本发明属于酵素生产技术领域，具体涉及一种蔓越莓益生菌酵素及其制备方法。
背景技术
酵素指通过微生物对水果蔬菜发酵，提取的一种含生物活性成分的液体。上述生物活性成分包括酶但是不限于酶，包括活性抗氧化成分、生物质化素等，来自发酵参与菌和用于发酵的食材。
合理制作的酵素，所萃取的植物活性物质都是来自于食材，且发酵参与菌更是人体微生态系统的组成部分。因此，酵素的副作用几乎为零。强大的功效，极小的副作用，近年来一直呈爆炸性增长趋势。
蔓越莓是一种天然抗菌保健水果，有多种保健功效，但是蔓越莓的存储期短，一旦市场出现产能过剩，市场消化不掉的蔓越莓就难以保存被废弃掉。蔓越莓现有的进一步开发有蔓越莓酵素饮料(cn107410802a)、蔓越莓果酒(cn103484309a)、蔓越莓果醋饮料(cn103462136a)，但这些产品对原料中营养物质成分的提取不够充分。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种蔓越莓益生菌酵素及其制备方法，解决了传统蔓越莓应用途径窄的问题。
本发明所采用的技术方案为：
一种蔓越莓益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将蔓越莓600-800kg、橘子200-300kg、柠檬100-150kg、赤砂糖50kg加入发酵设备中；
s2向发酵设备中继续加入酵母菌5-10g和发酵乳杆菌1-5g进行初发酵，发酵时间为5-7个月；初发酵结束后加入青春双歧杆菌1-5g、植物乳杆菌1-5g、瑞士乳杆菌1-5g、嗜热链球菌1-5g进行第二次发酵，发酵时间7-9个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌5-10g继续第三次发酵4-6个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在3.0-3.9之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到蔓越莓益生菌酵素原液。
所述s2中初发酵、第二次发酵和第三次发酵时，隔绝空气进行厌氧发酵。
发酵设备为发酵桶。
采用以上制备方法制得的蔓越莓益生菌酵素。
蔓越莓益生菌酵素原液进行灌装得到终产品。
灌装条件：控制室内洁净度达到10万级规定要求，车间工人进入车间前必须洗手、更衣、消毒，严格按灌装机及旋盖机的操作规程进行操作，在灌装进行中随时检查灌装量，封口质量等环节，确保产品符合标准技术要求。在灌装前后将设备及管道进行彻底清洗和消毒；灌装为瓶装，瓶及瓶盖清洗：瓶子先用纯净水翻转冲洗，再用洁净压缩空气吹干，盖子用消毒柜进行消毒处理，保证达到无菌要求。
优选以下技术方案：在s2中，专用发酵桶为850个，每个发酵桶容量1200升(每次加入原料总量1000kg)，电子称2台，每发酵桶装料量1吨，发酵温度为常温，车间密封，保持洁净，常温发酵，发酵时间为24个月。
在s5中，静置纯化罐为50个，每个静置纯化罐容量为30吨，使用材质为食品级塑料材质。
灌装时，灌装机的型号为td-8，灌装机的数量为2套；旋盖机的型号td-sp1，旋盖机的数量为2套，灌装速度为2000瓶/小时，瓶器为30ml玻璃瓶。
瓶及瓶盖清洗时，理瓶器2台；全自动翻转冲瓶机2台，全自动翻转冲瓶机的型号为cp-15；消毒柜1台，消毒柜的型号为ztp-390。
与现有技术相比，本发明的有益技术效果是：
本发明以蔓越莓、橘子、柠檬为主要原料，原料的营养成分在科学合理的搭配上更加丰富，在益生菌的发酵作用下，同时严格控制益生菌的种类、用量以及发酵时长，保证原料的发酵更加充分，发酵过程分为三个阶段且根据不同阶段的特性分别加入不同的菌种，使发酵具有层次更加合理；特别是二次发酵阶段，自然发酵，不再增加糖源，这样可以消耗原发酵液中剩余糖分，充分消耗糖类，最终使得原料中的营养物质、活性物质、抗氧化物质能够完全释放出来，最终得到一种美容养颜、降血压功效的蔓越莓益生菌酵素，增加了蔓越莓益生菌酵素营养价值。
本发明制得的蔓越莓益生菌酵素不含任何食品添加剂，安全健康，无毒副作用，可放心享用，适宜于各类人群；解决了传统蔓越莓应用途径窄、产品形态单一问题。
具体实施方式
下面结合实施例来说明本发明的具体实施方式，但以下实施例只是用来详细说明本发明，并不以任何方式限制本发明的范围。
以下实施例中原料加入发酵桶之前经过清洗、吹干、紫外消毒、粉碎。
实施例1：一种蔓越莓益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将蔓越莓650kg、橘子200kg、柠檬100kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌10g和发酵乳杆菌5g进行初发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间为6个月；初发酵结束后加入青春双歧杆菌5g、植物乳杆菌5g、瑞士乳杆菌5g、嗜热链球菌5g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间8个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌10g继续第三次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间5个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在3.0-3.9之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到蔓越莓益生菌酵素原液。
实施例2：一种蔓越莓益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将蔓越莓800kg、橘子200kg、柠檬100kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌5g和发酵乳杆菌5g进行初发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间为5个月；初发酵结束后加入青春双歧杆菌1g、植物乳杆菌5g、瑞士乳杆菌1g、嗜热链球菌5g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间9个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌5g继续第三次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间4个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在3.0-3.9之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到蔓越莓益生菌酵素原液。
实施例3：一种蔓越莓益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将蔓越莓600kg、橘子300kg、柠檬150kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌10g和发酵乳杆菌1g进行初发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间为7个月；初发酵结束后加入青春双歧杆菌5g、植物乳杆菌1g、瑞士乳杆菌5g、嗜热链球菌1g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间7个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌8g继续第三次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间6个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在3.0-3.9之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到蔓越莓益生菌酵素原液。
实施例4：一种蔓越莓益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将蔓越莓650kg、橘子250kg、柠檬120kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌8g和发酵乳杆菌3g进行初发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间为6个月；初发酵结束后加入青春双歧杆菌3g、植物乳杆菌3g、瑞士乳杆菌3g、嗜热链球菌3g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间8个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌8g继续第三次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间5个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在3.0-3.9之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到蔓越莓益生菌酵素原液。
实施例1-4得到蔓越莓益生菌酵素原液后，需按国标gb/t31121检测微生物指标、重金属指标达标，其他指标达到行业标准t/cbfia08003-2016，然后蔓越莓益生菌酵素原液经专用管道输送至灌装车间，灌装得到蔓越莓益生菌酵素成品。
实验材料
实验动物：spf级sd大鼠，体重150～180g，雄性，共50只。实验温度：23～25℃，相对湿度：65％～70％。
剂量分组
将实验大鼠分为正常对照组、高血压模型对照组、实验组1-3组。
主要仪器与试剂
rbp-1型大鼠血压计(中日友好医院临床医学研究所生产)；u型银夹(内径0.2mm)；3％戊巴比妥钠溶液。
数据处理
采用spss13.0软件进行统计分析。
2方法与结果
大鼠适应性饲养3d后开始实验。分为正常对照组10只，高血压模型组40只。高血压模型组经手术肾外包扎型高血压模型血压升高机制：肾外异物包扎，可致肾周围炎，在肾外形成一层纤维素性鞘膜，压迫肾实质造成肾组织缺血，使肾素形成增加，血压上升。大鼠麻醉后，呈俯卧位固定，背部下方垫一高约2～3cm的沙袋，剪去手术视野的毛，用0.05％洗必太酒精消毒皮肤，从第10胸椎到第3腰椎处沿脊椎中线切开皮肤，在左侧季肋下1.5～2cm和距脊椎1cm处用小血管钳分开肌肉，用两指从腹下部将肾脏自创口中挤出，小心地将肾脏与周围组织剥离，将双层乳胶膜剪成“x”形，绕肾门将肾脏交叉包扎，然后在相对侧切开，取出右肾，分离后切除，分别缝合肌肉和皮肤创口。皮下注射1～2万单位青霉素g。手术所用器械必须高压消毒，只要在75％乙醇中浸泡30min，临用时用煮沸过的生理盐水冲洗一下，用毕后仍浸入乙醇中。手术后加饮1％氯化钠溶液作为促进因素。人造高血压大鼠模型，造模后各剂量组和模型对照组血压与造模前相比，平均血压上升4kpa以上，说明模型建立成功，可用于试验。根据血压水平，将大鼠分为实验组1-3和高血压模型组随机分成四组，每组10只大鼠。实验组1-3给予实施例1-3制得的蔓越莓益生菌酵素样品按10ml/kgbw的容量灌胃饲养，正常对照组和高血压模型对照组用生理盐水灌胃饲养，连续灌胃饲养30d，第30d开始检测血压与心率值。结果见表1
表1各实验组对动物血压及心率的影响
注：*与模型对照组相比，经方差分析，p<0.05
由表1可知，试验末各剂量组血压均显著低于低于模型对照组p<0.05，有统计学意义，而给受试样前、后各组心率差异均无统计学意义。
实验表明，实施例1-3制得的蔓越莓益生菌酵素对实验大鼠具有较好的降血压作用，且以实施例1制得的蔓越莓益生菌酵素降血压效果最为显著，但对心率并无显著性影响。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。