二、变性：将浸泡液升温至90℃，保持10分钟，使蛋白质变性；步骤三、酶解：把浸泡液降温至30℃，按燕窝干重的0.05%重量加入重组蛋白酶，调节ph至5，在37℃保温4小时，ph为自然ph，不需控制；步骤四、灭活：80℃保温2小时；步骤五、过滤得澄清微黄色液体;步骤六、浓缩，进行喷雾干燥或冷冻干燥得到淡黄色粉末。所述重组蛋白酶同实施例1中重组蛋白酶相同。如上所述细胞修复口服液的制备方法，包含如下步骤：（1）按重量份将燕窝萃取胶原蛋白、百天然酵素、矫味剂、知母提取物、黄柏提取物、百香果提取物、水混合均匀；（2）将步骤（1）所得混合物液体过滤，封装，热处理灭菌即得。实施例3一种细胞修复口服液的制备一种细胞修复口服液，包含如下重量份原料：燕窝萃取胶原蛋白20份、百香果提取液30份、天然酵素3份、纯化水60份、知母8份、黄柏3份、木糖醇3份。所述知母提取物的制备方法为：1.5kg知母药材，加入10kg水，80℃提取6h，提取液过滤，滤液浓缩后得到250g浸膏；所述黄柏提取物的制备方法为：1.5kg的黄柏药材，加入10kg水，90℃提取6h，提取液过滤，滤液浓缩后得到250g浸膏；所述百香果提取物的制备方法为：将1.5kg百香果的果肉打碎，过滤，滤液浓缩后得到150g浸膏。所述燕窝萃取胶原蛋白分子量高斯分布峰面积百分比如下：分子量范围峰面积百分比（%，λ=220nm）>10000310000~500055000~100081000~50019500~18057<1808所述燕窝萃取胶原蛋白的制备方法为：步骤一、清洗：将新鲜燕窝清洗干净，与去离子水按1:40混合，浸泡至燕窝吸水完全；步骤二、变性：将浸泡液升温至90℃，保持10分钟，使蛋白质变性；步骤三、酶解：把浸泡液降温至40℃，按燕窝干重的0.2%重量加入重组蛋白酶，调节ph至6，在40℃保温5小时，ph为自然ph，不需控制步骤四、灭活：85℃保温3小时；步骤五、过滤得澄清微黄色液体;步骤六、浓缩，进行喷雾干燥或冷冻干燥得到淡黄色粉末。所述重组蛋白酶与实施例1相同。如上所述细胞修复口服液的制备方法，包含如下制备步骤：（1）按重量份将燕窝萃取胶原蛋白、百天然酵素、矫味剂、知母提取物、黄柏提取物、百香果提取物、水混合均匀；（2）将步骤（1）所得混合物液体过滤，封装，热处理灭菌即得。所述过滤采用筛网为10目。实施例4一种细胞修复口服液的制备一种细胞修复口服液，包含如下重量份原料：燕窝萃取胶原蛋白30份、百香果提取液50份、天然酵素5份、纯化水80份、知母10份、黄柏5份、食用糖10份。所述知母提取物的制备方法为：2kg知母药材，加入12kg水，100℃提取8h，提取液过滤，滤液浓缩后得到300g浸膏；所述黄柏提取物的制备方法为：2kg的黄柏药材，加入12kg水，100℃提取8h，提取液过滤，滤液浓缩后得到300g浸膏；所述百香果提取物的制备方法为：将2kg百香果的果肉打碎，过滤，滤液浓缩后得到200g浸膏。所述燕窝萃取胶原蛋白分子量为500~180的高斯分布峰面积百分比为燕窝萃取胶原蛋白分子量1000-500的高斯分布峰面积百分比的3倍，是分子量为5000~1000的多肽的高斯分布峰面积百分比的8倍。优选的，所述燕窝萃取胶原蛋白的制备方法为：步骤一、清洗：将新鲜燕窝清洗干净，与去离子水按1:50混合，浸泡至燕窝吸水完全；步骤二、变性：将浸泡液升温至95℃，保持15分钟，使蛋白质变性；步骤三、酶解：把浸泡液降温至45℃，按燕窝干重的0.5%重量加入重组蛋白酶，调节ph至6.5，在45℃保温6小时，ph为自然ph，不需控制步骤四、灭活90℃保温2~4小时；步骤五、过滤得澄清微黄色液体；步骤六、浓缩，进行喷雾干燥或冷冻干燥得到淡黄色粉末。所述重组蛋白酶与实施例1相同一种细胞修复口服液的制备方法，包含如下制备步骤：（1）按重量份将燕窝萃取胶原蛋白、百天然酵素、矫味剂、知母提取物、黄柏提取物、百香果提取物、水混合均匀；（2）将步骤（1）所得混合物液体过滤，封装，热处理灭菌即得。本发明的细胞修复口服液使用方法及效果如下:1.正常人美容保健者:每天服用2支(每支50毫升)，早晚各服用1支。大量补充胶原蛋白，使人皮肤富有弹性，使用6-12个月较佳。2.有心肺血管疾病的患者，每天服用4支，早晚各服用2支，服用3个月后，症状明显减轻，服用半年后，心肺功能明显改善。3.血液病患者(各种血液病患者):每天服用3支，早中晚各服用1支，服用后症状明显减轻，临床症状及各项化验指标在一年内逐步正常，脱离服用西药治疗。4.特殊严重肺结核、肺气肿患者:每天服用6支，早中晚各服用2支，对肺病患者，1-2年内基本治愈。5.皮肤病(牛皮癣病人)及过敏症病人:每天服用3支，早2支，晚1支。1-2年基本治愈，近期观察没有复发。6.皮肤护理及年轻人:每天服用1支，常年服用可改善皮肤，保护青春，使青春常驻。30岁以内年轻人月民用，在短时间内2个月可以明显改善皮肤，使体内全面旺盛，达到外病内治的目的。临床报告:1.美容:选女50人，男50人服用6个月后观察，皮肤明显改善者90人，有效者100人，有效率100%。2.心肺血管疾病:选100人服用，服用半年后，明显改善80人，有效98人，无效2人，有效率98%。3.血液病:选100人服用半年后，各项指标恢复正常的80人，有效95人，无效5人，有效率95%。4.肺结核、肺气肿患者:100人服用半年后，明显改善90人，有效97人，无效3人，有效率97%。5.皮肤病:100人服用1年后，明显改善93人，有效100人，无效0人，有效率100%。尽管参照实施例对所公开的涉及一种细胞修复口服液进行了特别描述，以上描述的实施例是说明性的而不是限制性的，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，所有的变化和修改都在本发明的范围之内。sequencelisting<110>深圳市唯姿贸易有限公司<120>重组蛋白酶<130><160>1<170>patentinversion3.5<210>1<211>786<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>1acgaatgatgttggggggggcggatacatcgataaagctcctagtcaaagaaaaattgtt60agcgttacattaaccgctcaagtacacaggcatattgctcattgtcttgttgataatata120tcagcaagagttggtagtgattatgatatagcaatccgaacttacgtggctattttgaca180ttctcacaagatgacggtgtcaacactggcggtgatgcagttaattggggagctacatcg240gaatcctcaaaaacattgttggttcctactctatccgctgttagcggtggtccgggaaaa300gatgcttgccagggagactctaataatgtacaattgggagttgtcattttttgggcttgt360gccatgtacaagtattattttttactattgaaagatggtagctgtaagaaaagttacttg420ctttgtgggggataccaagcgttagaaaagggtaaggagtattaccaatccatcatcagc480aaagataaaggcactatacacggtaaagtgacgaataactattcgaccaaatcgatgccc540aattataattctacactaccggtacctgcgaaaatcgtaagtgaaaacaatggggctaag600acaacattatttgtcaccggtgacagaatgagtgtgtcatgcaaaaaagtagcagaaaac660ttttctctttgtgcaggcgtctctcaaggatcatttggaagtggctgtgcccgtcctgga720aaccctggtgtatatgcaaatgtcacagcactccgtggttggatacgaaagactgcagga780gtttta786序列表<110>深圳市唯姿贸易有限公司<120>一种细胞修复口服液<160>1<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>786<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>1acgaatgatgttggggggggcggatacatcgataaagctcctagtcaaagaaaaattgtt60agcgttacattaaccgctcaagtacacaggcatattgctcattgtcttgttgataatata120tcagcaagagttggtagtgattatgatatagcaatccgaacttacgtggctattttgaca180ttctcacaagatgacggtgtcaacactggcggtgatgcagttaattggggagctacatcg240gaatcctcaaaaacattgttggttcctactctatccgctgttagcggtggtccgggaaaa300gatgcttgccagggagactctaataatgtacaattgggagttgtcattttttgggcttgt360gccatgtacaagtattattttttactattgaaagatggtagctgtaagaaaagttacttg420ctttgtgggggataccaagcgttagaaaagggtaaggagtattaccaatccatcatcagc480aaagataaaggcactatacacggtaaagtgacgaataactattcgaccaaatcgatgccc540aattataattctacactaccggtacctgcgaaaatcgtaagtgaaaacaatggggctaag600acaacattatttgtcaccggtgacagaatgagtgtgtcatgcaaaaaagtagcagaaaac660ttttctctttgtgcaggcgtctctcaaggatcatttggaagtggctgtgcccgtcctgga720aaccctggtgtatatgcaaatgtcacagcactccgtggttggatacgaaagactgcagga780gtttta786当前第1页12