红景天苷在制备预防和/或治疗污染致心血管疾病的药物中的应用的制作方法

本发明涉及红景天苷在制备预防和/或治疗污染致心血管疾病的药物中的应用，属于生物医药领域。

背景技术：

粒子物质(pm)是一种复杂的异构混合物，是空气污染的主要成分之一。pm2.5指环境空气中空气动力学当量直径≤2.5μm的颗粒物，也称细颗粒物。立方米空气中这种颗粒的含量越高就代表空气污染越严重。最近一项全球性疾病负担评估排名将pm2.5作为世界范围内死亡和致残的主要因素之一。pm2.5被吸入支气管后，可沉积在肺泡上，其中可溶性成分可能被吸收进入血液，小于0.1μm的粒子更可通过肺间质直接进入循环系统，相比pm2.5的急性大剂量吸入引起的不稳定型心绞痛、心肌梗死，慢性长期pm2.5的吸入更符合大部分气候相关性心血管病住院病人的诱因。

最近的研究提示，pm2.5的长期暴露可引起肺和系统性的氧化应激产生、炎症反应，动脉粥样硬化程度加重，缺血性心脏病死亡的危险性增加。国内外大量研究表明长期高剂量pm2.5吸入可以促进动脉粥样硬化的发生与发展，可能与提高动脉粥样硬化部位内皮细胞的通透性、减低冠脉内皮的活力、炎症的发展、氧化应激等相关。动物实验显示，原先患有心血管疾病大鼠的心脏对pm2.5暴露更为敏感。瑞士一项流行病学研究表明，长期暴露pm2.5可导致颈动脉内膜厚度增加。大量实验表明，pm2.5的心脏毒性作用表现为心肌缺血、缺氧，可致心绞痛、心肌梗死甚至猝死，减弱心肌收缩功能，引起心功能受损甚至心衰及心律失常。

红景天苷是藏药红景天中的重要有效成分，研究表明红景天苷可能通过促进no合成、抗氧化、促进血管新生、降血脂等从而起到抗动脉粥样硬化作用。然而，慢性pm2.5吸入对粥样斑块损伤和对动脉粥样硬化的病情形成的作用机制尚不明确。

中国专利zl201210183181.7涉及红景天苷体内抗高血压作用的新用途，其具体公开了红景天苷在制备防治高血压药物及保健食品中的用途；中国专利zl201610039803.7涉及红景天苷在制备治疗糖尿病足的药物中的应用，但不涉及心脏和血管功能损伤；申请号为201611068373.8专利公开了红景天苷在制备雌激素受体抑制剂中的用途，但不涉及心脏和血管功能损伤；申请号为201611222778.2的专利公开了一种红景天有效部位的制备及其医药用途，但红景天有效部位是混合物，且涉及的肺动脉高压。至今尚未发现红景天及其有效成分用于制备治疗肺动脉高压药物的报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供红景天苷在制备治疗或预防污染致心血管疾病的药物、保健品、功能食品、特殊医疗用途食品或其他生物制品中的应用。

本发明的另一目的是提供红景天苷在制备治疗或预防污染致心血管疾病并发症的药物、保健品、功能食品、特殊医疗用途食品或其他生物制品中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：红景天苷在制备预防和/或治疗污染致心血管疾病的药物、保健品、功能食品、特殊医疗用途食品或其他生物制品中的应用。

此外，本发明提供红景天苷在制备预防和/或治疗污染致心血管疾病并发症的药物、保健品、功能食品、特殊医疗用途食品或其他生物制品中的应用。

本发明的优选实施方式，所述污染致心血管疾病包括动脉粥样硬化、高血压、心肌病、冠心病、心包炎或心律失常。

本发明的优选实施方式，所述污染致心血管疾病并发症包括呼吸系统损伤或代谢系统障碍。

本发明的优选实施方式，所述药物根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体制备成医药领域中可接受的任意一种剂型。

本发明的优选实施方式，所述剂型包括注射液、注射用冻干粉针剂、气雾剂、大输液、软胶囊剂、滴丸、丸剂、颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液或乳剂。

本发明的优选实施方式，所述载体选自稀释剂、赋形剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、粘合剂、表面活性剂、吸收促进剂、润滑剂中的至少一种。

本发明提供一种药物组合物在制备预防和/或治疗污染致心血管疾病或污染致心血管疾病并发症的药物中的应用，所述药物组合物的有效成分包括红景天苷，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明所述红景天苷可显著改善小鼠动脉粥样硬化、心脏、血管的循环系统病变，对呼吸系统和代谢系统的并发症也具有明显干预效应，说明了红景天苷能够降低小鼠动脉粥样硬化的相关心血管疾病，并对其相关多器官损伤的并发症也具有重要的潜在防治作用。本发明提供了红景天苷的一种新的应用途径，为污染致心血管疾病或污染致心血管疾病的并发症提供一种新的药物选择。

附图说明

图1为红景天苷对pm2.5致主动脉血栓形成的结果示意图；

图2为红景天苷对pm2.5致小鼠心血管疾病并发体重的影响结果示意图；

图3为红景天苷对pm2.5致小鼠心室压和脉压差的影响结果示意图；

图4为红景天苷对pm2.5致小鼠心血管疾病并发肺组织损伤的影响结果示意图，标尺200um；

图5为红景天苷对pm2.5致小鼠心血管疾病并发代谢系统障碍的影响结果示意图。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如《分子克隆》(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：红景天苷对污染致心血管疾病的干预作用

一、实验材料

1.实验动物：spf级雄性sd大鼠，体重(200±20)g，实验动物由广东省医学实验动物中心提供。

2.主要试剂：红景天苷(sal，美国sigma公司)，pm2.5(美国srm1649b)。

3.主要实验仪器：石蜡切片机和冷冻切片机(德国leica公司)，olympusdp71显微照相系统(日本olympus公司)，组织切片机rm2235(德国leica公司)，电子天平auy120(日本shimadzu公司)，medlab生理记录仪(成都泰盟公司)，periscanpim3激光多普勒血流灌注成像仪及其配套pim3ldi软件(瑞典帕瑞医学公司)。

二、实验方法

1.动脉粥样硬化模型小鼠的建立

造模及分组：apoe基因敲除(apoe-/-)小鼠在c57bl/6背景下从北京维通利华购买。分为c57bl/6分为普通饮食组(n＝20只)及高脂饮食组(n＝20只)，apoe组分为普通饮食组(n＝10只)及高脂饮食组(n＝60只)，高脂饮食组小鼠用标准的高脂饲料(中国，广东省动物中心)喂食。在hfd模型中，6周龄小鼠接受hfd12周。在hfd喂养12周后，3天内每组各取10只小鼠进行心脏和主动脉取材、左室压测量，确定造模成功。

在高脂饲养结束后，pm2.5气管滴注apoe-/-高脂饮食组小鼠8周，pm2.5分为高低浓度组(20，10mg/kg)，每只小鼠气管滴注40μl，生理盐水组。低浓度组5只，对照组5只，高浓度组50只。高浓度组又细分为pm2.5组，pm2.5+ch223191低浓度，pm2.5+ch223191高浓度，pm2.5+sal低浓度，pm2.5+sal高浓度，pm2.5+sal+阿托伐他汀，每组9-10只。

2.各种药物给药方法

pm2.5气管滴注：给予2％戊巴比妥钠0.1ml/30g腹腔注射麻醉，小鼠完全麻醉后，橡皮筋固定小鼠四肢和头部，使头向上，颈部尽量与操作台垂直，打开鼠口，镊子固定舌头到一边，充分暴露鼠咽喉部，插入大小适中的耳镜，观察会厌，会厌打开瞬间，移液枪将装有40ul的pm2.5悬浊液(溶剂生理盐水)快速打进气道，观察小鼠呼吸情况，必要时给予辅助呼吸。

红景天苷分为低剂量组25mg/kg和高剂量组50mg/kg每日一次腹腔注射。ch223191低浓度5mg/kg，高浓度20mg/kg灌胃。ch223191：参考文献给药量低浓度组5mg/kg，高浓度组20mg/kg灌胃。阿托伐他汀根据mech公式计算用量，约为人类用量的1/9，约为1mgqd，方法参考文献。

3.组织病理学检查

在上述3个时间点，每亚组随机取3只小鼠断颈处死，完整切取心肺和主动脉弓，主动脉弓存放于-80℃冰箱保证组织新鲜。

剖开腹腔，胸腔，清除胃部，肠道等组织，小心分离心脏，尽量保留冠状动脉完整性，分离主动脉，清除主动脉周围结缔组织，保留髂总动脉以及分支，将主动脉放入液氮保存。将主动脉分离取下，用镊子尽可能地去除血管周围的脂肪组织，固定液固定24h后用解剖剪沿血管壁小心地将血管纵向剖开。油红染液中37°染色60min，蒸馏水洗2次后拍照，结果判读：脂滴呈橘红色或鲜红色，其它部位近无色。

4.左室压测量

2％戊巴比妥钠0.1ml/30g麻醉小鼠后连接小鼠呼吸机，面罩吸氧，三通管连接静脉留置针和5ml针筒，去除三通管内气体，bl-420f调取“动脉血压调节”项目，调零，解剖剪和镊子开放胸腔，调整小鼠体位，使心脏左室朝上，静脉留置针小心插入左室腔，记录左室压力。

三、实验结果

1.主动脉油红染色

主动脉油红染色可见油脂在整段血管中的分布，将整个动物实验分为两个阶段：造模阶段以及造模后各种药物处理阶段。由图1显示：在进行pm2.5气管滴注后，与模型组比较，主动脉油脂表达量明显增高(p<0.01，n＝3)，同时进行pm2.5滴注和各种药物(ch223191，阿托伐他汀，红景天苷)改善后，与pm2.5高浓度组比较，主动脉油脂表达量显著下降(p<0.001，n＝3)。

2.体重变化

apoe^-/-小鼠和正常c57bl/6小鼠购买时为4周龄，实验室适应性培养2周，之后进行高脂和普通饮食分开喂养，每周记录1次体重变化，精确到0.1g，将最后一周得到的体重减去刚开始实验时测得的体重即为体重改变。由图2显示在进行pm2.5气管滴注后，与模型组比较，体重明显增高(p<0.01，n＝3)，同时进行pm2.5滴注和药物改善(ch223191，阿托伐他汀，红景天苷)后，与pm2.5高浓度组比较，体重明显下降(p<0.01，n＝3)。

3.左室收缩压和左室脉压差检测

左室压直接测量法检测左室收缩压和左室脉压差，反映apoe^-/-高脂饮食对左室收缩功能的影响，附图3示在进行pm2.5气管滴注后，与模型组比较，左室收缩压与左室脉压差明显增高(p<0.01，n＝3)，同时进行pm2.5滴注和药物改善(ch223191，阿托伐他汀，红景天苷)后，与pm2.5高浓度组比较，左室收缩压和左室脉压差明显降低(p<0.01，n＝3)。

四、结论：

红景天苷可显著改善pm2.5致动脉粥样硬化小鼠心脏和血管结构、功能及身体发育等指标，说明红景天苷对污染所致的动脉粥样硬化及心血管病变具有防治作用。

实施例2：红景天苷对污染致心血管疾病并发症呼吸系统损伤

一、实验材料

1.实验动物：spf级雄性sd大鼠，体重(200±20)g，实验动物由广东省医学实验动物中心提供。

2.主要试剂：红景天苷(美国sigma公司)，pm2.5(美国srm1649b)。

3.主要实验仪器：石蜡切片机和冷冻切片机(德国leica公司)，olympusdp71显微照相系统(日本olympus公司)，组织切片机rm2235(德国leica公司)，电子天平auy120(日本shimadzu公司)，medlab生理记录仪(成都泰盟公司)，periscanpim3激光多普勒血流灌注成像仪及其配套pim3ldi软件(瑞典帕瑞医学公司)。

二、实验方法

1.动脉粥样硬化模型小鼠的建立

造模及分组：apoe^-/-小鼠在c57bl/6背景下从北京维通利华购买。分为c57bl/6分为普通饮食组(n＝20只)及高脂饮食组(n＝20只)，apoe^-/-组分为普通饮食组(n＝10只)及高脂饮食组(n＝60只)，高脂饮食组小鼠用标准的高脂饲料(中国，广东省实验动物中心)喂食。在hfd模型中，6周龄小鼠接受hfd12周。在hfd喂养12周后，3天内每组各取10只小鼠进行心脏和主动脉取材、左室压测量，确定造模成功。

在高脂饲养结束后，pm2.5气管滴注apoe^-/-高脂饮食组小鼠8周，pm2.5分为高低浓度组(20，10mg/kg)，每只小鼠气管滴注40ul，生理盐水组。低浓度组5只，对照组5只，高浓度组50只。高浓度组又细分为pm2.5组，pm2.5+ch223191低浓度，pm2.5+ch223191高浓度，pm2.5+sal低浓度，pm2.5+sal高浓度，pm2.5+sal+阿托伐他汀，每组9-10只。

2.各种药物给药方法

pm2.5气管滴注：给予2％戊巴比妥钠0.1ml/30g腹腔注射麻醉，小鼠完全麻醉后，橡皮筋固定小鼠四肢和头部，使头向上，颈部尽量与操作台垂直，打开鼠口，镊子固定舌头到一边，充分暴露鼠咽喉部，插入大小适中的耳镜，观察会厌，会厌打开瞬间，移液枪将装有40ul的pm2.5悬浊液(溶剂生理盐水)快速打进气道，观察小鼠呼吸情况，必要时给予辅助呼吸。

红景天苷分为低剂量组25mg/kg和高剂量组50mg/kg每日一次腹腔注射。ch223191低浓度5mg/kg，高浓度20mg/kg灌胃。ch223191：参考文献给药量低浓度组5mg/kg，高浓度组20mg/kg灌胃。阿托伐他汀根据mech公式计算用量，约为人类用量的1/9，约为1mgqd，方法参考文献。

3.组织病理学检查

在上述3个时间点，每亚组随机取3只小鼠断颈处死，完整切取肺部，4％多聚甲醛固定16-24h后石蜡包埋，4μm切片，主动脉弓存放于-80℃冰箱保证组织新鲜。

切片脱蜡至水，苏木精染色15min，1％盐酸酒精分化10s，伊红染色20s，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。染色结果：细胞核蓝色，细胞质红色。

三、实验结果

1.肺组织he染色

he染色反映肺组织炎症细胞(如嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞)等的分布，以及肺泡形态。由图4可知，在给予pm2.5后，相比造模组，肺组织中的炎症细胞显著增加(p<0.001，n＝3)，肺泡融合成大片空腔。

四、实验结论

pm2.5致动脉粥样硬化小鼠心脏和血管病变的同时，会并发肺组织损伤，而红景天苷对该呼吸系统并发症具有显著改善作用，表明红景天苷对污染所致心血管疾病的呼吸并发症具有潜在的药理功效。

实施例3：红景天苷对污染致心血管疾病并发症代谢系统障碍

一、实验材料

1.实验动物：spf级雄性sd大鼠，体重200±20g，实验动物由广东省医学实验动物中心提供。

2.主要试剂：红景天苷(美国sigma公司)，pm2.5(美国srm1649b)。

3.主要实验仪器：石蜡切片机和冷冻切片机(德国leica公司)，olympusdp71显微照相系统(日本olympus公司)，组织切片机rm2235(德国leica公司)，电子天平auy120(日本shimadzu公司)，medlab生理记录仪(成都泰盟公司)，periscanpim3激光多普勒血流灌注成像仪及其配套pim3ldi软件(瑞典帕瑞医学公司)。

二、实验方法

1.血清脂质代谢变化

hdl-c(南京建成生物研究所，a112-1)，ldl-c(南京建成生物研究所，a113-1)，t-cho(南京建成生物研究所，a111-1)，tg(南京建成生物研究所，a110-1)，具体方法参照试剂盒说明书。

三、实验结果

1.血清hdl-c、ldl-c、tc、tg代谢变化检测

hdl-c、ldl-c、tc、tg是血清中脂质含量的重要指标。ldl-c、tc、tg在高脂血症病人中表达量较高，hdl-c具有调节脂质转运的作用，在高脂血症病人中表达量较低。由图5显示：在进行pm2.5气管滴注后，与模型组比较，ldl-c、tc、tg表达量明显增高(p<0.01，n＝3)，进行pm2.5滴注和药物改善(ch223191，阿托伐他汀，红景天苷)后，与pm2.5高浓度组比较，ldl-c、tc、tg表达量明显下降(p<0.01，n＝3)。由于hdl-c与ldl-c、tc、tg作用相反，故趋势相反。

四、实验结论

pm2.5致动脉粥样硬化小鼠心脏和血管病变的同时，会并发代谢系统紊乱，而红景天苷对该代谢系统并发症具有显著改善作用，表明红景天苷对污染所致心血管疾病的代谢并发症具有潜在的药理功效。

综上所述，本发明所述的红景天苷能有效治疗或预防污染致心血管疾病或污染致心血管疾病的并发症。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。