本发明涉及一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，属于饲料生产领域。
背景技术：
伴随着畜牧业的集约化发展，肉鸡养殖过程中疫情与疾病也越来越复杂，药物和抗生素饲料添加剂的使用量也日渐增加。抗生素尤其是促生长类抗生素在养殖生产过程中因其促生长、提高饲料报酬，所以给养殖户带来了丰厚的利润。早在1946年moore等学者就报道了肉鸡饲料中添加抗生素促生长的效应。此后，越来越多的研究数据表明抗生素对不同畜禽动物都有促生长和提高饲料报酬的作用2。美国食品和药物管理局(fda)在20世纪50年代将抗生素列入饲料添加剂目录后，抗生素在畜禽养殖业中逐渐风靡全球，应用越来越普遍，规模越来越大。全世界大多数国家的养殖业在一段时间里都是依赖于抗生素来促生长、抗疾病，最终产值增加、利润率提高。统计数据表明，全世界每年抗生素使用量约为30多万吨，我国每年用量达16万吨以上，其中畜牧业占了一大半，大大超过欧美国家的使用量。
为了有效解决饲料限抗或禁抗后畜禽的肠道健康问题，养殖业急需研发出新型抗菌产品或替抗方案。目前寻找新型抗菌物质的方式有：从自然环境中寻找抗菌物质，人工合成抗菌物质，市面上产品包括酸化剂、植物提取物、卵黄抗体、酶制剂、酵母细胞壁、益生菌等等。基于我国畜禽养殖生产密度高、条件差等特点，利用用抗生素添加剂进行预防和控制的需求强烈，因此需要我们正确、合理使用抗生素添加剂的同时，更要积极开发替抗产品，为畜牧业的持续发展提供更加绿色、环保、安全的替抗饲料添加剂。
批把叶为蔷薇科植物批把的叶子，又名巴叶、芦桔叶，是常用的中药材，具有清肺止咳、和胃利尿、止咳的功效，临床常用于治疗急、慢性呼吸道疾病。国内外学者对批把叶的化学成分进行了系列研究，发现其含挥发油、三菇类、倍半菇类、黄酮类等活性成分。其中黄酮类化合物有抗氧化、增强免疫、抗衰老、抗病毒和抗肿瘤等作用，同时也是重要的功能食品添加剂、饲料添加剂、天然抗氧化剂。
因此如何研究出一种枇杷叶提取物饲料添加剂的制备工艺具有非常重要的积极效果。
技术实现要素：
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，该生产工艺简单，易操作，适用于规模化生产，该方法能最大程度地提取出枇杷叶中的活性成分，同时采用该方法所制备的枇杷叶提取物饲料添加剂在肉鸡生产中进行应用，具有非常突出的积极效果。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案实现：
一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，由以下制备步骤组成：
(1)枇杷叶处理：将新鲜采集的枇杷叶，清洗干净，然后用植物粉碎机打碎，再按固液比1:2加入浓度为0.85％食盐水溶液，置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，置于真空干燥箱中干燥，干燥温度62℃，干燥后粉碎过30目筛，得枇杷叶粉；
(2)枇杷叶粉预处理：往枇杷叶粉中按固液比1:5加入蒸馏水，在60℃下处理30min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:4加入蒸馏水，在80℃下处理5min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:3加入浓度为10％的乙醇溶液，在45℃下处理30min，然后过滤，取滤渣，将滤渣置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，得预处理枇杷叶粉；
(3)枇杷叶粗提取：往预处理枇杷叶粉中按固液比1:4-6加入浓度为88-93％的乙醇溶液，超声提取20-25min，提取温度为50℃，超声功率200-220w，然后过滤，得滤液1和滤渣1；往滤渣1中按固液比1:4-6加入浓度为75-83％的乙醇溶液，超声提取30-35min，提取温度为50℃，超声功率200-220w，然后过滤，得滤液2和滤渣2；往滤渣2中按固液比1:3-5加入蒸馏水，再加入纤维素酶，纤维素酶加入量为滤渣2质量的3-5％，搅拌均匀，在水浴锅温度为48℃的条件下浸提1.5h，然后将温度提高至100℃，维持5min，再将温度降至70℃，静置10min，再加入无水乙醇，使溶液中乙醇的浓度为70-75％，搅拌均匀，浸提2h，然后过滤，得滤液3和滤渣3；合并滤液1、滤液2和滤液3，得枇杷叶提取液；
(4)枇杷叶提取液处理：将枇杷叶提取液浓缩至原体积的八分之一，然后真空干燥，粉碎，得枇杷叶粗提物；往枇杷叶粗提物中按固液比1:5-8加入蒸馏水，在30℃条件下振荡10min，过滤，取滤渣；将滤渣真空干燥，粉碎，得枇杷叶提取物；
(5)添加剂制备：将枇杷叶提取物和载体按1:2混合均匀，再按照固液比1:3加入浓度为95％的乙醇溶液，搅拌均匀，在50℃下水浴震荡20min，然后浓缩至原体积的四分之一，再进行真空干燥，粉碎，即可；所述载体由苹果渣和玉米粉按质量比6:1组成；
所述苹果渣的制备方法为：将新鲜苹果经破碎压榨提汁后的剩余物真空干燥，干燥温度55℃，粉碎过30目筛，得渣粉；然后加入植物乳杆菌菌粉，植物乳杆菌菌粉的加入量为渣粉质量的3-5％，所述植物乳杆菌菌粉中活菌数为1.5×107cfu/g,然后再加入渣粉质量10％的无菌水，搅拌均匀，在37℃条件下发酵24h，发酵结束后真空干燥即可。
本发明中一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所制得的饲料添加剂在肉鸡饲料中的添加量为400-600mg/kg。
有益效果
1、本发明中制备枇杷叶提取物饲料添加剂所采用的工艺条件简单、操作简便易行，同时对设备要求低，生产周期短，且所用的原料具有量大、天然环保无害等优点，具有较大的工业应用前景。
2、本发明所采用的提取方法能使得枇杷叶中的活性成分得到成分的释放，而且杂质少，提取物中活性成分含量高；
3、本方法制得的饲料添加剂在肉鸡中使用具有突出的效果能极显著提高胸肌和腿肌的生长，并且在一定程度上降低耗料增重比；另外，研究人员在研发过程中意外发现本发明产品对降低肉鸡的死淘率具有突出效果，降低的幅度达为2.08％，这将产生巨大的经济价值；
4、本发明方法制备得到的添加剂为天然产物，无任何毒副作用，具有效果好、绿色安全等特点，能有效替代抗生素在肉鸡养殖中的应用，有利于饲料行业和畜牧业的健康可持续发展。
具体实施例
以下通过具体实施例对本发明进行进一步阐述。
实施例1
一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，由以下制备步骤组成：
(1)枇杷叶处理：将新鲜采集的枇杷叶，清洗干净，然后用植物粉碎机打碎，再按固液比1:2加入浓度为0.85％食盐水溶液，置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，置于真空干燥箱中干燥，干燥温度62℃，干燥后粉碎过30目筛，得枇杷叶粉；
(2)枇杷叶粉预处理：往枇杷叶粉中按固液比1:5加入蒸馏水，在60℃下处理30min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:4加入蒸馏水，在80℃下处理5min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:3加入浓度为10％的乙醇溶液，在45℃下处理30min，然后过滤，取滤渣，将滤渣置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，得预处理枇杷叶粉；
(3)枇杷叶粗提取：往预处理枇杷叶粉中按固液比1:4加入浓度为88％的乙醇溶液，超声提取20min，提取温度为50℃，超声功率200w，然后过滤，得滤液1和滤渣1；往滤渣1中按固液比1:4加入浓度为75％的乙醇溶液，超声提取30min，提取温度为50℃，超声功率200w，然后过滤，得滤液2和滤渣2；往滤渣2中按固液比1:3加入蒸馏水，再加入纤维素酶，纤维素酶加入量为滤渣2质量的3％，搅拌均匀，在水浴锅温度为48℃的条件下浸提1.5h，然后将温度提高至100℃，维持5min，再将温度降至70℃，静置10min，再加入无水乙醇，使溶液中乙醇的浓度为70％，搅拌均匀，浸提2h，然后过滤，得滤液3和滤渣3；合并滤液1、滤液2和滤液3，得枇杷叶提取液；
(4)枇杷叶提取液处理：将枇杷叶提取液浓缩至原体积的八分之一，然后真空干燥，粉碎，得枇杷叶粗提物；往枇杷叶粗提物中按固液比1:5加入蒸馏水，在30℃条件下振荡10min，过滤，取滤渣；将滤渣真空干燥，粉碎，得枇杷叶提取物；
(5)添加剂制备：将枇杷叶提取物和载体按1:2混合均匀，再按照固液比1:3加入浓度为95％的乙醇溶液，搅拌均匀，在50℃下水浴震荡20min，然后浓缩至原体积的四分之一，再进行真空干燥，粉碎，即可；所述载体由苹果渣和玉米粉按质量比6:1组成；
所述苹果渣的制备方法为：将新鲜苹果经破碎压榨提汁后的剩余物真空干燥，干燥温度55℃，粉碎过30目筛，得渣粉；然后加入植物乳杆菌菌粉，植物乳杆菌菌粉的加入量为渣粉质量的3％，所述植物乳杆菌菌粉中活菌数为1.5×107cfu/g,然后再加入渣粉质量10％的无菌水，搅拌均匀，在37℃条件下发酵24h，发酵结束后真空干燥即可。
本发明中一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所制得的饲料添加剂在肉鸡饲料中的添加量为400mg/kg。
实施例2
一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，由以下制备步骤组成：
(1)枇杷叶处理：将新鲜采集的枇杷叶，清洗干净，然后用植物粉碎机打碎，再按固液比1:2加入浓度为0.85％食盐水溶液，置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，置于真空干燥箱中干燥，干燥温度62℃，干燥后粉碎过30目筛，得枇杷叶粉；
(2)枇杷叶粉预处理：往枇杷叶粉中按固液比1:5加入蒸馏水，在60℃下处理30min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:4加入蒸馏水，在80℃下处理5min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:3加入浓度为10％的乙醇溶液，在45℃下处理30min，然后过滤，取滤渣，将滤渣置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，得预处理枇杷叶粉；
(3)枇杷叶粗提取：往预处理枇杷叶粉中按固液比1:5加入浓度为91％的乙醇溶液，超声提取23min，提取温度为50℃，超声功率210w，然后过滤，得滤液1和滤渣1；往滤渣1中按固液比1:5加入浓度为78％的乙醇溶液，超声提取33min，提取温度为50℃，超声功率210w，然后过滤，得滤液2和滤渣2；往滤渣2中按固液比1:4加入蒸馏水，再加入纤维素酶，纤维素酶加入量为滤渣2质量的4％，搅拌均匀，在水浴锅温度为48℃的条件下浸提1.5h，然后将温度提高至100℃，维持5min，再将温度降至70℃，静置10min，再加入无水乙醇，使溶液中乙醇的浓度为73％，搅拌均匀，浸提2h，然后过滤，得滤液3和滤渣3；合并滤液1、滤液2和滤液3，得枇杷叶提取液；
(4)枇杷叶提取液处理：将枇杷叶提取液浓缩至原体积的八分之一，然后真空干燥，粉碎，得枇杷叶粗提物；往枇杷叶粗提物中按固液比1:6加入蒸馏水，在30℃条件下振荡10min，过滤，取滤渣；将滤渣真空干燥，粉碎，得枇杷叶提取物；
(5)添加剂制备：将枇杷叶提取物和载体按1:2混合均匀，再按照固液比1:3加入浓度为95％的乙醇溶液，搅拌均匀，在50℃下水浴震荡20min，然后浓缩至原体积的四分之一，再进行真空干燥，粉碎，即可；所述载体由苹果渣和玉米粉按质量比6:1组成；
所述苹果渣的制备方法为：将新鲜苹果经破碎压榨提汁后的剩余物真空干燥，干燥温度55℃，粉碎过30目筛，得渣粉；然后加入植物乳杆菌菌粉，植物乳杆菌菌粉的加入量为渣粉质量的4％，所述植物乳杆菌菌粉中活菌数为1.5×107cfu/g,然后再加入渣粉质量10％的无菌水，搅拌均匀，在37℃条件下发酵24h，发酵结束后真空干燥即可。
本发明中一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所制得的饲料添加剂在肉鸡饲料中的添加量为500mg/kg。
实施例3
一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，由以下制备步骤组成：
(1)枇杷叶处理：将新鲜采集的枇杷叶，清洗干净，然后用植物粉碎机打碎，再按固液比1:2加入浓度为0.85％食盐水溶液，置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，置于真空干燥箱中干燥，干燥温度62℃，干燥后粉碎过30目筛，得枇杷叶粉；
(2)枇杷叶粉预处理：往枇杷叶粉中按固液比1:5加入蒸馏水，在60℃下处理30min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:4加入蒸馏水，在80℃下处理5min，然后过滤，取滤渣；往滤渣中按固液比1:3加入浓度为10％的乙醇溶液，在45℃下处理30min，然后过滤，取滤渣，将滤渣置于-80℃下冷冻12h，然后用粉碎机打碎，得预处理枇杷叶粉；
(3)枇杷叶粗提取：往预处理枇杷叶粉中按固液比1:6加入浓度为93％的乙醇溶液，超声提取25min，提取温度为50℃，超声功率220w，然后过滤，得滤液1和滤渣1；往滤渣1中按固液比1:6加入浓度为83％的乙醇溶液，超声提取35min，提取温度为50℃，超声功率220w，然后过滤，得滤液2和滤渣2；往滤渣2中按固液比1:5加入蒸馏水，再加入纤维素酶，纤维素酶加入量为滤渣2质量的5％，搅拌均匀，在水浴锅温度为48℃的条件下浸提1.5h，然后将温度提高至100℃，维持5min，再将温度降至70℃，静置10min，再加入无水乙醇，使溶液中乙醇的浓度为75％，搅拌均匀，浸提2h，然后过滤，得滤液3和滤渣3；合并滤液1、滤液2和滤液3，得枇杷叶提取液；
(4)枇杷叶提取液处理：将枇杷叶提取液浓缩至原体积的八分之一，然后真空干燥，粉碎，得枇杷叶粗提物；往枇杷叶粗提物中按固液比1:8加入蒸馏水，在30℃条件下振荡10min，过滤，取滤渣；将滤渣真空干燥，粉碎，得枇杷叶提取物；
(5)添加剂制备：将枇杷叶提取物和载体按1:2混合均匀，再按照固液比1:3加入浓度为95％的乙醇溶液，搅拌均匀，在50℃下水浴震荡20min，然后浓缩至原体积的四分之一，再进行真空干燥，粉碎，即可；所述载体由苹果渣和玉米粉按质量比6:1组成；
所述苹果渣的制备方法为：将新鲜苹果经破碎压榨提汁后的剩余物真空干燥，干燥温度55℃，粉碎过30目筛，得渣粉；然后加入植物乳杆菌菌粉，植物乳杆菌菌粉的加入量为渣粉质量的5％，所述植物乳杆菌菌粉中活菌数为1.5×107cfu/g,然后再加入渣粉质量10％的无菌水，搅拌均匀，在37℃条件下发酵24h，发酵结束后真空干燥即可。
本发明中一种肉鸡用枇杷叶提取物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所制得的饲料添加剂在肉鸡饲料中的添加量为600mg/kg。
实验例
试验选取35日龄矮脚黄羽肉鸡144只(母鸡)，随机分为a、b、c组，每组6个重复，每个重复8只鸡。a组为对照组，饲喂基础日粮；b组为基础日粮+泰乐菌素(300mg/kg)；c为基础日粮+实施例2制得添加剂(500mg/kg)，试验期为35天。试验结束后，测定肉鸡生产和屠宰性能，采集血样并检测相关生化指标。
试验结果如下：
(1)对肉鸡生长性能的影响
备注：表中数据均以平均值±标准误表示；同行字母相同或不标注者为差异不显著(p＞0.10)，同行字母大小写不同者(p≤0.10)，字母不同者为差异显著(p<0.05)
试验结果表明：日粮中添加本发明制得的添加剂能降低肉鸡的耗料增重比。
(2)对肉鸡屠宰性能的影响
备注：表中数据均以平均值±标准误表示；同行字母相同或不标注者为差异不显著(p＞0.10)，同行字母大写不同者(p≤0.10)，小写字母不同者为差异显著(p<0.05)。
结果显示：本发明添加剂显著提高了肉鸡的胸肌重(p<0.05)，有增加腿肌重的趋势(p≤0.10)，说明在肉鸡日粮中添加本发明产品能提高肉鸡的屠宰性能。
(3)肉鸡血清抗氧化指标的影响
结果所示，日粮中添加本发明产品显著提高了肉鸡血清中超氧化物歧化酶(sod)活性(p<0.05)；显著降低了血清中丙二醛(mda)的含量(p<0.05)。但是对血清中谷胱甘肽的含量无显著影响(p>0.05)
(4)对肉鸡死淘率的影响
结果表明，基础日粮中添加本发明制得添加剂能降低肉鸡的死淘率，降低的幅度为2.08％，达到与日粮中添加泰乐菌素一样的效果。