专利名称：一种治疗哮喘病的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗哮喘病的药物，该药物以组织蛋白酶F的抑制剂为活性成分，通过抑制病人的过敏反应达到治疗哮喘的目的，属于药物领域。
发明人经过研究发现，在高浓度下(＞lμM)吗啉脲-亮氨酸-高苯内氨酸-乙烯砜-苯基(LHVS，即morpholinurea-lercine-homophenylalanine-vinylsulfone-phenyl)除了能抑制组织蛋白酶S以外还能抑制组织蛋白酶F的活性。在本发明当中，通过使用一个老鼠的肺部过敏性模型，发明人研究了组织蛋白酶F参与过敏性哮喘的致病机理。这种蛋白酶的抑制完全阻断了来自于血清和BAL粘液的IgE产物。此外，采用LHVS对老鼠进行治疗后，支气管的嗜酸性细胞的补充也被抑制住。由此而知，通过小分子抑制剂来调节组织蛋白酶F的活性可以用来控制肺部过敏性哮喘的致病机理。
因此，发明人发明了一种治疗哮喘病的药物，该药物以组织蛋白酶F的抑制剂为活性成分。
本发明治疗哮喘病的药物含有治疗有效量的组织蛋白酶F的抑制剂。
所说的治疗有效量是按每公斤体重10毫克-1000毫克给药，优选每公斤体重50毫克-800毫克，最好是每公斤体重100毫克。
所说的组织蛋白酶F抑制剂可采用小分子合成抑制剂，例如LHVS或者组织蛋白酶F抗体、组织蛋白酶F反义RNA及核糖体。甚至可以是一些组织蛋白酶F的天然抑制剂，比如Cystatin的类似物等以及一些还未研究清楚的组织蛋白酶F抑制剂均可以用来制备成治疗哮喘的药物。
上述所说的组织蛋白酶F抗体、组织蛋白酶F反义RNA及核糖体以及一些组织蛋白酶F的天然抑制剂，可以根据已知的现有技术制备出来。
本发明药物还可以含有临床上适用的药物赋型剂。本发明药物的剂型可以是适用于临床的各种常规剂型，例如，丸剂、片剂、散记、口服液体制剂、注射剂等。
本发明药物治疗哮喘病的机理可以通过如下实验加以说明
实验例原料和方法原料除非特别说明，所有该项研究所使用的化学品均来源于Sigma(St.Louis，MO)。C57/B16老鼠(6-8周大)从中国科学院上海实验动物中心购买。LHVS是根据先前描述的原始记录合成而成(Palmer JT，Rasnick D，Klaus JL，Bromme D.1995.J Med Chem38(17)3193-3196.)。动物实验向C57/B16小鼠注射LHVS(100mg/ml DMSO)(每千克体重100mg)(实验组n＝48)，或DMSO(对照组n＝48)，注射后的第二天进行免疫注射卵白蛋白。然后，每隔48小时注射一次LHVS或DMSO。所有的小鼠都采用8毫克的OVA与1mg氢氧化铝的混合物(Goldline实验室，Middletown，纽约)进行免疫，5天后补充8毫克OVA，并在第12天时，用0.5％的OVA/PBS喷雾30分钟。第15天取小鼠血清并测定小鼠血清IgE。另一组实验动物在免疫注射第12天后，用0.5％OVA/PBS喷雾(PBS做对照)分别1，3，6次，每次30分钟，连续进行6天实验。每组喷雾结束后等待3小时或24小时，再取BAL粘液，小鼠取BAL粘液前，用戊巴比妥麻醉。IgE测定结果将进行了DMSO和LHVS实验的小鼠血清样取出后，用ELISA方法进行总IgE测定。按文献报道的方法(参见Zuberi RI，Apgar JR，Chen SS，Liu FT.2000 J Immunol 2000 Mar 1；164(5)26672673.)提取BAL粘液。简单的说，将麻醉的小鼠气管插入平头针管，并注射1ml含6mM的EDTA的1XPBS。将采出液中的细胞在1500rpm离心7分钟离心出来，置于1XPBS中进行染色和记数。BAL上清液机血清样本一样进行IgE ELISA测定。简单说即将一96孔板涂上一层亲和纯化后的兔IgE抗体(Pharmingen)，在4℃下过夜，然后用含有1％BSA的PBS在37℃固定1小时。将不同倍数稀释后的血清样、BAL液以及适当倍数稀释过的标准IgE液置于孔中并将孔板在4℃下培养3小时。空白孔与其他孔同样处理。采用在37℃培养1小时的多克隆山羊抗小鼠-IgE抗体检测IgE变化。然后采用以在37℃培养1小时的马红色过氧化物酶(HRP)共扼的兔抗羊抗体进一步测定。孔板上添加OPD进行显色并在490纳米处用ELISA读取仪读数。嗜酸性红细胞的检测从BAL液中离心出来的细胞，先加入1XPBS，再用细胞计数器计数，然后，将一定数量的细胞制片。含细胞的玻片采用Hemoxylin和Eosin进行染色，并在显微镜下观察细胞形态。结果与讨论半胱氨酸蛋白酶与许多人类疾病有关。最近分离出的这种半胱氨酸组织蛋白酶F是一种只在鼠类巨噬细胞中表达的蛋白酶。这种蛋白酶与和组织相容性复合体(MHC)第2类相关的不变链(Ii)有关系。在鼠巨噬细胞中组织蛋白酶F的抑制能使含有MHC-II Leupeptin抑制性多肽(CLIP)的10kDa未完全降解的Ii片断囤积(Shi GP，Bryant RA，Riese R，Verhelst S，Driessen C，Li Z，Bromme D，Ploegh HL，Chapman HA.2000.Role forcathepsin F in invariant chain processing and major histocompatibility complex class II peptideloading by macrophages.J Exp Med 191(7)1177-1186)。可见，组织蛋白酶F对于巨噬细胞对抗原调节的表达有非常大的作用。巨噬细胞是呼吸系统中对过敏原起免疫反应的主要细胞型。因此我们假设这种蛋白酶可以造成所有的过敏性哮喘症IgE的产生和随之的嗜酸性细胞的增加，而这是过敏性哮喘发病机理中最主要也是最重要的部分。本发明的结果表明一种合成小分子抑制剂LHVS能够有效的抑制早期肺部过敏反应和后期出现的软组织和气管上皮组织内炎性的细胞的渗入。当给小鼠注射100毫克/千克体重计量的LHVS，并与DMSO对比组进行对比实验中可以发现LHVS组完全抑了鼠血清中对卵清蛋白(OVA)的IgE的产生(
图1)。类似的，LHVS治疗小鼠的BAL液在最后依次喷雾抗原后3小时和24小时IgE产物也有了明显的降低(图2)。因此，组织蛋白酶F抑制剂可以在体内有效的改善过敏性哮喘的典型症状-肺部的早期过敏反应。过敏性哮喘的另一个典型症状是炎性细胞的渗透和增加，这种症状是较后期的病理表现。这些细胞多数属于嗜酸性细胞、淋巴细胞和巨噬细胞(Kotsimbos TC，Ernst P，Hamid QA..1996.Proc Assoc Am Physicians108(5)368-373.)。通过细胞hemoxylin和eosin染色可以看出超过90％的细胞是嗜酸性细胞。与对照组相比，细胞计数证明LHVS-组织蛋白酶F抑制剂可以明显的降低小鼠体内嗜酸性细胞的渗透。事实上，在经LHVS作用最后一次喷雾后3小时或24小时内都基本未发现嗜酸性细胞(图3)，类似于PBS喷雾作用的小鼠。因此，我们确定组织蛋白酶F可以调节气管过敏免疫反应，在注射了组织蛋白酶F抑制剂以后，早期和晚期的过敏反应都得到了抑制。抑制组织蛋白酶F可采用小分子合成抑制剂，例如LHVS或者组织蛋白酶F抗体、组织蛋白酶F反义RNA及核糖体。甚至可以用一些组织蛋白酶F的天然抑制剂，比如Cystatin的类似物等以及一些还未定义的组织蛋白酶F抑制剂也可以缓解过敏性哮喘症。
实施例1取LHVS原料纯品500克，加注射用油剂，配制成每毫升含LHVS10毫克的注射液，装瓶，即可。
实施例2取LHVS原料纯品500克，加药用淀粉10000克，混合均匀，造粒，整粒，压片，制成1000000片。
权利要求
1.一种治疗哮喘病的药物，其特征在于含有治疗有效量的组织蛋白酶F抑制剂。
2.如权利要求1所述的药物，其特征在于所说的组织蛋白酶F抑制剂是吗啉脲-亮氨酸-高苯内氨酸-乙烯砜-苯基类物质。
3.如权利要求1所述的药物，其特征在于所说的组织蛋白酶F抑制剂是组织蛋白酶F的抗体。
4.如权利要求1所述的药物，其特征在于所说的组织蛋白酶F抑制剂是组织蛋白酶F的反义RNA及核糖体。
5.如权利要求1所述的药物，其特征在于所说的组织蛋白酶F抑制剂是是一种组织蛋白酶F的天然抑制剂。
6.如权利要求5所述的药物，其特征在于所说的组织蛋白酶F抑制剂是Cystatin的类似物。
7.根据权利要求2的药物，其特征在于所说的治疗有效量是每公斤体重10毫克-1000毫克。
8.根据权利要求2的药物，其特征在于所说的治疗有效量是每公斤体重50毫克-800毫克。
9.根据权利要求2的药物，其特征在于所说的治疗有效量是每公斤体重100毫克。
10.根据权利要求1的药物，其特征在于还含有药物赋型剂。
全文摘要
本发明涉及一种治疗哮喘病的药物，该药物以组织蛋白酶F的抑制剂为活性成分，通过抑制病人的过敏反应达到治疗哮喘的目的，属于药物领域。所说的组织蛋白酶F的抑制剂包括小分子合成抑制剂，例如LHVS或者组织蛋白酶F抗体、组织蛋白酶F反义RNA及核糖体，也可以是一些组织蛋白酶F的天然抑制剂，例如Cystatin C。
文档编号A61P11/06GK1400017SQ0112358
公开日2003年3月5日 申请日期2001年8月3日 优先权日2001年8月3日
发明者徐顺田 申请人:上海韦池生物技术有限公司