动物饲料组合物及其用途1.对序列表的引用2.本申请包含计算机可读形式的序列表，该序列表以引用方式并入本文。3.发明背景
技术领域：
：4.本发明涉及使用一种或多种微生物胞壁质酶改善动物的褥草质量和/或减少动物的足垫皮炎的方法。
背景技术：
：：5.胞壁质酶(muramidase)，又称溶菌酶(lysozyme)，是作为许多生物体针对细菌的防御机制产生的o‑糖基水解酶。该酶通过切割细菌中的一种重要结构分子肽聚糖的糖苷键来引起细菌细胞壁的水解。当细菌细胞的细胞壁被胞壁质酶削弱后，细菌细胞就会因为不平衡的渗透压而溶解。6.胞壁质酶天然存在于许多生物体，例如病毒、植物、昆虫、鸟类、爬行动物和哺乳动物中。胞壁质酶已被分类为五种不同的糖苷水解酶(gh)家族(cazy，www.cazy.org)：母鸡卵清胞壁质酶(gh22)、鹅卵清胞壁质酶(gh23)、噬菌体t4胞壁质酶(gh24)、鞘脂单胞菌属(sphingomonas)鞭毛蛋白(gh73)和拟鞘孢属(chalaropsis)胞壁质酶(gh25)。来自gh23和gh24家族的胞壁质酶主要是从噬菌体已知的，并且直到最近才在真菌中鉴定出。已经发现胞壁质酶家族gh25在结构上与其他胞壁质酶家族无关。7.胞壁质酶由于其天然丰度而传统上从母鸡卵清中提取，并且直到最近，母鸡卵清胞壁质酶还是唯一被研究用于动物饲料中的胞壁质酶。从母鸡卵清中提取的胞壁质酶是商业市场上可得的主要产品，但不能切割例如金黄色酿脓葡萄球菌(staphylococcusaureus)细胞壁中的n,6‑o‑二乙酰基胞壁酸，因此尤其不能溶解这种重要的人类病原体(masschalckb、deckersd、michielscw(2002),“lyticandnonlyticmechanismofinactivationofgram‑positivebacteriabymuramidaseunderatmosphericandhighhydrostaticpressure”,jfoodprot.65(12):1916‑23)。8.wo2000/21381公开了一种组合物，该组合物包含至少两种抗微生物酶以及多不饱和脂肪酸，其中所述抗微生物酶中的一种抗微生物酶是来自雏鸡卵清的gh22胞壁质酶。gb2379166公开了一种组合物，该组合物包含破坏细菌的肽聚糖层的化合物和破坏细菌的磷脂层的化合物，其中破坏肽聚糖的化合物是来自雏鸡卵清的gh22胞壁质酶。9.wo2004/026334公开了一种用于抑制牲畜肠道中肠道病原体生长的抗微生物组合物，该抗微生物组合物包含：(a)细胞壁溶解物质或其盐、(b)抗微生物物质、(c)多价螯合剂和(d)羊毛硫细菌素，其中细胞壁溶解物质或其盐是来自母鸡卵清的gh22胞壁质酶。10.令人惊讶的是，本发明的发明人发现，胞壁质酶可在饲料中使用以改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎。随着人们对动物蛋白需求的不断增加，这种改善动物福利的解决方案一直是农户所感兴趣的。技术实现要素：11.因此，本发明提供了一种改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎的方法，该方法包括向该动物施用含有一种或多种微生物胞壁质酶的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂。12.序列表概述13.seqidno:1是如在wo2013/076253中所述的来自嗜碱枝顶孢菌(acremoniumalcalophilum)的野生型gh25胞壁质酶的具有n末端spirr的成熟氨基酸序列。14.seqidno:2是从囊状长毛盘菌(trichophaeasaccata)中分离的gh24胞壁质酶的基因序列。15.seqidno:3是从seqidno:2推导出的氨基酸序列。16.seqidno:4是来自囊状长毛盘菌的野生型gh24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。17.seqidno:5是来自原鸡(gallusgallus)的野生型gh22胞壁质酶(母鸡卵清胞壁质酶)的成熟氨基酸序列。18.seqidno:6是引物f‑80470。19.seqidno:7是引物r‑80470。20.seqidno:8是引物8643。21.seqidno:9是引物8654。22.seqidno:10是如在wo2013/076253中所述的来自嗜碱枝顶孢菌的野生型gh25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。23.定义24.微生物胞壁质酶：术语“微生物胞壁质酶”是指从或可从微生物源获得的具有胞壁质酶活性的多肽。微生物源的示例是真菌；即胞壁质酶是从或可从真菌界获得，其中术语界是分类级别。具体地，微生物胞壁质酶是从或可从子囊菌门(phylumascomycota)，例如盘菌亚门(sub‑phylumpezizomycotina)获得，其中术语门和亚门是分类级别。25.如果多肽的分类级别是未知的，则本领域技术人员可以通过对该多肽执行blastp搜索(使用例如国家生物技术信息中心(ncib)网站http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)并将该多肽与最接近的同源物进行比较来容易地确定该多肽。为已知多肽的片段的未知多肽被认为是同一分类物种。包含在至多10个位置中的取代、缺失和/或插入的未知天然多肽或人工变体被认为与已知多肽来自同一分类物种。26.胞壁质酶活性：术语“胞壁质酶活性”是指对肽聚糖中的n‑乙酰胞壁酸与n‑乙酰‑d‑葡糖胺残基之间或壳糊精中的n‑乙酰‑d‑葡糖胺残基之间的1,4‑β‑键进行酶促水解，从而导致由于渗透压引起的溶菌作用。胞壁质酶属于酶类别ec3.2.1.17。通常通过浊度测定来测量胞壁质酶活性。该方法基于由胞壁质酶的溶解作用诱导的藤黄微球菌atcc4698悬浮液的浊度变化。在适当的实验条件下，这些变化与培养基中的胞壁质酶的量成比例(参阅联合国粮农组织食品添加剂标准综合纲要ins1105(www.fao.org))。出于本发明的目的，根据实施例5中所述的浊度测定(“胞壁质酶活性测定”)来测定胞壁质酶活性。在一个方面中，本发明的多肽具有seqidno:1的胞壁质酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％。在一个方面中，本发明的多肽具有seqidno:4的胞壁质酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％。在一个方面中，本发明的多肽具有seqidno:10的胞壁质酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％。27.片段：术语“片段”是指在成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端有一个或多个(例如，几个)氨基酸缺乏的多肽或催化结构域；其中该片段具有胞壁质酶活性。在一个方面中，片段包含seqidno:1的至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸，并具有胞壁质酶活性。28.在另一方面中，片段包含seqidno:4的至少210个氨基酸，例如至少215个氨基酸、至少220个氨基酸、至少225个氨基酸、至少230个氨基酸、至少235个氨基酸或至少240个氨基酸，并且具有胞壁质酶活性。29.在一个方面中，片段包含seqidno:10的至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸，并具有胞壁质酶活性。30.分离的：术语“分离的”是指以在自然界中环境中不存在的形式存在的物质。分离的物质的非限制性示例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)任何物质，包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子，这些物质至少部分地从在自然界中与这些物质缔合的天然存在的成分中的一种或多种或全部天然存在的成分中取出；(3)任何物质，该物质相对于自然界中存在的该物质通过人工方式修饰；或(4)任何物质，该物质通过增加该物质相对于与其天然缔合的其他组分的量而被修饰(例如，编码该物质的基因的多个拷贝；使用比与编码该物质的基因天然缔合的启动子更强的启动子)。在发酵液样品中可存在分离的物质。31.成熟多肽：术语“成熟多肽”是指处于在翻译和任何翻译后修饰(例如n末端处理、c末端截断、糖基化、磷酸化等)之后的最终形式下的多肽。32.序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性通过参数“序列同一性”来描述。33.出于本发明的目的，使用如在emboss包的needle程序(emboss:theeuropeanmolecularbiologyopensoftwaresuite,rice等人，2000,trendsgenet.16:276‑277)，优选地5.0.0或更高版本中实现的needleman‑wunsch算法(needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.48:443‑453)来测定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是为10的空位开放罚分、为0.5的空位延伸罚分，以及eblosum62(eblosum62的emboss版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”(使用‑nobrief选项获得的)的needle输出用作同一性百分比，并且计算如下：34.(相同残基×100)/(比对长度‑比对中总空位数)35.变体：术语“变体”意味着具有胞壁质酶活性的多肽，该多肽包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个(若干个)氨基酸残基的变化(即，取代、插入和/或缺失)。取代意味着用不同的氨基酸替换占据一个位置的氨基酸；缺失意味着去除占据一个位置的氨基酸；并且插入意味着在占据该位置的氨基酸旁边或紧接着占据该位置的氨基酸加入1个、2个或3个氨基酸。36.在一个方面中，根据本发明的胞壁质酶变体可包含1个至5个；1个至10个；1个至15个；1个至20个；1个至25个；1个至30个；1个至35个；1个至40个；1个至45个；或1‑50个，即1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个或50个改变，并且具有亲本胞壁质酶(例如seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10)的胞壁质酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％。37.单胃动物：“单胃动物”是指除人类以外的任何具有简单单腔胃的动物。单胃动物的示例包括猪(pig)或生猪(swine)(包括但不限于仔猪、生长猪和母猪)；家禽，例如火鸡、鸭子、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子(包括乳鸽)和鸡(包括但不限于肉用仔鸡(在此称为肉鸡)、雏鸡、蛋鸡、母鸡(在此称为蛋鸡))；宠物动物，例如猫和狗；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)；甲壳类动物(包括但不限于基围虾(shrimps)和对虾(prawns))；以及鱼类，(包括但不限于青甘鱼(amberjack)、巨滑舌鱼(arapaima)、鲃鱼(barb)、鲈鱼(bass)、扁鲹(bluefish)、鲮脂鲤科(bocachico)、鳊鱼(bream)、大头鱼(bullhead)、大盖巨脂鲤(cachama)、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉魮(catla)、虱目鱼(chanos)、红点鲑(char)、丽鱼科鱼(cichlid)、军曹鱼、鳕鱼、莓鲈(crappie)、金头鲷(dorada)、石首鱼(drum)、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼(goldfish)、丝足鱼(gourami)、石斑鱼、花身副丽鱼(guapote)、大比目鱼(halibut)、爪哇鱼(java)、野鲮属(labeo)、濑鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼(mackerel)、遮目鱼(milkfish)、银鲈(mojarra)、泥鱼(mudfish)、鲻鱼(mullet)、帕克鱼(paco)、绿腹丽鱼(pearlspot)、银汉鱼(pejerrey)、河鲈鱼(perch)、梭子鱼(pike)、鲳参鱼(pompano)、斜齿鳊(roach)、长丝异鳃鲶(sampa)、大眼鰤鲈(sauger)、海鲈鱼(seabass)、海鲷(seabream)、闪光鱼(shiner)、鲈塘鳢(sleeper)、黑鱼(snakehead)、鲷鱼(snapper)、锯盖鱼(snook)、鳎(sole)、蓝子鱼(spinefoot)、鲟鱼(sturgeon)、翻车鱼、香鱼、丁鲷(tench)、皇冠鱼(terror)、罗非鱼(tilapia)、鳟鱼(trout)、金枪鱼(tuna)、大菱鲆(turbot)、白鳟鱼(vendace)、玻璃梭鲈(walleye)和白鲑鱼(whitefish))。38.动物饲料：术语“动物饲料”是指适合或旨在被动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。用于单胃动物的动物饲料通常包含浓缩物以及维生素、矿物质、酶、直接饲喂的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(诸如在预混物中)，而用于反刍动物的动物饲料通常包含草料(包括粗饲料和青贮料)并且还可以包含浓缩物以及维生素、矿物质、酶、直接饲喂的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(诸如在预混物中)。39.浓缩物：术语“浓缩物”是指具有高蛋白质和能量浓度的饲料，诸如鱼粉、糖蜜、低聚糖、高粱、种子和谷物(整粒玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦，或通过压碎、碾磨等从例如玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦制成)、油料压榨饼(例如，来自棉籽、红花、向日葵、大豆(诸如豆粕)、油菜籽/低芥酸菜籽、花生)、棕榈仁饼、酵母衍生材料和蒸馏酒粕(诸如湿蒸馏酒粕(wetdistillersgrains,wds))和具有可溶物的干蒸馏酒粕(drieddistillersgrainswithsolubles,ddgs)。40.草料：如本文所定义的术语“草料”也包括粗饲料。草料是来自饲用植物、禾草和其他饲用植物、海藻、发芽谷物和豆类或它们的任何组合的新鲜植物材料，例如干草和青贮料。饲用植物的示例为苜蓿(紫花苜蓿)、百脉根(birdsfoottrefoil)、芸苔属(例如羽衣甘蓝、油菜(卡诺拉)、芜菁甘蓝(瑞典芜菁)、芜菁(turnip))、三叶草(例如杂种车轴草、红车轴草、地三叶草、白三叶草)、禾草(例如狗牙根、雀麦草、假燕麦草、羊茅草(fescue)、欧石楠草(heathgrass)、草地早熟禾、鸭茅草(orchardgrass)、黑麦草、提摩西草(timothy‑grass))、玉米(玉蜀黍)、小米、大麦、燕麦、黑麦、高粱、大豆和小麦以及蔬菜(例如甜菜)。草料还包括来自粮食生产的作物残茬(例如玉米秸秆；来自小麦、大麦、燕麦、黑麦和其他谷物的秸秆)；来自蔬菜的残余物，如甜菜缨(beettops)；来自油籽生产的残余物，如来自大豆、油菜籽和其他豆类的茎和叶；以及来自供动物或人食用的谷物的提炼或来自燃料生产或其他工业的级分。41.粗饲料：术语“粗饲料”是指具有高纤维水平的干燥植物材料，例如纤维、麸皮、来自种子和谷粒的外皮以及作物残茬(例如秸秆、干椰子肉、糠秕、甜菜渣)。42.褥草质量：术语“褥草质量”是指由动物排泄的褥草(litter)的状况。褥草是垫料、排泄物、羽毛、残余饲料(wastedfeed)和废弃水(wastedwater)的混合物。该质量可用湿度、ph值、氨态氮含量等来表征。具体实施方式43.改善褥草质量和/或减少足垫皮炎的方法44.已经令人惊讶地发现，与不含微生物胞壁质酶的动物饲料相比，用微生物胞壁质酶补充动物饲料导致了改善单胃动物的褥草质量的显著益处。在肉鸡体内试验中，令人惊讶地发现：45.(a)用胞壁质酶处理导致了较低的褥草湿度；46.(b)用胞壁质酶处理导致了较低的褥草氨态氮；和/或47.(d)用胞壁质酶处理导致了较低的褥草ph值。48.已经进一步令人惊讶地发现，与不含微生物胞壁质酶的动物饲料相比，用微生物胞壁质酶补充动物饲料导致了单胃动物的足垫皮炎的减少。在肉鸡体内试验中，令人惊讶地发现：49.(a)用胞壁质酶处理导致了降低的足垫皮炎得分。50.因此，本发明涉及一种改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎的方法，所述方法包括向所述动物施用包含一种或多种微生物胞壁质酶的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂。51.在本发明中，所述改善是与不存在微生物胞壁质酶的动物饲料或动物饲料添加剂(在本文称为阴性对照)相比而言。52.优选地，与阴性对照相比，褥草湿度降低了至少1％，例如至少1.5％、至少2.0％、至少2.5％、至少3％、至少3.5％、至少4％或至少5％。53.优选地，与阴性对照相比，褥草的氨态氮降低了至少10％，例如至少15％、至少25％、或至少30％。54.优选地，与阴性对照相比，褥草的ph值降低了介于0.05与0.2之间，例如介于0.075与0.175之间、介于0.1与0.15之间的值。55.优选地，与阴性对照相比，足垫皮炎减少了介于5％与30％之间，例如介于10％与25％之间、介于15％与20％之间百分比。56.在本发明中，微生物胞壁质酶可以100mg酶蛋白/kg动物饲料至1000mg酶蛋白/kg动物饲料，例如200mg酶蛋白/kg动物饲料至900mg酶蛋白/kg动物饲料、300mg酶蛋白/kg动物饲料至800mg酶蛋白/kg动物饲料、400mg酶蛋白/kg动物饲料至700mg酶蛋白/kg动物饲料、500mg酶蛋白/kg动物饲料至600mg酶蛋白/kg动物饲料，或这些区间的任何组合的水平投配。57.在本发明中，所述单胃动物可选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、家禽、火鸡、鸭子、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡、猫、狗、马、甲壳类动物、基围虾、对虾、鱼类、青甘鱼、巨滑舌鱼、鲃鱼、鲈鱼、扁鲹、鲮脂鲤科、鳊鱼、大头鱼、大盖巨脂鲤、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉魮、虱目鱼、红点鲑、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、莓鲈、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、花身副丽鱼、大比目鱼、爪哇鱼、野鲮属、濑鱼、泥鳅、鲭鱼、遮目鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕克鱼、绿腹丽鱼、银汉鱼、河鲈鱼、梭子鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、长丝异鳃鲶、大眼鰤鲈、海鲈鱼、海鲷、闪光鱼、鲈塘鳢、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、鳎、蓝子鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼、丁鲷、皇冠鱼、罗非鱼、鳟鱼、金枪鱼、大菱鲆、白鳟鱼、玻璃梭鲈、和白鲑鱼。优选地，所述单胃动物选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、家禽、火鸡、鸭子、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡。更优选地，所述单胃动物选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、雏鸡、肉鸡、蛋鸡和小鸡。58.在本发明中，可以从出生直到屠宰将微生物胞壁质酶饲喂给动物。优选地，从出生直到屠宰每天将微生物胞壁质酶饲喂给动物。更优选地，在动物的寿命期间每天将微生物胞壁质酶饲喂给该动物达至少10天，例如至少15天或至少20天(其中这些天可为连续或不连续的)。此外优选地，将微生物胞壁质酶饲喂给动物10‑20天，之后是5‑10天的非治疗期，并且将该循环在该动物的寿命期间重复。59.在本发明中，可在肉鸡孵化后的最初49天将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。优选地，在在肉鸡孵化后的最初36天将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。更优选地，在孵化后的第22天至第36天将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。此外优选地，在育雏前(pre‑starter)期(第1‑7天)期间将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。此外优选地，在育雏(第8‑22天)期期间将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。此外优选地，在育雏前(第1‑7天)期和育雏(第8‑22天)期期间将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。60.在本发明中，可在动物的寿命期间将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡。优选地，从孵化开始的76周期间将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡。更优选地，在产蛋期期间(从约第18周开始)将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡。此外优选地，在产蛋期期间将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡，但在强制换羽期期间不饲喂所述酶。61.在本发明中，可在动物的寿命期间将微生物胞壁质酶饲喂给火鸡。优选地，从孵化开始的24周期间将微生物胞壁质酶饲喂给火鸡。更优选地，在从孵化开始的前16周(对于雌火鸡来说)或从孵化开始的前20周(对于雄火鸡来说)将微生物胞壁质酶饲喂给火鸡。62.在本发明中，可在动物的寿命期间将微生物胞壁质酶饲喂给生猪。优选地，在从出生开始的27周期间将微生物胞壁质酶饲喂给生猪。更优选的是，从出生到断奶(在4周时)将微生物胞壁质酶饲喂给仔猪。此外优选地，从出生开始的前6周(4周的哺乳期和断奶后2周)将微生物胞壁质酶饲喂给仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在断奶前期(pre‑starter)(断奶后的第1‑14天)期间饲喂给断奶仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在断奶期(starter)(断奶后第15‑42天)期间饲喂给断奶仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在断奶前期(断奶后第1‑14天)和断奶期(断奶后第15‑42天)期间饲喂给断奶仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在猪的生长/育肥期(出生后第10周至约第27周)饲喂给生猪。63.在本发明中，微生物胞壁质酶可为真菌来源的。优选地，微生物胞壁质酶是从或可从子囊菌门，例如盘菌亚门获得。优选地，所述微生物胞壁质酶包含一个或多个选自由gh24和gh25组成的列表的结构域。64.在本发明中，微生物胞壁质酶可与seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。65.在本发明中，微生物胞壁质酶可包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:1的氨基酸序列或其等位基因变体；或者是其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包含至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。优选地，所述微生物胞壁质酶包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:1的氨基酸序列或等位基因变体，以及n末端和/或c末端his标签和/或hq标签。更优选地，该多肽包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:1的氨基酸1至213。66.或者，微生物胞壁质酶可包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:4的氨基酸序列或其等位基因变体；或者是其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包含至少210个氨基酸，例如至少215个氨基酸、至少220个氨基酸、至少225个氨基酸、至少230个氨基酸、至少235个氨基酸或至少240个氨基酸。优选地，所述微生物胞壁质酶包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:4的氨基酸序列或等位基因变体，以及n末端和/或c末端his标签和/或hq标签。更优选地，该多肽包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:4的氨基酸1至245。67.或者，微生物胞壁质酶可包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:10的氨基酸序列或其等位基因变体；或者是其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包含至少210个氨基酸，例如至少215个氨基酸、至少220个氨基酸、至少225个氨基酸、至少230个氨基酸、至少235个氨基酸或至少240个氨基酸。优选地，所述微生物胞壁质酶包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:10的氨基酸序列或等位基因变体，以及n末端和/或c末端his标签和/或hq标签。更优选地，该多肽包含以下物质或由以下物质组成：seqidno:10的氨基酸1至208。68.在本发明中，微生物胞壁质酶可为seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或它们的任何组合。优选地，seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或它们的任何组合的位置数介于1个位置与45个位置之间，例如1‑40个位置、1‑35个位置、1‑30个位置、1‑25个位置、1‑20个位置、1‑15个位置、1‑10个位置或1‑5个位置。更优选地，seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或它们的任何组合的位置数不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。此外优选地，seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10中的取代、缺失和/或插入的数量不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。进一步优选地，seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10中的取代，优选地保守取代的数量不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。进一步优选地，seqidno:1、seqidno:4或seqidno:10中的保守取代的数量不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。69.本领域技术人员可理解，微生物胞壁质酶的多肽可具有氨基酸变化。氨基酸变化可为微小性的，即不会显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；小缺失，通常为1‑30个氨基酸的小缺失；小的氨基或羧基末端延伸，例如氨基末端甲硫氨酸残基；至多20‑25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一种功能促进纯化的小延伸，例如多组氨酸序列段(poly‑histidinetract)、抗原表位或结合结构域。70.保守取代的示例在以下项的组内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)，以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。通常不改变比活性的氨基酸取代在本领域中是已知的，并且例如由h.neurath和r.l.hill，1979在theproteins,academicpress,newyork中所描述。常见取代为ala/ser、val/ile、asp/glu、thr/ser、ala/gly、ala/thr、ser/asn、ala/val、ser/gly、tyr/phe、ala/pro、lys/arg、asp/asn、leu/ile、leu/val、ala/glu，以及asp/gly。71.多肽中的必需氨基酸可以根据本领域中已知的工序，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(cunningham和wells，1989,science244:1081‑1085)进行鉴定。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并测试所得突变分子的胞壁质酶活性以鉴定对该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见hilton等人，1996,j.biol.chem.271:4699‑4708。酶或其他生物相互作用的活性位点也可以通过对如通过例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记的技术所确定的结构的物理分析结合推定的接触位点氨基酸的突变来确定。参见例如devos等人，1992,science255:306‑312；smith等人，1992,j.mol.biol.224:899‑904；wlodaver等人，1992,febslett.309:59‑64。必需氨基酸的身份也可以从与有关多肽比对进行推断。72.如在wo2013/076253中所公开的，嗜碱枝顶孢菌cbs114.92胞壁质酶的晶体结构是以的分辨率解析的。这些原子坐标可用于生成描绘嗜碱枝顶孢菌cbs114.92胞壁质酶的结构或同源结构(例如本发明的变体)的三维模型。使用x射线结构，将氨基酸残基d95和e97(使用seqidno:1进行编号)鉴定为催化残基。73.在一个实施方式中，本发明涉及一种改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎的方法，所述方法包括向所述动物施用包含一种或多种微生物胞壁质酶的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂，其中：74.(a)所述微生物胞壁质酶是包含一个或多个选自由gh24和gh25组成的列表的结构域的微生物胞壁质酶，以300至500mg酶蛋白/kg动物饲料的水平投配；75.(b)所述动物选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡；76.(c)任选地在所述动物的寿命期间每天向所述动物饲喂所述微生物胞壁质酶至少10天。77.在另一个实施方式中，本发明涉及一种改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎的方法，所述方法包括向所述动物施用包含一种或多种微生物胞壁质酶的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂，其中：78.(a)所述微生物胞壁质酶是从或可从子囊菌门获得的gh24或gh25溶菌酶，并且以300至500mg酶蛋白/kg动物的水平投配；79.(b)所述动物选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡；并且80.(c)与阴性对照相比，褥草质量的参数中的一个参数改善了至少1％。81.在另一个实施方式中，本发明涉及一种改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎的方法，所述方法包括向所述动物施用包含一种或多种微生物胞壁质酶的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂，其中：82.(a)所述微生物胞壁质酶是从或可从子囊菌门获得的gh24或gh25溶菌酶，以300至500mg酶蛋白/kg动物饲料的水平投配；83.(b)所述动物选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡；并且84.(c)与阴性对照相比足垫皮炎减少了至少10％。85.制剂86.本发明的微生物胞壁质酶可配制为用于改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎的组合物，所述组合物也是本发明意图覆盖的内容。本发明的微生物胞壁质酶可配制为液体或固体。87.对于液体制剂，配制试剂可包括多元醇(例如甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(例如氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(例如糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨糖醇)。因此，本发明的组合物可为液体组合物，该液体组合物包含本发明的微生物胞壁质酶，以及一种或多种配制试剂，该一种或多种配制试剂选自由以下项组成的列表：甘油、乙二醇、1,2‑丙二醇、1,3‑丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨糖醇。液体制剂可以在饲料已经被制粒后喷涂到该饲料上，或者可以添加到给予动物的饮用水中。88.对于固体制剂，本发明的组合物可以例如作为颗粒、喷雾干燥的粉末或团聚物。配制试剂可包括盐(有机或无机锌、钠、钾或钙盐，例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)。89.例如，固体组合物为粒状形式的。所述颗粒可具有基质结构，组分在所述基质结构中均匀地混合。然而，所述颗粒通常包括核心粒子和一个或多个涂层，该一个或多个涂层通常是盐和/或蜡涂层。蜡的示例为聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或动物油脂，例如氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化大豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或双甘油酯，例如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；和脂肪酸，例如氢化线性长链脂肪酸及其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。所述核心粒子可为本发明的胞壁质酶任选地与一种或多种附加酶以及任选地与一种或多种盐一起组合的均匀共混物，或者具有本发明的胞壁质酶的惰性粒子任选地与施加到其上的一种或多种附加酶的组合。90.在上述颗粒中，核心粒子的材料可选自由以下项组成的组：无机盐(例如例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及黏土矿物(也称为水合页硅酸铝)。优选地，所述芯包含粘土矿物，例如高岭石或高岭土。91.盐涂层通常为至少1μm厚，并且既可以是一种特定的盐，也可以是盐(例如na2so4、k2so4、mgso4和/或柠檬酸钠)的混合物。其他示例为在例如wo2008/017659、wo2006/034710、wo1997/05245、wo1998/54980、wo1998/55599、wo2000/70034中描述的那些，或者例如在wo2001/00042中描述的聚合物涂层。92.优选地，本发明的组合物是固体组合物，该固体组合物包含本发明的胞壁质酶，以及一种或多种配制试剂，该一种或多种配制试剂选自由以下项组成的列表：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉和纤维素。更优选地，所述配制试剂选自以下化合物中的一种或多种化合物：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠和碳酸钙。此外优选地，所述固体组合物为粒状形式的。更进一步优选地，所述固体组合物为粒状形式的，并且包含核心粒、包含本发明的胞壁质酶的酶层以及盐涂层。93.优选地，所述配制试剂选自以下化合物中的一种或多种化合物：甘油、乙二醇、1,2‑丙二醇或1,3‑丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。更优选地，所述配制试剂选自以下化合物中的一种或多种化合物：1,2‑丙二醇、1,3‑丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。94.动物饲料和动物饲料添加剂95.本发明的微生物胞壁质酶还可配制为用于改善动物的褥草质量和/或减少动物的足垫皮炎的动物饲料或动物饲料添加剂，所述动物饲料或动物饲料添加剂也是本发明意图覆盖的内容。96.动物饲料组合物或日粮具有相对较高的蛋白质含量。可以如wo2001/058275的表b的第2列至第3列中所示表征家禽和猪的日粮。可如在该表b的第4列中所示表征鱼日粮。此外，此类鱼日粮的粗脂肪含量通常为200‑310g/kg。97.根据本发明的动物饲料组合物的粗蛋白含量可介于50g/kg与800g/kg之间，并且还包含如本文所述的一种或多种微生物胞壁质酶。98.此外，或者作为替代方案(相对于上述粗蛋白含量)，本发明的动物饲料组合物可具有10‑30mj/kg的可代谢能量含量；和/或0.1‑200g/kg的钙含量；和/或0.1‑200g/kg的有效磷含量；和/或0.1‑100g/kg的甲硫氨酸含量；和/或0.1‑150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量；和/或0.5‑50g/kg的赖氨酸含量。99.具体地，可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量可在wo2001/058275的表b中的范围2、3、4或5(范围2‑5)中的任一者内。100.通过kjeldahl方法(a.o.a.c.,1984,officialmethodsofanalysis，第14版，associationofofficialanalyticalchemists,washingtondc)测定氮含量，并且粗蛋白计算为氮(n)乘以因子6.25(即粗蛋白质(g/kg)＝n(g/kg)×6.25)。101.可以根据nrc出版物nutrientrequirementsinswine，1988年第9次修订版，国家研究委员会农业委员会动物营养分会猪营养小组(subcommitteeonswinenutrition,committeeonanimalnutrition,boardofagriculture,nationalresearchcouncil)，nationalacademypress,washington,d.c.，第2‑6页和europeantableofenergyvaluesforpoultryfeed‑stuffs,斯皮尔德霍尔特家禽研究和推广中心(spelderholtcentreforpoultryresearchandextension),7361dabeekbergen,thenetherlands.grafischbedrijfponsen&looijenbv,wageningen.isbn90‑71463‑12‑5来计算可代谢能量。102.全饲动物日粮中钙、有效磷和氨基酸的日粮含量是根据饲料表计算的，诸如veevoedertabel1997,gegevensoverchemischesamenstelling,verteerbaarheidenvoederwaardevanvoedermiddelen,centralveevoederbureau,runderweg6,8219pklelystad.isbn90‑72839‑13‑7。103.本发明的动物饲料组合物可含有如上所定义的至少一种植物蛋白。104.本发明的动物饲料组合物还可含有动物蛋白，诸如肉粉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉，通常含量为0‑25％。本发明的动物饲料组合物还可包含通常量为0‑30％的具有可溶物的干蒸馏酒粕(ddgs)。105.优选地，本发明的动物饲料组合物含有0‑80％的玉蜀黍；和/或0‑80％的高粱；和/或0‑70％的小麦；和/或0‑70％大麦；和/或0‑30％的燕麦；和/或0‑40％的豆粕；和/或0‑25％的鱼粉；和/或0‑25％的肉粉和骨粉；和/或0‑20％的乳清。106.优选地，本发明的动物饲料包含植物蛋白。植物蛋白的蛋白质含量为至少10％(w/w)、20％(w/w)、30％(w/w)、40％(w/w)、50％(w/w)、60％(w/w)、70％(w/w)、80％(w/w)或90％(w/w)。107.在本发明中，植物蛋白可源自植物蛋白源，诸如豆类和谷类，例如来自豆科(豆科植物类)、十字花科、藜科和禾本科的材料，诸如大豆粉、羽扇豆粉、菜籽粉，以及它们的组合。108.植物蛋白源可以是来自豆科的一种或多种植物(例如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。植物蛋白源也可以是来自藜科的一种或多种植物(例如甜菜、糖用甜菜、菠菜或藜麦)的材料。植物蛋白来源的其他示例是油菜籽和卷心菜。大豆是优选的植物蛋白源。植物蛋白源的其他示例是谷类，诸如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻米和高粱。109.动物日粮可以例如制成糊状饲料(非粒状)或粒状饲料。通常，将研磨的饲料原料混合，并根据所涉及的种类的规格要求添加足够量的必要维生素和矿物质。酶可以作为固体或液体酶制剂添加。例如，对于糊状饲料，可以在成分混合步骤之前或期间添加固体或液体酶制剂。对于粒状饲料，也可以在饲料成分步骤之前或期间添加(液体或固体)胞壁质酶/res28:304‑305)。这种iub‑mb酶命名法是基于其底物特异性，有时是基于其分子机理；此类分类未反映这些酶的结构特征。120.在henrissat等人，“thecarbohydrate‑activeenzymesdatabase(cazy)，2013”,nucl.acidsres.(2014年1月1日)42(d1):d490‑d495中描述了某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、胞壁质酶和半乳糖苷酶)的另一种分类；还参见www.cazy.org。121.因此，本发明的组合物或动物饲料或动物饲料添加剂还可包含至少一种选自由以下项组成的组的其他酶：植酸酶(ec3.1.3.8或3.1.3.26)、木聚糖酶(ec3.2.1.8)；半乳聚糖酶(ec3.2.1.89)；α‑半乳糖苷酶(ec3.2.1.22)；蛋白酶(ec3.4)；磷脂酶a1(ec3.1.1.32)；磷脂酶a2(ec3.1.1.4)；溶血磷脂酶(ec3.1.1.5)；磷脂酶c(3.1.4.3)；磷脂酶d(ec3.1.4.4)；淀粉酶，诸如α‑淀粉酶(ec3.2.1.1)；阿拉伯呋喃糖苷酶(ec3.2.1.55)；β‑木糖苷酶(ec3.2.1.37)；乙酰木聚糖酯酶(ec3.1.1.72)；阿魏酸酯酶(ec3.1.1.73)；纤维素酶(ec3.2.1.4)；纤维二糖水解酶(ec3.2.1.91)；β‑葡萄糖苷酶(ec3.2.1.21)；支链淀粉酶(ec3.2.1.41)、α‑甘露糖苷酶(ec3.2.1.24)、甘露聚糖酶(ec3.2.1.25)和β‑葡聚糖酶(ec3.2.1.4或ec3.2.1.6)，或它们的任何组合。122.可商购获得的植酸酶的示例包括bio‑feedtm植酸酶(novozymes)、p、np和hiphos(dsmnutritionalproducts)、natuphostm(basf)、和blue(abenzymes)、(huvepharma)xp(verenium/dupont)和phy(dupont)。其他优选的植酸酶包括在例如wo98/28408、wo00/43503和wo03/066847中描述的那些。123.可商购获得的木聚糖酶的示例包括wx和g2(dsmnutritionalproducts)、xt和barley(abvista)、(verenium)、x(huvepharma)和xb(木聚糖酶/β‑葡聚糖酶，dupont)。124.可商购获得的蛋白酶的示例包括proact(dsmnutritionalproducts)。125.微生物126.在本发明中，该组合物或动物饲料或动物饲料添加剂还可包含一种或多种附加微生物。例如，该组合物或动物饲料还包含来自以下属中的一种或多种属的细菌：乳杆菌属(lactobacillus)、乳球菌属(lactococcus)、链球菌属(streptococcus)、芽孢杆菌属(bacillus)、片球菌属(pediococcus)、肠球菌属(enterococcus)、明串珠菌属(leuconostoc)、肉食杆菌属(carnobacterium)、丙酸杆菌属(propionibacterium)、双歧杆菌属(bifidobacterium)、梭菌属(clostridium)和巨型球菌属(megasphaera)，或它们的任何组合。127.优选地，本发明的组合物或动物饲料或动物饲料添加剂还包含来自以下菌株中的一种或多种菌株的细菌：枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)、蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)、短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)、多粘芽孢杆菌(bacilluspolymyxa)、巨大芽孢杆菌(bacillusmegaterium)、凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)、环状芽孢杆菌(bacilluscirculans)、屎肠球菌(enterococcusfaecium)、肠球菌属(enterococcusspp)、和片球菌属(pediococcusspp)、乳杆菌属(lactobacillusspp)、双歧杆菌属(bifidobacteriumspp)、嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)、嗜酸片球菌(pediococsusacidilactici)、乳酸乳球菌(lactococcuslactis)、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)、特氏丙酸杆菌(propionibacteriumthoenii)、香肠乳杆菌(lactobacillusfarciminus)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)、丁酸梭菌(clostridiumbutyricum)、动物双歧杆菌动物亚种(bifidobacteriumanimalisssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌(lactobacillusreuteri)、唾液乳杆菌唾液亚种(lactobacillussalivariusssp.salivarius)、埃氏巨型球菌(megasphaeraelsdenii)、丙酸杆菌属(propionibacteriasp)。128.更优选地，本发明的组合物或动物饲料或动物饲料添加剂还包含来自以下枯草芽孢杆菌菌株中的一种或多种菌株的细菌：3a‑p4(pta‑6506)、15a‑p4(pta‑6507)、22c‑p1(pta‑6508)、2084(nrrlb‑500130)、lssa01(nrrl‑b‑50104)、bs27(nrrlb‑50105)、bs18(nrrlb‑50633)、bs278(nrrlb‑50634)、dsm29870、dsm29871、nrrlb‑50136、nrrlb‑50605、nrrlb‑50606、nrrlb‑50622和pta‑7547。129.更优选地，本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还包含来自以下短小芽孢杆菌菌株中的一种或多种菌株的细菌：nrrlb‑50016、atcc700385、nrrlb‑50885或nrrlb‑50886。130.更优选地，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料还包含来自以下地衣芽孢杆菌菌株中的一种或多种菌株的细菌：nrrlb50015、nrrlb‑50621或nrrlb‑50623。131.更优选地，本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还包含来自以下解淀粉芽孢杆菌菌株中的一种或多种菌株的细菌：dsm29869、dsm29872、nrrlb50607、pta‑7543、pta‑7549、nrrlb‑50349、nrrlb‑50606、nrrlb‑50013、nrrlb‑50151、nrrlb‑50141、nrrlb‑50147或nrrlb‑50888。132.本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂中的细菌菌株中的每种细菌菌株的细菌计数介于1×104cfu/kg干物质与1×1014cfu/kg干物质之间，优选地介于1×106cfu/kg干物质与1×1012cfu/kg干物质之间，更优选在1×107cfu/kg干物质与1×1011cfu/kg干物质之间，最优选地介于1×108cfu/kg干物质与1×1010cfu/kg干物质之间。133.本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂中的细菌菌株中的每种细菌菌株的细菌计数介于1×105cfu/动物/天与1×1015cfu/动物/天之间，优选地介于1×107cfu/动物/天与1×1013cfu/动物/天之间，更优选地介于1×108cfu/动物/天与1×1012cfu/动物/天之间，并且最优选地介于1×109cfu/动物/天与1×1011cfu/动物/天之间。134.在本发明中，一种或多种细菌菌株可以以稳定孢子的形式存在。135.预混物136.在本发明中，组合物、动物饲料或动物饲料添加剂可包含预混物，该预混物包含例如维生素、矿物质、酶、氨基酸、防腐剂、抗生素、其他饲料成分或它们的任何组合，这些物质被混合到动物饲料中。137.氨基酸138.本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含一种或多种氨基酸。所述氨基酸的示例包括但不限于赖氨酸、丙氨酸、β‑丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。139.维生素和矿物质140.本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂可包含一种或多种维生素，例如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。任选地，本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂可包含一种或多种矿物质，例如一种或多种微量矿物质和/或一种或多种常量矿物质。141.通常脂溶性维生素和水溶性维生素以及微量矿物质形成了旨在添加到饲料中的所谓预混物的一部分，而常量矿物质通常单独添加到饲料中。142.脂溶性维生素的非限制性示例包括维生素a、维生素d3、维生素e和维生素k，例如维生素k3。143.水溶性维生素的非限制性示例包括维生素b12、生物素和胆碱、维生素b1、维生素b2、维生素b6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如ca‑d‑泛酸盐。144.微量矿物质的非限制性示例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、硒和锌。145.常量矿物质的非限制性示例包括钙、镁、钾和钠。146.这些组分(以家禽和仔猪/猪例示)的营养需求列于wo2001/058275的表a中。营养需求意味着应在日粮中以指定的浓度提供这些组分。147.或者，本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂包含wo01/58275的表a中指定的单独组分中的至少一种组分。至少一种是指以下中的一种或多种：一种或两种、三种、或四种等等直至全部十三种，或直至全部十五种单独组分。更具体地，该至少一种单独组分以特定量包含在本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂中，以提供在表a的第四列、第五列或第六列所示范围内的饲料内浓度。148.优选地，本发明的动物饲料添加剂包含以下维生素中的至少一种维生素，以提供在下表1中规定的范围内的饲料内浓度(分别用于仔猪和肉鸡日粮)。149.表1：典型的维生素建议[0150][0151]其他饲料成分[0152]本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含着色剂、稳定剂、促生长添加剂和芳香化合物/调味剂、多不饱和脂肪酸(pufa)；产活性氧的物质、抗微生物肽和抗真菌多肽。[0153]着色剂的示例是类胡萝卜素，例如β‑胡萝卜素、虾青素和叶黄素。[0154]稳定剂(例如酸化剂)的示例是有机酸。这些有机酸的示例是苯甲酸(dsmnutritionalproducts)、甲酸、丁酸、富马酸和丙酸。[0155]芳香化合物/调味剂的示例是甲酚、茴香脑、十内酯、十一内酯和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜醇、哌啶、亚丙基苯并呋喃酮(propylidenephatalide)、亚丁基苯并呋喃酮、辣椒素和单宁。[0156]多不饱和脂肪酸的示例是c18、c20和c22多不饱和脂肪酸，例如花生四烯酸、二十二碳六烯酸，二十碳五烯酸和γ‑亚油酸。[0157]产活性氧的物质的示例是化学物质，例如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐；以及酶，例如氧化酶、加氧酶或合成酶。[0158]抗微生物肽(amp's)的示例是cap18、林可霉素a、三丁酸甘油酯，protegrin‑1、thanatin、防御素、乳铁蛋白、乳铁素和ovispirin(例如novispirin)(robertlehrer,2000)、菌丝霉素和他汀类，包括wo03/044049和wo03/048148中所公开的化合物和多肽，以及上述的保留抗微生物活性的变体或片段。[0159]抗真菌多肽(afp's)的示例是巨大曲霉(aspergillusgiganteus)肽和黑曲霉(aspergillusniger)肽，以及它们的保留抗真菌活性的变体和片段，如在wo94/01459和wo02/090384中所公开的。[0160]微生物溶菌酶的用途[0161]在另一方面中，本发明涉及组合物、动物饲料或动物饲料添加剂用于改善单胃动物的褥草质量和/或减少单胃动物的足垫皮炎的用途，其中所述组合物、所述动物饲料或所述动物饲料添加剂包含一种或多种微生物胞壁质酶。[0162]在本发明中，微生物胞壁质酶可以100mg酶蛋白/kg动物饲料至1000mg酶蛋白/kg动物饲料，例如200mg酶蛋白/kg动物饲料至900mg酶蛋白/kg动物饲料、300mg酶蛋白/kg动物饲料至800mg酶蛋白/kg动物饲料、400mg酶蛋白/kg动物饲料至700mg酶蛋白/kg动物饲料、500mg酶蛋白/kg动物饲料至600mg酶蛋白/kg动物饲料，或这些区间的任何组合的水平投配。[0163]在本发明中，所述单胃动物可选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、家禽、火鸡、鸭子、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡、猫、狗、马、甲壳类动物、基围虾、对虾、鱼类、青甘鱼、巨滑舌鱼、鲃鱼、鲈鱼、扁鲹、鲮脂鲤科、鳊鱼、大头鱼、大盖巨脂鲤、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉魮、虱目鱼、红点鲑、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、莓鲈、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、花身副丽鱼、大比目鱼、爪哇鱼、野鲮属、濑鱼、泥鳅、鲭鱼、遮目鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕克鱼、绿腹丽鱼、银汉鱼、河鲈鱼、梭子鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、长丝异鳃鲶、大眼鰤鲈、海鲈鱼、海鲷、闪光鱼、鲈塘鳢、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、鳎、蓝子鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼、丁鲷、皇冠鱼、罗非鱼、鳟鱼、金枪鱼、大菱鲆、白鳟鱼、玻璃梭鲈、和白鲑鱼。优选地，所述单胃动物选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、家禽、火鸡、鸭子、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡。更优选地，所述单胃动物选自由以下项组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、雏鸡、肉鸡、蛋鸡和小鸡。[0164]在本发明中，可以从出生直到屠宰将微生物胞壁质酶饲喂给动物。优选地，从出生直到屠宰每天将微生物胞壁质酶饲喂给动物。更优选地，在动物的寿命期间每天将微生物胞壁质酶饲喂给该动物达至少10天，例如至少15天或至少20天(其中这些天可为连续或不连续的)。在一个实施方式中，将微生物胞壁质酶饲喂给动物10‑20天，之后是5‑10天的非治疗期，并且将该循环在该动物的寿命期间重复。[0165]在本发明中，可在孵化后的前49天将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。优选地，在孵化后的前36天将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。更优选地，在孵化后的第22天至第36天将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。此外优选地，在育雏前(pre‑starter)期(第1‑7天)期间将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。此外优选地，在育雏(第8‑22天)期期间将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。此外优选地，在育雏前(第1‑7天)期和育雏(第8‑22天)期期间将微生物胞壁质酶饲喂给肉鸡。[0166]在本发明中，可在动物的寿命期间将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡。优选地，在从孵化开始的76周期间将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡。更优选地，在产蛋期期间(从约第18周开始)将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡。此外优选地，在产蛋期期间将微生物胞壁质酶饲喂给蛋鸡，但在强制换羽期期间不饲喂所述酶。[0167]在本发明中，可在动物的寿命期间将微生物胞壁质酶饲喂给火鸡。优选地，在从孵化开始的24周期间将微生物胞壁质酶饲喂给火鸡。更优选地，从孵化开始的前16周(对于雌火鸡来说)或从孵化开始的前20周(对于雄火鸡来说)期间将微生物胞壁质酶饲喂给火鸡。[0168]在本发明中，可在动物的寿命期间将微生物胞壁质酶饲喂给生猪。优选地，在从出生开始的27周期间将微生物胞壁质酶饲喂给生猪。更优选的是，从出生到断奶(在4周时)将微生物胞壁质酶饲喂给仔猪。此外优选地，在从出生开始的前6周(4周的哺乳期和断奶后2周)期间将微生物胞壁质酶饲喂给仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在断奶前期(pre‑starter)(断奶后的第1‑14天)期间饲喂给断奶仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在断奶期(starter)(断奶后第15‑42天)期间饲喂给断奶仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在断奶前期(断奶后第1‑14天)和断奶期(断奶后第15‑42天)期间饲喂给断奶仔猪。此外优选地，将微生物胞壁质酶在猪的生长/育肥期(出生后第10周至约第27周)饲喂给生猪。[0169]在本发明中，微生物胞壁质酶可为真菌来源的。优选地，微生物胞壁质酶是从或可从子囊菌门，例如盘菌亚门获得。优选地，所述微生物胞壁质酶包含一个或多个选自由gh24和gh25组成的列表的结构域。[0170]实施例[0171]菌株[0172]囊状长毛盘菌cbs804.70购自centraalbureauvoorschimmelcultures(utrecht,thenetherlands)。根据centralbureauvorschnimmelkulture，囊状长毛盘菌cbs804.70是在1968年5月从英国斯塔福德郡的煤矸石表土中分离出的。[0173]根据centralbureauvorschnimmelkulture，嗜碱枝顶孢菌cbs114.92是由a.yoneda在1984年从日本津久井湖附近的猪粪堆肥的污泥中分离出的。[0174]培养基和溶液[0175]yp+2％葡萄糖培养基由1％的酵母提取物、2％的蛋白胨和2％的葡萄糖构成。[0176]yp+2％麦芽糖糊精培养基由1％的酵母提取物、2％的蛋白胨和2％的麦芽糖糊精构成。[0177]pda琼脂平板由马铃薯浸出液(马铃薯浸出液是通过将300g切片的(洗净但未去皮)的马铃薯在水中煮30分钟，然后经由粗棉布(cheesecloth)倾析或过滤)制成的)构成。然后添加蒸馏水直到悬浮液的总体积为1升，之后添加20克的右旋糖和20g的琼脂粉。将培养基在15psi下高压灭菌15分钟(bacteriologicalanalyticalmanual，第8版，a修订版，1998)。[0178]lb平板由10g的bacto‑tryptone、5g的酵母提取物、10g的氯化钠、15g的bacto‑agar和补足至1升的去离子水构成。[0179]lb培养基由10g的bacto‑tryptone、5g的酵母提取物、10g的氯化钠和补足至1升的去离子水构成。[0180]cove蔗糖平板由342g的蔗糖、20g的琼脂粉、20ml的cove盐溶液和补足至1升的去离子水构成。将培养基在15psi下高压灭菌15分钟(bacteriologicalanalyticalmanual，第8版，a修订版，1998)。将培养基冷却至60℃，并添加10mm乙酰胺、15mmcscl、x‑100(50μl/500ml)。[0181]cove盐溶液由26gmgso4·7h2o、26gkcl、26gkh2po4、50mlcove微量金属溶液和补足至1升的去离子水构成。[0182]cove微量金属溶液由0.04gna2b4o7·10h2o、0.4gcuso4·5h2o、1.2gfeso4·7h2o、0.7gmnso4·h2o、0.8gna2moo4·2h2o、10gznso4·7h2o和补足至1升的去离子水构成。[0183]实施例1：来自嗜碱枝顶孢菌cbs114.92的gh25胞壁质酶的克隆、表达和纯化[0184]将来自嗜碱枝顶孢菌cbs114.92的gh25胞壁质酶(seqidno:1)如在wo2013/076253的实施例8中所述进行克隆和表达，并如在wo2013/076253的实施例5中所述进行纯化。或者，可将seqidno:10如在wo2013/076253的实施例2中所述进行克隆和表达。[0185]实施例2：来自囊状长毛盘菌的gh24胞壁质酶的表达[0186]将该真菌菌株在1000ml锥形摇瓶中的100ml的yp+2％葡萄糖培养基中在20℃下培养5天。通过将培养基滤过衬有(emdmillipore,billerica,ma,usa)的布氏真空漏斗，从烧瓶中收获菌丝体。将菌丝体在液氮中冷冻，并在‑80℃下存储直至进一步使用。根据制造商的使用说明，使用plantmaxi试剂盒(qiagengmbh,hildengermany)分离出基因组dna。[0187]由illuminamyseq公司(illuminainc.,sandiego,ca)生成基因组序列信息。根据制造商的使用说明，用5μg的分离出的囊状长毛盘菌基因组dna进行文库制备和分析。采用100bp的配对末端策略以及200‑500bp的文库插入大小。使用hiseq运行的一半来获得总共95,744,298，100bp的原始读段。随后将所述读段分割为25％，之后进行剪切(提取phred得分为10分或更高的最长子序列)。使用idba版本0.19装配这些读段。将短于400bp的重叠群丢弃，从而产生具有10,035的n‑50的8,954,791,030bp。使用genemark.hmmes版本2.3c对基因进行调用，并使用由pfam提供的“噬菌体胞壁质酶pf00959”进行催化结构域的鉴定。如下所述，通过使用引物f‑80470和r‑80470(分别为seqidno:6和seqidno:7)的pcr，从囊状长毛盘菌cbs804.70基因组dna克隆出整个编码区的多肽编码序列。[0188]5'‑acacaactggggatccaccatgcacgctctcacccttct‑3'(seqidno:6)[0189]5'‑ctagatctcgagaagcttttagcacttgggagggtggg‑3'(seqidno:7)[0190]粗体字表示囊状长毛盘菌的酶编码序列。限制性位点是带下划线的。限制性位点左侧的序列与pdau109的插入位点同源(wo2005/042735)。[0191]使用2倍浓度的extensorhifipcr混合物(thermoscientific产品目录号ab‑0795)进行实验。[0192]根据制造商的使用说明(thermoscientific产品目录号ab‑0795)，使用以下最终浓度执行扩增反应(25μl)：[0193]pcr混合物：[0194]0.5μm的引物f‑80470[0195]0.5μm的引物r‑80470[0196]12.5μl的extensorhifipcr混合物，2倍浓度[0197]11.0μl的h2o[0198]10ng的囊状长毛盘菌cbs804.70基因组dna。[0199]将pcr反应在dual‑block热循环仪(biorad,usa)中进行孵育，该热循环仪被编程为：1个循环的在94℃下30秒；30个循环的各自在94℃下30秒、在52℃下30秒并且在68℃下60秒，之后是1个循环的在68℃下6分钟。将样品经冷却至10℃，然后取出并进一步处理。[0200]通使用40mmtris碱、20mm乙酸钠、1mmedta二钠(tae)缓冲液进行1％琼脂糖凝胶电泳来分析3μl的pcr反应。观察到了约946bp的主条带。剩余的pcr反应直接根据制造商的说明用illustratmgfxtmpcrdna和凝胶条带纯化试剂盒(gehealthcare,piscataway,nj,usa)进行纯化。[0201]将2μg的质粒pdau109用bamhi和hindiii进行酶切消化，将经酶切消化的质粒在使用50mmtris碱‑50mm硼酸‑1mmedta二钠(tbe)缓冲液的1％琼脂糖凝胶上跑样，以便从受限质粒中去除填充片段。通过添加safedna凝胶染色剂(lifetechnologiescorporation,grandisland,ny,usa)和使用470nm波长的透照仪，使条带可视化。使用illustratmgfxtmpcrdna和凝胶条带纯化试剂盒切下和纯化与受限质粒相对应的条带。将质粒洗脱到10mmtrisph8.0中，并将其浓度调节至20ng/μl。使用in‑pcr克隆试剂盒(clontechlaboratories,inc.,mountainview,ca,usa)将983bp的pcr片段克隆到用bamhi和hindiii酶切消化的pdau109中(20ng)。总反应体积为10μl。总反应体积为10μl。根据制造商的方案将in‑反应转化到fusion‑bluetm大肠杆菌(e.coli)细胞(clontechlaboratories,inc.,mountainview,ca,usa)中，并铺平板到每ml补充有50μg氨苄青霉素的lb脂平板上。在37℃孵育过夜后，观察到转化克隆在每ml补充有50μg氨苄青霉素的lb平板上在选择条件下生长。[0202]使用下面描述的pdau109载体引物，通过克隆pcr选择几个菌落用于进行分析。用黄色接种针(nunca/s,denmark)将四个菌落从每ml补充有50μg氨苄青霉素的lb平板转移到新的每ml补充有50μg氨苄青霉素的lb平板，并在37℃下孵育过夜。[0203]引物8653：5'‑gcaagggatgccatgcttgg‑3'(seqidno:8)[0204]引物8654：5'‑catataaccaattgccctc‑3'(seqidno:9)[0205]将三个菌落中的每个菌落直接转移到200μlpcr试管中，所述pcr试管由5μl的2xextensorhifipcr混合物(thermofisherscientific,rockford,il,usa)、0.5μl的引物8653(10pm/μl)、0.5μl的引物8654(10pm/μl)和4μl的去离子水构成。将每个菌落pcr在dual‑block热循环仪中孵育，该热循环仪被编程为：1个循环的在94℃下60秒；30个循环的各自在95℃下30秒、在60℃下45秒、在72℃下60秒、在68℃下10分钟，以及在10℃下10分钟。[0206]将3μl的每个完成的pcr反应提交到使用tae缓冲液的1％琼脂糖凝胶电泳。所有四个大肠杆菌转化体均显示出约980bp的pcr条带。使用qiaprepspinminiprep试剂盒(qiagengmbh,hildengermany)从四个菌落中的每个菌落中分离出质粒dna。使用采用3.1版big‑dyetm终止子化学品的appliedbiosystems型号3730自动dna测序仪(appliedbiosystems,inc.,fostercity,ca,usa)，用引物8653和8654(seqidno:8和seqidno:9)对所得质粒dna进行测序。将被命名为pkksc0312‑2的一个质粒选择用于转化米曲霉(aspergillusoryzae)mt3568。米曲霉mt3568是米曲菌jal355的amds(乙酰胺酶)被破坏的基因衍生物(wo2002/40694)，其中通过对米曲霉amds基因进行灭活来恢复pyrg营养缺陷型。根据欧洲专利ep0238023，第14‑15页中所述的方法制备米曲霉mt3568的原生质体。[0207]使含有pkksc0312‑2的大肠杆菌3701根据制造商的使用说明(genomed)生长过夜，并使用质粒midikit(genomedjetquick试剂盒，产品目录号400250,genomedgmbh,germany)根据制造商的使用说明分离pkksc0312‑2的质粒dna。将经纯化的质粒dna转化到米曲菌mt3568中。根据christensen等人，1988,bio/technology6:1419‑1422的方法制备米曲霉mt3568原生质体。选择平板由具有+10mm乙酰胺+15mmx‑100(50μl/500ml)的cove蔗糖组成。将平板在37℃下孵育。简单地说，将代表3μgdna的8μl质粒dna添加到100μl的mt3568原生质体中。添加250μl的60％peg溶液，并将试管轻轻地混合并在37℃下孵育30分钟。将混合物添加到10ml的预融的cove顶层琼脂糖中(使顶层琼脂糖融化，然后在温水浴中使温度平衡到40℃，随后添加到原生质体混合物中)。然后将组合的混合物在两个具有10mm乙酰胺的cove蔗糖选择陪替氏平皿上铺平板。将平板在37℃下孵育4天。通过在使用选择乙酰胺作为碳源的平板上生长来鉴定出单个曲霉属转化菌落。将四种米曲霉转化体中的每一种米曲霉转化体接种到在96孔深平板中750μl的补充有2％葡萄糖以及还有750μl的2％麦芽糖糊精和dap4c的yp培养基中，并在37℃静置孵育4天。同时将四种转化体在cove‑2蔗糖琼脂培养基上进行重划线。[0208]然后通过根据制造商的建议使用10％bis‑trissds凝胶(invitrogen,carlsbad,ca,usa)进行sds‑page，分析来自米曲菌转化体的培养液的gh24多肽产量。观察到了米曲菌转化体中的每种米曲菌转化体的在约27kda处的蛋白质条带。将一种米曲菌转化体在含有100mldap4c培养基的1000ml锥形摇瓶中在26℃下在85rpm的搅动下培养4天。[0209]实施例3：来自囊状长毛盘菌的gh24胞壁质酶的纯化[0210]将来自实施例2的具有gh24胞壁质酶的发酵上清液滤过具有0.22μm截止限的快速pes瓶盖过滤器。将所得溶液用5mm的乙酸钠，ph4.5进行渗滤，并在具有10kda截止膜的超滤装置(sartorius)上浓缩(体积减少了10倍)。[0211]在预处理后，将约275ml的含胞壁质酶的溶液通过以下方式进行纯化：在xk26柱中的sp琼脂糖凝胶(约60ml)上进行层析，用0％至100％梯度的缓冲液a(50mm乙酸钠，ph4.5)和缓冲液b(50mm乙酸钠+1mnacl，ph4.5)在10个柱体积上洗脱结合的胞壁质酶。基于色谱图(280nm和254nm处的吸收)和sds‑page分析，将来自柱的级分进行合并。[0212]如从sds‑page所估计的，分子量为约27kda并且纯度>90％。[0213]实施例4：来自囊状长毛盘菌的gh24胞壁质酶的其他特性[0214]n末端序列的测定如下：ypvktdl。[0215]来自该成熟序列的计算分子量为26205.5da(m+h)+。[0216]通过完整分子量分析测定的分子量为26205.3da。(m+h)+。[0217]成熟序列(来自edmann末端测序数据、完整分子量分析和蛋白质组学分析)：[0218]ypvktdlhcrsspstsasivrtyssgtevqiqcqttgtsvqgsnvwdktqhgcyvadyyvktghsgifttkcgsssgggsckpppinaatvalikefegfvpkpapdpiglptvgyghlcktkgckevpysfpltqetatkllqsdiktftscvsnyvkdsvklndnqygalaswafnvgcgnvqtsslikrlnagenpntvaaqelpkwkyaggkvmpglvrrrnaevalfkkpssvqahppkc(seqidno:4)。[0219]实施例5：胞壁质酶活性的测定[0220]胞壁质酶活性是通过测量在540nm处在分光光度计中测量的重悬的溶壁微球菌(micrococcuslysodeikticus)attc编号4698(sigma‑aldrichm3770)或不死微小杆菌(exiguobacteriumundea)(dsm14481)溶液的吸光度/光密度的降低(下降)而测定的。[0221]溶壁微球菌底物的制备[0222]在使用前，将细胞在柠檬酸‑磷酸盐缓冲液，ph6.5中重新悬浮至浓度为0.5mg细胞/ml，并测量540nm处的光密度(od)。然后调整细胞悬液，使细胞浓度等同于od540＝1.0。然后将经调整的细胞悬液在使用前冷藏。重悬的细胞在4小时内使用。[0223]不死微小杆菌底物的干燥细胞的制备[0224]使不死微小杆菌的培养物(dsm14481)在500ml摇瓶中的100mllb培养基(fluka51208，25g/l)中在30℃、250rpm下生长过夜。然后将过夜培养物在20℃和5000g下离心10分钟，并将沉淀用无菌milliq水洗涤两次，并在milli‑q水中重悬。将经洗涤的细胞在13000rpm下离心1分钟，并将尽可能多的上清液倾析出。将经洗涤的细胞在真空离心机中干燥1小时。将细胞团块在柠檬酸‑磷酸盐缓冲液ph4、ph5或ph6中重悬，使得540nm处的光密度＝1。[0225]以浊度测定测量胞壁质酶的抗微生物活性[0226]将待测量的胞壁质酶样品在柠檬酸‑磷酸盐缓冲液ph4、ph5或ph6中稀释至100‑200mg酶蛋白/l的浓度，并且在冰上保存直至使用。在96孔微量滴定板(nunc)中，将200μl的底物添加到每个孔中，并将平板在versamax酶标仪(moleculardevices)中在37℃下孵育5分钟。在培养后，在540nm处测量每个孔的吸光度(开始值)。为了开始活性测量，将20μl稀释的胞壁质酶样品添加到每种底物(200μl)中，并在37℃下开始对540nm处的吸光度的动力学测量达最少30分钟至24小时。监测每个孔的所测量的在540nm处的吸光度，并且如果胞壁质酶具有胞壁质酶活性，则随着时间推移看到吸光度下降。结果呈现在下表2中。[0227]表2：如通过光密度下降测量的胞壁质酶对溶壁微球菌和不死微小杆菌的活性[0228][0229]1‑表示无影响；+表示小影响；++表示中等影响；+++表示大影响。括号中的ph值列出了基于胞壁质酶‑底物组合的测定所用的ph。[0230]数据证明，来自原鸡的gh22胞壁质酶、来自囊状长毛盘菌的gh24胞壁质酶和来自嗜碱枝顶孢菌的gh25胞壁质酶均具有胞壁质酶活性。[0231]实施例6：肉鸡体内试验1[0232]材料和方法[0233]根据vichgl9(gcp，兽医药品注册技术要求国际协调会，良好临床实践(internationalcooperationonharmonisationoftechnicalrequirementsforregistrationofveterinarymedicinalproducts,goodclincalpractice))，2000年6月，2001年7月生效，在poulpharm动物试验场(pontstraat93,8551heestert,belgium)执行试验。一日龄肉用小公鸡(“ross308”)由商业孵化场(broeierijvervaeke‑belavi,oudekapellestraat65,8700tieltbelgim)供应。[0234]动物和笼养[0235]在到达的当天(第1天)，将雏鸡随机分成各具有30只家禽的多组。将每组放置在一个散落着木屑的地面鸡圈(floor‑pen)中，并且分配为不同处理中的一种处理。[0236]每种处理使用12个组重复。将所述雏鸡笼养在环境受控的房间中。住处由使用以规律间距放置在天花板上的tl灯泡进行的人工照明照射。室温和相对湿度适应于家禽的年龄。[0237]饲喂和处理[0238]实验日粮(育雏日粮和生长日粮)基于玉蜀黍、小麦和豆粕作为主要成分(表3)。日粮被配制为对于育雏期而言含有209.8g粗蛋白和12.2mj/kgmen，并且对于生长期而言含有190.9g粗蛋白和12.53mj/kgmen。基础日粮不含任何抗球虫药。[0239]表3：基础实验日粮的组成和营养含量[0240][0241][0242]1每千克日粮所提供的维生素‑矿物质预混物：维生素a：10'000i.u.；维生素e：40i.u.；维生素k3：3.0mg；维生素c：100mg；维生素b1：2.50mg；维生素b2：8.00mg；维生素b6：5.00mg；维生素b12：0.03mg；烟酸：50.0mg；泛酸钙：12.0mg；叶酸：1.50mg；0.15mg生物素；胆碱：450mg；乙氧基喹：54mg；na：1.17g；mg：0.8g；mn：80mg；fe：60mg；cu：30mg；zn：54mg；i：1.24mg；co：0.6mg；se：0.3mg[0243]1不含抗球虫药；2用ec方程式计算出的所饲喂的日粮补充有如下的gh25胞壁质酶(seqidno:1)(活性65,5000lsu(f)/g)或不补充：[0244]表4：饲喂方案[0245]组别名称说明剂量(lsu/kg饲料)t1阴性对照(nc)‑t2低剂量胞壁质酶25000lsu/kgt3胞壁质酶rd35000lsu/kgt4高剂量胞壁质酶45000lsu/kg[0246]实验参数和分析[0247]从d1(第1天)直到d36(第36天)研究结束，由经验丰富的家畜饲养人员每天至少一次地进行总体健康观察并做记录。[0248]在d16(第16天)、d23(第23天)和d36，使用水分计在3个点测量褥草的相对湿度。[0249]在对所有家禽进行研究的最后一周，使用以下基于家禽福利质量评定方案(2009)(welfarequalityassessmentprotocolforpoultry(2009))的0‑2评分系统确定所有家禽的足垫皮炎(http://www.welfarequality.net/network/45848/7/0/40)：[0250]0：没有小表面损伤[0251]1：足垫明显变色、表面损伤、深色乳突[0252]2：明显大小的溃疡或刮屑、出血迹象或严重肿胀的足垫。[0253]足垫损伤的严重程度表示为每个鸡圈的足垫得分(fps)。该得分计算如下：100％*((0.5*得分为1的家禽总数)+(2*得分为2的家禽总数))/进行评分的家禽的总数。群fps范围从0(所有家禽没有损伤)至200(所有家禽的得分均为2)。使用线性回归模型(r的核心包的程序im)分析鸡圈fps。[0254]结果和讨论[0255]表5中显示了每个研究日和每个处理组的褥草的平均相对湿度。[0256]表5[0257][0258]在d36时，与阴性对照相比，胞壁质酶处理组的褥草相对湿度显著较低，并且低剂量胞壁质酶组和高剂量胞壁质酶组的褥草相对湿度趋于较低。这些结果表明胞壁质酶具有抗湿褥草的效应。[0259]每个处理组的平均鸡圈足垫损伤得分如表6所示。[0260]表6[0261]组别名称足垫损伤得分的平均值t117t214t38t411[0262]与阴性对照相比，胞壁质酶处理组显示出较低的鸡圈足垫损伤得分。特别地，高剂量胞壁质酶组显示出最低的鸡圈足垫损伤得分。[0263]结论[0264]在研究中获得的结果表明，包含微生物胞壁质酶有效地降低了肉用仔鸡的褥草湿度并且有效地减少了肉用仔鸡的足垫皮炎。[0265]实施例7：肉鸡体内试验2[0266]材料和方法[0267]该试验在位于墨西哥市的墨西哥国立自治大学(nationalautonomousuniversityofmexico,unam)的家禽研究中心(poultryresearchcenter,ceiepav)执行。年平均气温为16℃并且相对湿度(rh)为60％。[0268]将总共960只1日龄肉用小公鸡(ross308)用于完全随机化的实验设计中，该实验设计具有4种处理，每种处理8个平行测定，每个鸡圈30只家禽。在整个研究过程中，肉鸡可以自由采食饲料和水。[0269]每个鸡圈使用新的并且经消毒的木屑作为褥草，在初始阶段(5天)使用用于小鸡的喂食器和饮水器；并且随后使用手动喂食器和钟形饮水器直到生长期结束。初始加热是由每个鸡圈一个传统气体加热器提供，每天通过数字温湿度计记录禽舍的温度和相对湿度。禽舍是用砖石建造的，并且具有横向的手动帘幕。设备和家禽饲养的综合管理与该地区的综合农场中所用的相同。[0270]各处理组如下设置：[0271]表7[0272][0273]酶：将100ppm的hiphosgt(商业名称，批量制造的优先购买日(lotmanufacturedpreemptiondate))作为日粮组合物的一部分，并且以1000fyt/kg包括。根据成分中植酸盐浓度调整实验日粮中的磷水平。ca:p比率接近1.5:1.0。[0274]抗球虫程序：从第1‑21天施用125ppm的尼卡巴嗪，并且从第22‑49天施用60ppm的盐霉素。[0275]疫苗接种程序：在10日龄时，通过滴眼和皮下施加同时施用新城疫疫苗和新城疫/流感疫苗。另一种新城疫疫苗在28日龄时通过水施用。[0276]实验日粮[0277]实验日粮(育雏前期、育雏期、生长期和育成期)基于高粱、豆粕和ddgs。根据如下表所示的组成制备日粮：[0278]表8：实验日粮的组成(千克/吨)[0279][0280][0281][0282][0283]育雏期预混物d22‑35t1t2t3石灰石334.54309.13309.13mdcp184.08170.35170.35盐酸赖氨酸98.4190.2890.28nahco387.3080.2780.27rovimixpollo031281.0875.0075.00dl‑甲硫氨酸62.9058.2658.26盐37.9435.4835.48苏氨酸22.0920.3220.3225％的nicarmix0.000.000.0012％的cosistac13.5112.5012.50肉鸡用植酸酶hiphosgt2.712.502.50florafil30g54.05112.50112.50加丽素红1.081.251.25enradinf800.000.000.00sipernat20.3131.9831.98总计1,0001,0001,000[0284][0285][0286]饲料贮存条件：每一阶段的饲料都在使用前一周加工并在室温下贮存。监测整个贮存期的温度(18摄氏度)。[0287]测试产品的添加：在每种处理预混物中加入适量的胞壁质酶(低剂量309克/吨和433克/吨)以完成饲料制造；根据表8将该预混物添加到其余成分中。[0288]实验测量和工序[0289]足垫皮炎：评估在35日龄和49日龄时进行(这是墨西哥市场销售的两个重要年龄)。基于welfare2009，根据标准dsm方案对每个鸡圈的所有家禽进行评估。标度从0至4。a—无足垫皮炎迹象(得分0)；b—最小的足垫皮炎迹象(得分1和2)；c—足垫皮炎迹象(得分3和4)。[0290]排泄物分析：在第49天，避开饮水和饲喂区域从每个鸡圈的4个不同点采集样品(以获得集合体)。这两项评估都是在动物营养实验室fmvz‑unam开展的。[0291]1.干物质、总氮和湿度—样品在收集后立即冷冻保存，以便运送到实验室。[0292]2.氨氮—样品收集后立即冷藏保存，直到运送到实验室[0293]结果和讨论[0294]足垫皮炎是一种导致肉鸡足底表面坏死的病症(shepherd和fairchild，2010)。此外，足垫皮炎是一种降低足部的市场价值的病症，并且由于其与湿褥草以及高放养密度的关系，也被认为是一种福利指标。足垫皮炎得分显示在表9中，其中，阴性对照处理在评估的第35天和第49天显示出显著(p＜0.001)最高的足垫评分，并且在加工之后，所使用的如此处理有效地降低了足垫皮炎的发生率。[0295]表9：在d35和d49日龄时的足垫皮炎[0296]组别d35d49阴性对照0.316±0.70.468±0.88胞壁质酶‑低剂量0.141±0.60.357±0.72胞壁质酶‑高剂量0.004±0.060.302±0.76[0297]此外，在粪便中氨和总氮的分析中获得的结果(表10)显示，在胞壁质酶高水平处理中总氮的水平显著最低。这一发现与在相同处理中观察到的最低足垫得分有关，并且可以用褥草中氮减少来解释(shepherd和fairchild，2010)。[0298]表10d34时的褥草质量[0299]组别氨态氮ph阴性对照0.064±0.0066.24±0.07胞壁质酶‑低剂量0.041±0.0066.13±0.07胞壁质酶‑高剂量0.025±0.0060.14±0.07[0300]结论[0301]在研究中获得的结果表明，包含微生物胞壁质酶有效地减少了肉用仔鸡的足垫皮炎，并且降低了肉用仔鸡褥草的氨态氮和ph值。[0302]本文描述和要求保护的发明的范围不受本文所公开的特定方面的限制，因为这些方面旨在作为本发明的几个方面的说明。任何等同的方面都旨在处于本发明的范围内。实际上，除了本文中示出和描述的那些修改之外，根据前面的描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在有冲突的情况下，以本公开(包括定义)为准。当前第1页1 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