一种化香果提取物在淡水鱼用饲料中的应用的制作方法

本发明属于饲料生产领域，更具体地，本发明涉及一种淡水鱼用化香果提取物饲料添加剂及其应用。

背景技术：

我国是水产养殖大国，也是抗生素生产大国，每年生产的大约21万吨。抗生素、激素、促生长剂等合成饲料添加剂在养殖中的长期应用，造成有害物质残留，动物品质不高等问题，给人类健康带来严重的危害，从2006年起欧盟已经禁止在饲料中添加所有抗生素。我国即将在2020年起禁止在饲料中添加抗生素。饲用抗生素替代品问题成为社会广泛关注的热点。非抗生素类促生长饲料添加剂已有酶、益生菌、有机酸和植物饲料添加剂等，特别是植物提取物饲料添加剂成为一个研究和开发利用的热点。

化香树属于胡桃科植物，在我国西北、华东、华中、华南等地有广阔分布。化香树在我国民间的应用广且历史悠久，树叶捣烂加水过滤出的汁液可以杀虫用做农药。树叶能顺气、祛风、化痰、止痛、燥湿可供药用。化香果过去曾用作生产制革工业用的鞣剂栲胶，但是其性能差强人意，已经停止生产退出市场。化香果提取物来源于化香树果序，其中含有植物多酚、黄酮、鞣花酸、维生素等生物活性物质。有研究表明化香果提取物具有特殊的生物学和药理学活性，以及良好的抗氧化性，化香果提取物对鼻炎和鼻窦炎等致病菌可以起到抑制作用，还对抑制细胞毒性，预防癌症和抗衰老有一定功效，在药物、化妆品、食品添加剂、饲料添加剂等领域具有广泛应用前景。

技术实现要素：

为了解决上述问题，本发明提供了一种化香果提取物在淡水鱼用饲料中的应用。

一种化香果提取物在淡水鱼用饲料中的应用。

化香果提取物的原料选用化香果序，经提取制备得到提取物。

原料选用化香树成熟果序；且提取物中单宁含量为30～80％wt.。

所述的化香果提取物的制备步骤如下：

步骤一：将化香果序原料加入溶剂中，进行回流提取，重复提取后，抽滤、合并提取液，减压浓缩得到浓缩液；

步骤二：减压浓缩干燥得到提取物。

化香果提取物在淡水鱼饲料中的添加量为100～10000g/t。

有益效果：

本发明制备的化香果提取物饲料添加剂通过在“吉富”罗非鱼养殖试验中对幼鱼生长性能、形体指标、生理生化、非特异免疫及攻毒后死亡率指标评价测试显示，化香果提取物饲料添加剂在适宜添加量下可显著促进幼鱼生长，降低饵料系数，提高肥满度和血清超氧化物歧化酶活性，降低血清中丙二醛和一氧化氮含量以及抗超氧阴离子和谷草转氨酶活性。本发明采用化香果提取物作为淡水鱼饲料添加剂，按500～1000g/t添加量加入商业日粮中制备得到淡水鱼用饲料，具有养殖应用效果好、绿色安全等特点，在淡水鱼养殖中具有应用前景。

附图说明

图1为饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清asa活性的影响。

图2为饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清gpx的影响。

图3为饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清inos活性的影响。

图4为饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清mda含量的影响。

图5为饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清no含量的影响。

图6为饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清rb活性的影响。

图7为饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清sod活性的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明提供技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，并非对其保护范围的限制。

为了解决上述问题，本发明第一个方面提供了一种淡水鱼用化香果提取物饲料添加剂，所述化香果提取物饲料添加剂的提取方法，包括如下步骤：

步骤一：称取一定量化香果序加入到圆底烧瓶中，加入1﹕10～1﹕20的溶剂，所述的溶剂可以选择水、乙醇、乙醇-水、或甲醇-水，在60～90℃下进行回流提取1～2h，重复提取1～3次，抽滤之后减压浓缩得到浓缩液；

步骤二：减压浓缩干燥得到提取物。

作为一种优选的技术方案，所述化香果提取物的提取方法，包括如下步骤：

步骤一：称取化香果序1000g置于圆底烧瓶中，按照料液比1∶15加入80℃的一级水，油浴80℃加热，提取1h，重复提取2次，合并提取液，50℃下减压浓缩至原体积的四分之一。

步骤二：减压浓缩干燥得到提取物。

本发明所述化香果序，即化香树的干燥果序，其中果序指的是果序轴及着生在其上的果实。

本发明的第二个方面提供了一种淡水鱼用化香果提取物饲料添加剂的应用，其应用于淡水鱼养殖中，所制得的饲料添加剂在淡水鱼饲料中的添加量为100～10000g/t。作为一种优选的技术方案，该饲料添加剂在淡水鱼饲料中的添加量为500～1000g/t。

本部分发明的实现过程如下：

以鱼粉、豆粕、菜粕和棉粕为蛋白源，豆油为脂肪源，小麦粉和米糠为糖源配制基础饲料。在基础配合日粮中分别添加化香果提取物。试验饲料制备：原料粉碎并过80目筛，然后按需准确称取各种原料，逐级均匀混合后加入豆油，再次混匀，同时添加一定的水搅拌混匀，最后用平模制粒机制成粒径为1.0-1.5mm的颗粒饲料，置于室温下空气中自然干燥至水分含量为10％左右，用自封袋封装后于-20℃保存备用。按照aoac(1995)标准，测定饲料常规成分。

将规格一致的淡水鱼(罗非鱼)幼鱼随机分到6个养殖桶(规格为300l)，每个养殖桶30尾试验鱼。每组养殖试验设6个平行组。试验鱼适应15天后开始投喂试验日粮，随机投喂添加化香果提取物的配合饲料。采用定量投喂，每天投喂3次(7:00-8:30，12:00-12:30，18:00-18:30)日投饲率为体重的2％-3％，每两周打样以调整投喂量。试验期间水体温度为28-30℃，ph为7.2-8.5，氨氮浓度控制在0.5mg/l以下，日换水量约1/10，每周测一次水质。日夜连续充气增氧，保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。试验为期8周，每日观察鱼摄食及死亡情况。

下面通过实施例对本发明进行具体描述，另外，如果没有其它说明，所用试验日粮为常规商业日粮。

实施例1

实施例1提供了一种淡水鱼用化香果提取物添加剂，所述化香果提取物的提取方法，包括如下步骤：

步骤一：称取化香果序1000g置于圆底烧瓶中，按照料液比1∶15加入80℃的一级水，油浴80℃加热，提取1h，重复提取2次，合并提取液，50℃下减压浓缩至原体积的四分之一。

步骤二：浓缩液经冷冻干燥，得到510g提取物，经检测单宁含量为71.4％。

本实施例还提供了一种淡水鱼用化香果提取物饲添加剂料的应用，其应用于淡水鱼养殖中，作为一种优选的技术方案，所制得的饲料添加剂在饲料中的添加量为125g/t。

具体应用过程如下：

饲料配置：试验日粮为常规商业日粮。以鱼粉、豆粕、菜粕和棉粕为蛋白源，豆油为脂肪源，小麦粉和米糠为糖源配制基础饲料，基础饲料组成及概略组成见表1。在基础配合日粮中添加125ppm化香果提取物。试验饲料制备：原料粉碎并过80目筛，然后按需准确称取各种原料，逐级均匀混合后加入豆油，再次混匀，同时添加一定的水搅拌混匀，最后用平模制粒机制成粒径为1.0-1.5mm的颗粒饲料，置于室温下空气中自然干燥至水分含量为10％左右，用自封袋封装后于-20℃保存备用。按照aoac(1995)标准，测定饲料常规成分。

将规格一致的淡水鱼(罗非鱼)幼鱼随机分到6个养殖桶(规格为300l)，每个养殖桶30尾试验鱼。试验鱼适应15天后开始投喂试验日粮，随机投喂添加化香果提取物的配合饲料，设6个平行试验。采用定量投喂，每天投喂3次(7:00-8:30，12:00-12:30，18:00-18:30)日投饲率为体重的2％-3％，每两周打样以调整投喂量。试验期间水体温度为28-30℃，ph为7.2-8.5，氨氮浓度控制在0.5mg/l以下，日换水量约1/10，每周测一次水质。日夜连续充气增氧，保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。试验为期8周，每日观察鱼摄食及死亡情况。

表1饲料配方与概略组成

注：每千克预混料包含以下矿物质(g/kg)和维生素(iuormg/kg)：cuso4·5h2o,2.0g；feso4·7h2o,25g；znso4·7h2o,22g；mnso4·4h2o,7g；na2seo3,0.04g；ki,0.026g；cocl2·6h2o,0.1g；va,900000iu；vd,200000iu；ve,4500mg；vk3,220mg；vb1,320mg；vb2,1090mg；烟酸2800mg；vb5,2000mg；vb6,500mg；vb12,1.6mg；vc,5000mg；泛酸,1000mg；叶酸,165mg；胆碱,60000mg。

实施例2

实施例2提供了一种淡水鱼用化香果提取物添加剂，所述化香果提取物的提取方法同实施例1。

本实施例还提供了一种淡水鱼用化香果提取物饲添加剂料的应用，其应用于淡水鱼养殖中，作为一种优选的技术方案，所制得的饲料添加剂在饲料中的添加量为250g/t。

具体应用过程如下：

试验饲料制备同实施例1，在基础配合日粮中添加250ppm化香果提取物。

将规格一致的淡水鱼(罗非鱼)幼鱼随机分到6个养殖桶(规格为300l)，每个养殖桶30尾试验鱼。试验鱼适应15天后开始投喂试验日粮，随机投喂添加化香果提取物的配合饲料，设6个平行试验。饲养试验同实施例1。试验为期8周，每日观察鱼摄食及死亡情况。

实施例3

实施例3提供了一种淡水鱼用化香果提取物添加剂，所述化香果提取物的提取方法同实施例1。

本实施例还提供了一种淡水鱼用化香果提取物饲添加剂料的应用，其应用于淡水鱼养殖中，作为一种优选的技术方案，所制得的饲料添加剂在饲料中的添加量为500g/t。

具体应用过程如下：

试验饲料制备同实施例1，在基础配合日粮中添加500ppm化香果提取物。

将规格一致的淡水鱼(罗非鱼)幼鱼随机分到6个养殖桶(规格为300l)，每个养殖桶30尾试验鱼。试验鱼适应15天后开始投喂试验日粮，随机投喂添加化香果提取物的配合饲料，设6个平行试验。饲养试验同实施例1。试验为期8周，每日观察鱼摄食及死亡情况。

实施例4

实施例4提供了一种淡水鱼用化香果提取物添加剂，所述化香果提取物的提取方法同实施例1。

本实施例还提供了一种淡水鱼用化香果提取物饲添加剂料的应用，其应用于淡水鱼养殖中，作为一种优选的技术方案，所制得的饲料添加剂在饲料中的添加量为1000g/t。

具体应用过程如下：

试验饲料制备同实施例1，在基础配合日粮中添加1000ppm化香果提取物。

将规格一致的淡水鱼(罗非鱼)幼鱼随机分到6个养殖桶(规格为300l)，每个养殖桶30尾试验鱼。试验鱼适应15天后开始投喂试验日粮，随机投喂添加化香果提取物的配合饲料，设6个平行试验。饲养试验同实施例1。试验为期8周，每日观察鱼摄食及死亡情况。

实施例5

实施例5提供了一种淡水鱼用化香果提取物添加剂，所述化香果提取物的提取方法同实施例1。

本实施例还提供了一种淡水鱼用化香果提取物饲添加剂料的应用，其应用于淡水鱼养殖中，作为一种优选的技术方案，所制得的饲料添加剂在饲料中的添加量为2000g/t。

具体应用过程如下：

试验饲料制备同实施例1，在基础配合日粮中添加2000ppm化香果提取物。

将规格一致的淡水鱼(罗非鱼)幼鱼随机分到6个养殖桶(规格为300l)，每个养殖桶30尾试验鱼。试验鱼适应15天后开始投喂试验日粮，随机投喂添加化香果提取物的配合饲料，设6个平行试验。饲养试验同实施例1。试验为期8周，每日观察鱼摄食及死亡情况。

实施例6

本实施例作为对照组考察化香果提取物饲添加剂料的应用效果，具体应用过程如下：

饲料配置：试验日粮为常规商业日粮。以鱼粉、豆粕、菜粕和棉粕为蛋白源，豆油为脂肪源，小麦粉和米糠为糖源配制基础饲料，基础饲料组成及概略组成见表1。在基础配合日粮中添加0ppm化香果提取物。试验饲料制备同实施例1。

将规格一致的淡水鱼(罗非鱼)幼鱼随机分到6个养殖桶(规格为300l)，每个养殖桶30尾试验鱼。试验鱼适应15天后开始投喂试验日粮，随机投喂添加化香果提取物的配合饲料，设6个平行试验。饲养试验同实施例1。试验为期8周，每日观察鱼摄食及死亡情况。

功效评价：

1.生长指标评价：

饲养试验结束后，对实施例1～6的每个养殖桶随机取罗非鱼3尾，每个实施例组共取18尾鱼尾静脉采血后测定鱼的体重、体长、肝脏重。对每个养殖桶剩余的鱼称重后计数，以计算存活率(sr)、增重率(wgr)、特定生长率(sgr)、饲料系数(fcr)、蛋白质效率比(per)、肝体指数(his)和肥满度(cf)。

计算公式如下：

sr(％)＝100×nt/n0

wg(％)＝100×(wt-w0)/w0

sgr(％/d)＝100×(lnwt-lnw0)/t

fcr＝fi/(wt-w0)

per＝100×(wt-w0)/(fi×np)

his(％)＝100×wh/wb

cf(％)＝100×wb/l³

其中，n0为试验开始时每个养殖桶鱼的尾数；nt为试验结束时养殖池鱼的尾数；w0为鱼初体均重；wt为鱼末体均重；t为饲喂天数；fi每尾鱼平均摄食饲料总量(风干样重)；np饲料中蛋白质含量；wh为每尾鱼末肝脏重；wb为每尾鱼末体重；l为每尾鱼末体长。

由表2可知，饲料中添加不同浓度化香果提取物显著影响罗非鱼幼鱼的末均重、wg、sgr、fcr和per(p<0.05)。随着添加量的增加，罗非鱼末均重、wg、sgr和per呈先上升后下降的趋势，fcr呈先下降后上升的趋势。与对照组相比，添加量为1000ppm时，末均重显著升高；添加量为250-1000ppm时，sgr和wg显著升高；添加量为500-1000ppm时，per显著升高，fcr显著下降(p<0.05)。所以饲料中添加不同浓度化香果提取物可以显著影响罗非鱼幼鱼的生长性能，以添加量500-1000ppm时促生长效果最佳。

表2饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼生长性能的影响

注：同一列中不同字母表示差异显著，p<0.05。

2.生理生化指标评价

饲养试验结束后，对实施例1～6的每个养殖桶随机取罗非鱼3尾，每个实施例组共取18尾鱼尾静脉采血，血液样品经4℃冰箱静置1-2小时后，于4℃、3500rpm离心10min制备血清，测定谷丙转氨酶(alt)活性、谷草转氨酶(ast)活性、总蛋白(tp)、白蛋白(alb)、球蛋白(glb)、尿素氮(un)、血糖(glu)、胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、肌酐(crea)。

由表3可知，饲料中添加化香果提取物显著影响血清ast活性以及tp、alb和glb含量(p<0.05)。与对照组相比，添加量为125-2000ppm时，ast活性显著降低(p<0.05)；添加量为2000ppm时，tp、alb和glb含量显著升高(p<0.05)。饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼的谷草转氨酶(ast)活性、总蛋白(tp)、白蛋白(alb)、球蛋白(glb)指标有显著影响。

表3饲料中添加不同浓度化香果提取物对罗非鱼幼鱼血清生理生化指标的影响

注：同一列中不同字母表示差异显著(p<0.05)。

3.非特异性免疫指标测定

饲养试验结束后，对实施例1～6的每个养殖桶随机取罗非鱼3尾，每个实施例组共取18尾鱼尾静脉采血，血液样品经4℃冰箱静置1-2小时后，于4℃、3500rpm离心10min制备血清，-20℃保存备用。测定超氧化物歧化酶(sod)活性、丙二醛(mda)含量、抗超氧阴离子(asa)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(gpx)活性、诱导型一氧化氮合成酶(inos)活性、一氧化氮(no)含量，呼吸爆发(rb)活性。

由图1-7可知，饲料中添加化香果提取物对血清sod、asa和inos活性以及mda和no含量影响显著(p<0.05)。与对照组相比，添加量500-2000ppm时，血清sod活性显著提高，asa活性显著降低(p<0.05)；添加量为1000ppm时，血清mda含量显著降低；添加量为250-1000ppm时，血清inos活性和no含量显著降低(p<0.05)。饲料中添加不同浓度化香果提取物可以显著提高罗非鱼幼鱼的非特异性免疫能力，达到增强鱼体免疫防护能力。