专利名称：长－47麻疹病毒非编码区和p、m基因序列及载体构建的制作方法
技术领域：
本发明属于病毒学和分子生物学领域，涉及对一株麻疹病毒疫苗株的所有非编码区及P、M编码区序列的发现，确切地说是阐明一株我国成功研制的用于控制麻疹的减毒活疫苗毒株的所有非编码区序列，P、M编码区序列及其编码的蛋白质的氨基酸序列以及它们的应用范围。
长-47疫苗株为我国自主研制的疫苗株，起源于1957年分离的Leningrad-4株麻疹病毒，经人肾细胞传26代、人羊膜细胞传47代以及鸡胚成纤维细胞传若干代后逐渐适应减毒而成(Rota，J.S.，Wang，Z.D.，Rota，P.A.，and Bellini，W.J.1994.Comparision of sequences of theH，F，and N coding genes of measles virus vaccine strains.VirusResearch 31317-330)。我国自1965年开始使用麻疹疫苗以来，尤其是1987年开展计划免疫后，麻疹控制工作取得了重大进展，麻疹疫苗的安全性及有效性得到了很好的证明。
对病毒基因组的研究是在70年代分子生物学技术发展并得到广泛应用之后才兴起的。到19世纪80年代为止，单股负链RNA病毒家族不少成员的基因序列得以测定，从而促使了利用负链RNA病毒cDNA进行病毒拯救的反向遗传学研究的兴起，也导致了利用其研究病毒致病机制、持续性感染、疫苗减毒机制以及研制新型疫苗和构建病毒表达载体等。尤其是病毒的非编码区序列(基因组末端及结构基因间非编码区)具有顺式调节元件功能，能指导下游基因的转录和复制，对于构建病毒表达载体具有非同寻常的意义，而利用麻疹病毒构建成表达载体又具有明显优点1、和DNA病毒载体相比，麻疹病毒RNA复制不经过DNA阶段，故而不会与细胞染色体发生重组整合，比较安全；2、和正链RNA病毒载体相比，不易发生病毒基因重组，从而有利于保持外源基因的稳定，因为RNA病毒基因重组依赖于模板选择的机制，而负链RNA病毒基因组主要以核糖核蛋白复合物(RNP)形式存在，故重组效率要低得多；3、麻疹病毒基因组的有效复制必须遵循“基因组核苷酸数是6的倍数”的增殖规则，因而基因组发生插入和缺失后仍存活的几率要小得多。4、用已得到广泛认可的安全的麻疹病毒减毒疫苗株构建表达载体，体内应用的安全性较高。因此，有关麻疹病毒表达载体的研究具有非常重要的意义。
基于麻疹病毒作为载体所具有的许多优点，而我国的长-47减毒活疫苗株为传统方法研制，其安全可靠性已得到长期检验和认可，但是其基因组非编码区序列及P、M编码区序列尚未被阐明。这一方面不能从基因水平保护我国的MV疫苗的知识产权，另一方面也限制了利用该疫苗病毒构建基因转移和表达载体。
经传统生物学方法研制的麻疹病毒长-47疫苗株为鸡胚成纤维原代细胞培养生产，本发明从该疫苗病毒感染的细胞提取全细胞RNA，以随机引物逆转录成cDNA，并以此为模板，用DNA多聚酶链式反应(DNA Polymerase ChainReaction，PCR)扩增长-47病毒基因组cDNA。共扩增6段相互重叠的片段，覆盖整个长-47病毒基因组。分段扩增的基因分别克隆到质粒载体上，进而对待测区域进行序列测定，获得病毒基因组所有七段非编码区序列和其结构基因P、M编码区序列，并推导出P、M基因编码氨基酸序列(见后，序列表)。
本发明在国内外首次阐明了我国研制的麻疹减毒活疫苗株长-47的所有非编码区序列及P、M编码区序列，直接提供麻疹病毒全基因组载体外源基因的插入位点以及插入方式使之能够随病毒基因组一起复制、转录、包装和表达，因而本发明可直接导致麻疹病毒载体(携带单个或多个外源基因)的产生，该载体既有望用于构建基因重组多价疫苗，也有望于用于基因治疗的目的。鉴于负链RNA病毒载体的优点，及其可以为进一步的研究如致病机理、减毒机理提供研究平台的前景，广泛使用的麻疹病毒减毒疫苗株所具有其无可比拟的优势。本发明还可以直接指导构建仅有麻疹病毒末端调控序列作为顺式调节元件控制外源基因转录、表达以及复制和包装系统。
以下实施例对于麻疹病毒长-47减毒活疫苗株所有非编码区序列及P、M编码区序列的应用进行详细的说明，但不意味着限制本发明的内容。
实施例1 长-47疫苗株基因间非编码区序列在cDNA水平上可提供在病毒全基因组中插入外源基因的位点用于构建疫苗病毒表达载体，用于构建基因重组多价疫苗和/或基因治疗。
麻疹病毒是副粘病毒科麻疹病毒属(morbillivirus)成员，是一种不分节段的单股负链RNA病毒，基因组由六个互不重叠的顺反子串联排列而成3’-N-P-M-F-H-L-5’，共编码8个蛋白N、P/C/V、M、F、H、L，基因组两末端以及各结构基因间区域为非编码区序列。长-47麻疹疫苗株几乎每一结构基因间非编码区均存在以保守的GAA三核苷酸为界的基因终止信号和基因起始信号序列(例外H/L间为CCC三核苷酸序列)，它们控制着3’端上游蛋白编码基因转录的终止与mRNA的聚腺苷酸化和5’端下游蛋白编码基因的转录再启动。由于基因间隔区具有的这种特点，可以将外源基因两端带上与长-47病毒蛋白相似的基因间隔非编码区后插入到病毒基因组中，这样该插入蛋白基因便可以病毒蛋白基因类似的方式存在于病毒基因组中，并得以表达和复制、包装入子代病毒中。如在P/M基因间插入外源基因，可使用常规克隆方法在病毒全基因的cDNA水平将P/M间非编码区序列重复相邻连接，中间保留一适用的酶切位点，然后将外源基因DNA插入该酶切位点，形成如
图12的重组cDNA结构，重组cDNA导入细胞后使用本领域已知的方法(如痘苗病毒/T7RNA聚合酶瞬时表达系统)将其转录成RNA。在提供辅助病毒蛋白N、P和L的条件下，转录出的重组RNA可以形成具有复制和转录能力的RNP，形成具有感染能力的新的子代重组病毒，从而完成外源基因的转移和表达。外源基因插入基因组其它位置以此类推，即必须使插入的外源基因两侧具有与长-47结构基因mRNA两侧相似的具有顺式调节功能的非编码区序列(分别见说明书附图1、2、3)，这也表示该病毒基因组中可插入1个以上的外源基因，并获得表达。
实施例2 麻疹病毒长-47疫苗株基因组3’末端非编码区和5’端非编码区序列可用于构建表达外源基因的缺陷型病毒颗粒载体。前者基因组3’末端非编码区包含病毒反基因组(Antigenome)复制的起始信号，N蛋白mRNA转录的起始信号以及结合病毒N蛋白的包装信号等；后者5’端非编码区序列则包含病毒基因组(Genome)复制的起始信号，L蛋白mRNA转录的终止信号以及结合病毒N蛋白的包装信号等。将该段3’末端非编码区序列cDNA的3’端按常规克隆方法连接下游外源基因起始密码子，而将该段5’末端非编码区序列cDNA的5’端按常规克隆方法连接上游外源基因终止密码子，然后使用本领域已知的方法(如体外转录或携带RNA聚合酶基因的体内转录系统)将其转录为RNA并导入哺乳动物细胞(如Vero细胞)，在病毒L蛋白(病毒RNA聚合酶)存在的条件下该序列可指导插入的“可表达基因”的转录，并在病毒其它蛋白存在的条件下，与N、P、L蛋白结合形成RNP复合物，进而复制和被包装成携带外源基因的缺陷型病毒颗粒，外源基因按照病毒蛋白表达相似的方式得以表达(见说明书附图4)。
实施例3 麻疹病毒长-47疫苗株P和M基因的编码区序列及其编码的氨基酸序列可用于构建基因重组抗原，用于麻疹病毒感染的血清学诊断或疫苗接种后的流行病学调查。
根据已测定的长-47疫苗株P和M蛋白基因的的序列及其编码的氨基酸序列分析结果，可以分别选取二者的全基因序列或包含主要抗原表位的基因构建原核或真核表达载体，在原核细胞和真核细胞中表达相应的M和P蛋白，纯化后用于麻疹病毒感染的血清学诊断或疫苗接种后的流行病学调查。
实施例4 长-47减毒活疫苗株病毒的所有非编码区序列，P、M编码区序列及其编码的蛋白质的氨基酸序列分析可用于阐明该疫苗毒株的减毒机制和细胞适应培养的机理。
将长-47减毒活疫苗株病毒的所有非编码区序列，P、M编码区序列及其编码的蛋白质的氨基酸序列与国外野毒株、疫苗株病毒基因组相应位置进行比较，从基因和蛋白水平来阐明长-47减毒活疫苗株与国外野毒株及疫苗株之间的异同和相应的功能改变，可以研究疫苗的减毒机制，细胞培养适应机理以及寻找强弱毒株间的分子标记，从而为麻疹病毒的分子流行病学调查提供参考。
图2为外源基因与P/M基因间非编码区连接方式，外源基因插入长-47病毒基因组P/M蛋白基因间以获得重组病毒基因，所有阴影部分均为非编码区序列。
图3为麻疹病毒长-47疫苗株病毒载体基因组提供的外源基因插入结构图，阴影部分为非编码区序列。
图4为仅由长-47基因组两末端非编码区序列与外源基因连接的连接方式，以构建缺陷型病毒载体，阴影部分为基因组末端非编码区序列。
权利要求
1.麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组所有非编码区序列，共包括7个不连续的区域，为6个结构基因编码区隔开，分别是基因组3’末端非编码区、N/P、P/M、M/F、F/H、H/L基因间非编码区和基因组5’末端非编码区，其特征在于(1)麻疹病毒-47疫苗株(Measles virus ChangChun-47 attenuatedstrain)基组3’末端非编码区序列由107个核苷酸组成，位于全长基因组的第1-107位核苷酸。3’-5’方向RNA序列为UGGUUUGUUUCAACCCAUUCCUAUCAAGUUAGUUACUAGUAGAAGAUCACGUGAAUCCUAAGUUCUAGGAUAAUAGUCCCUGUUCUCGUCCUAAUCCCUAUAGGCUC(2)麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组N/P基因间非编码区(共121个核苷酸)，位于全长基因组的第1686-1806位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为CACGCUCUCCGGCUCCUGGUCUUGUUGUAGGCGGAUGGGAGGUAGUAACAAUAUUUUUUGAAUCCUUGGUCCAGGUGUGUCGGCGGUCGGGUAGUUGGUAGGUGAGGGUGCUAACCUCGGC(3)为麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组P/M基因间非编码区(共107个核苷酸)，位于全长基因组的第3331-3437位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为GAUGUCGAGUUGAAUGGACGGUUGGGGUACGGUCAGCUGGGUUGAUCAUGUUGGAUUUAGGUAAUAUUUUUUGAAUCCUCGUUUCACUAACGGAGGGUUCAAGGUGU(4)为麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组M/F基因间非编码区(共1012个核苷酸)，位于全长基因组的第4446-5457位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为UGGCAUCACGGGUCGUUACGGGCUUUUGCUGGGGGGAGUGUUACUGUCGGUCUUCCGGGCCUGUUUUUUUGGGGGAGGCUUUCUGAGGUGCCUGGUUCGCUCUCCGGUCGGUCGUCGGCUGCCGUUCGCGCUUGUGGUCCGCCGGGGUCGUGUCUUGUCGGGGCUGUGUUCCGGUGGUGGUCGGUGGGGUUAGACGUAGGAGGAGCACCCUGGGGGCUCCUGGUUGGGGGUUCCGACGGGGGCUAGGUUUGGUGGUUGGCGUAGGGGUGGUGGGGGCCCUUUCUUUGGGGGUCGUUGACCUUCCGGGGAGGGGGAGAGGGAGUUGUGUUCUUGAGGUGUUGGCUUGGCGUGUUCGCUGGCUCCACUGGGUUGGCGUCCGUAGGCUGAGGGAUCUGUCUAGGAGAGAGGGGCCGUUUGAUUUGUUUUGAAUCCCGGUUCCUUGUAUGUGUGGGUUGUCUUGGGUCUGGGGCCGGGUGCCGAGGCGCGGGGGUUGGGGGCUGUUGGUCUCCCUCGGGGGUUGGUUAGGGCGUCCGAGGGGGCCACGGGUGUCCGUCCCUGUGGUUGGGGGCUUGUCUGGGUCGUGGGUUGGUAGCUGUUAGGUUCUGCCCCCCCGGGGGGGUUUUUUUCCGGGGGUCCCCGGCUGUCGGUCGUGGCGCUCCUUCGGGUGGGUGGGGUGUGUGCUGGUGCCGUUGGUUUGGUCUUGGGUCUGGUGGGACCCGGUGGUCGAGGGUCUGAGCCGGUAGUGGGGCGUCUUUCCUUUCCGGUGUUGGGCGCGUGGGGUCGGGGCUAGGCCGCCCCUCGGUGGGUUGGGCUUGGUCGUGGGUUCUCGCUAGGGGCUUCCUGGGGGCUUGGCGUUUCCUGUAGUCAUGGGGUGUCGGAGAGGUUCAGGGGGCCAGAGGAGGAGAAGAGCUUCCCUGGUUCUCUAGUUAGGUGGUGUGGGCUGCUGUGAGUUGAGGGGUGGGGAUUUCCUCUGUGGCCCUUAGGGUCUUAGUUCUGAGUAGGUUACAGGUAG(5)为麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组F/H基因间非编码区(共160个核苷酸)，位于全长基因组的第7111-7270位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为AGGAGAUGUUGAGAACUUUGUGUUUACAGGGUGUUCAGAGGAGAAGCAGUAGUUCGUUGGUGGCGUGGGUCGUAGUUCGGGUGGACUUUAAUAGAGGCCGAAGGGAGACCGGCUUGUUAUAGCCAUCAAUUAAUUUUGAAUCCCACGUUCUAGUAGGUGU(6)为麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组H/L基因间非编码区(共109个核苷酸)，位于全长基因组的第9125-9233位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为CCGACGAUCACUUGGUUAGAGUACUACAGUGGGUCUGUAGUCCGUAUGGGUGAUCACACUUUAUCUGUAGUCUUAAUUCUUUUUGCGUCCCAGGUUCACCAAGGGGCAA(7)麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组5’末端非编码区序列(共109个核苷酸)，位于全长基因组的第15786-15894位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为AACCAACUUGAGGCCUUGGGAUUAGGACGGGAUCCACCAAUCCGUAAUAAACGUUAUAUAAUUUCUUUUGAAACUUUUAUGCUUCAAAGAUAAGGGUCGAAACAGACCA(8)上述基因的结构和功能。
2.麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组P基因编码区及M基因编码区序列，其特征在于(1)麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组P基因编码区序列共1524个核苷酸，位于全长基因组的第1807-3330位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为UACCGUCUUCUCGUCCGUGCGGUACAGUUUUUGCCUGACCUUACGUAGGCCCGAGAGUUCCGGCUCGGGUAGCCGAGUGACCGGUAGCUCCUUCGAUACCGUCGUACCAGUCUUUAUAGUCUGUUGGGUCCUGUCCUCGCUCGGUGGACGUCCCUUCUCUUCCGUCCGUCAAGCCCAGAGUCGUUUGGUACGGAGAGUCGUUAACCUAGUUGACUUCCGCCACGUGGAACGUAGGCGCCAGUCCCUGGACCUCUCUCGCUACUGCUGCGACUUUGAAACCCUUAGGGGGGUUCUUUAGAGGUCCGUAGUUCGUGACCCAAUGUCACAGUAAUACAAAUACUAGUGUCGCCACUACGCCAAUUCCCUUAGGUUCUACGACUGAGAUAGUACCAAGUUAGUCCGGAACUACCACUAUCGUGGGAGAGUCCUCCUCUGUUACUUAGACUUUUGUCGCUACACCUAUAACCGCUUGGACUAUGGCUCCCUAUACGAUAGUGACUGGCCCCUAGACGAGGGUAGAGAUACCCCAAGUCCCGAAGACUACAACUUUGACGUCUUCCUCCCCUCUAGGUGCUCGAGGACUCUGAGGUUAGGUCUCCGUUGUUGAAAGGCUUCGAACCCUUUUGAGAGUUACAAGGAGGCGGGGGCCUGGGGCCAUCCCGGUCGUGAAGGCCCUGUGGGUAAUUUUUCCCGUGUCUGCGCUCUAAUCGGAGUAAACCUUGCCUCUAGCGCAGAAAUAACUGUCCACCACGUUGGGUUACACGAGCUUUCAGUGGGAGCCUUGGUAGUCCCGGUCCACGUGGACGCCCCUUACAGGGGCUCACACACUCGUUACGGCGUGACUAUGUCCUCACCUGUGGGCUUAGACCAUGGUGUUAGAGGGGCUCUAGGGUCUUAUUACCUUUUCCCCCUCUGAUAAUACUACUACUCGACAAGAGACUACAGGUUCUAUAAUUUUGUCGGAACCGGUUUUAUGUGCUCCUAUUAGUCUUCUAUUAGAGGUUCGAUCUCAGUGACGACAAUAACUUCCCUCUUCAACUCAGUUAAUUCUUCGUCUAGUUGUCCGUUUUAUAGUCGUAUAGGUGGGACCUUCCUGUGGAGAGUUCGUAGUACUAGCGGUAAGGACCUGAACCCUUCCUAGGGUUGCUGGGGUGACGUCUACAGCUUUAGUUAGGGCUGAACUUUGGGUAGUAUCCGUCUCUAAGUCCGGCUCGUGACCGGCUUCAAGAGUUCUUUGGGCAACGGUCGGCUGUUGAGGUUCCUUACUGUUUACCUGCCUGGUCAAGGUCUCCUGUCGACGACUUCCUUAAAGUCGAUUUCGGCUAGCCCUUUUUCUACUCGAGUCGGCAGCCCAAACAAGGACUGUGGCCGGGACGUAGUGCGUCACAUUAGGCGAGGUAAUAUUUUAGGUCGGCCGAUCUCCUCCUAGCCUUCGCAAUGGACUACUGAGAGGAACUACUAUAGUUUCCUCGGUUACUAGAACGGUUCAAGGUGGUCUACGACUACUUCUAUUAUUACUUCAUC(2)麻疹病毒长-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因组M基因编码区序列共1008个核苷酸，其特征在于位于全长基因组的第3438-4445位核苷酸，3’-5’方向RNA序列为UACUGUCUCUAGAUGCUGAAGCUGUUCAGCCGUACCCUGUAGUUUCCCAGCUAGCGAGGCUAUGUUGGGUGGUGGAUGUCACUACCGUCCGACCACGGGGUCCAGUCUCAGUAUCUAGGACCAGAUCCGCUGUCCUUCCUACUUACGAAAUACAUGUACAAAGACGACCCCCAACAACUCCUGUCGCUAGGGGAUCCCGGAGGUUAGCCCGCUCGUAAACCCAGGGACGGGAAUCCACAACCGUCUAGGUGUCGUUUCGGGCUUUUUGAGGAGUUUCUCCGGUGACUCGAACUGCAUCAACAAUCUGCAUGUCGUCCCGAGUUACUUUUUGACCACAAGACGUUGUUGUGGGGUGAUUGAGAGGAGUGUGGAACCUCUUUCCAGGAUUGUUGUCCCUCACAGAAGUUGCGUUUGGUUCACACGUUACGCCGAUUAGACUAUGGCGAGCUAUUGGGCGUCUCCAAGGCACAACAAAUAUACUCGUAGUGGGCAGAAAGCCUAUUGCCCAUAAUGUGGCAAGGAUCUUCUUACGACCUUAAGUCUAGCCAGUUACGUCACCGGAAGUUGGACGACCACUGGGAAUCCUAACUGUUCCGCUAUCCGGGACCCUUCUAGUAGCUGUUAUGUCUCGUUGAAGGACUCCGUUGUAAAUACCAGGUGUAGCCCUUGAAGUCCUCUUUCUUCUCACUUCAGAUGAGACGGCUAAUAACGUUUUACUUUUAGCUUUUCUACCCGGACCAAAAACGUGAACCACCCUAUCCCCCGUGGUCAGAAGUGUAAUCUUCGUGUCCGUUUUACUCGUUCUGAGAGGUACGUGUUGAGCCCAAGUUCUUCUGGAAUACAAUGGGCGACUACCUAUAGUUACUUCUGGAAUUAGCUAAUGAGACCUCCUCGUCUACGUUCUAUCAUUCUUAGGUCCGUCAAAACGUCGGUAGUCAAGGAGUUCUUAAGGCGUAAAUGCUGCUGCACUAGUAUUUACUACUGGUUCCUGAUAAGUUUCAAGACAUC(3)上述基因的结构和功能。
3.根据权利要求2，长-47疫苗株P和M基因分别编码相应的结构蛋白，其特征在于(1)P基因编码的蛋白由507个氨基酸组成，分子量为53.788千道尔顿，等电点为5.06，氨基酸从N端到C端为MAEEQARHVKNGLECIRALKAEPIGSLAIEEAMAAWSEISDNPGQERATCREEKAGSSGLSKPCLSAIGSTEGGAPCIRGQGPGESDDDAETLGIPPRNLQASSTGLQCHYVYDHSGDAVKGIQDADSIMVQSGLDGDSTLSGGDNESENSDVDIGEPDTEGYAITDRGSAPISMGFRASDVETAEGGEIHELLRLQSRGNNFPKLGKTLNVPPPPDPGRASTSGTPIKKGTDARLASFGTEIASLLTGGATQCARKSPSEPSGPGAPAGNVPECVSNAALIQEWTPESGTTISPRSQNNGKGGDYYDDELFSDVQDIKTALAKIHEDNQKIISKLESLLLLKGEVESIKKQINRQNISISTLEGHLSSIMIAIPGLGKDPNDPTADVEINPDLKPIIGRDSGRALAEVLKKPVASRQLQGMTNGRTSSRGQLLKEFQLKPIGKKMSSAVGFVPDTGPASRSVIRSIIKSSRLEEDRKRYLMTLLDDIKGANDLAKFHQMLMKIIMK*(2)M基因编码的蛋白由335个氨基酸组成，分子量为37.650千道尔顿，等电点为9.36，氨基酸从N端到C端为MTEIYDFDKSAWDIKGSIAPIQPTTYSDGRLVPQVRVIDPGLGDRKDECFMYMFLLGVVEDSDPLGPPIGRAFGSLPLGVGRSTAKPEKLLKEATELDVVVRRTAGLNEKLVFCNNTPLTLLTPWRKVLTTGSVFNANQVCNAANLIPLDNPQRFRVVYMSITRLSDNGYYTVPRRMLEFRSVNAVAFNLLVTLRIDKAIGPGKIIDNTEQLPEATFMVHIGNFRRKKSEVYSADYCKMKIEKMGLVFALGGIGGTSLHIRSTGKMSKTLHAQLGFKKTLCYPLMDINEDLNRLLWRSRCKIVRIQAVLQPSVPQEFRIYDDVIINDDQGLFKVL*(3)上述所有基因编码的蛋白质的结构和功能。
4.根据权利要求1所述特征，麻疹病毒长-47疫苗株的非编码区序列可用于构建长-47疫苗病毒表达载体，用于制造重组基因工程疫苗或基因治疗目的。
5.根据权利要求1、2和4所述，其特征在于长-47所有非编码区序列、P和M基因序列及其酶切图谱用于构建重组病毒载体。
6.权利要求4的用途，其特征在于用于重组疫苗抗原目的或基因治疗目的的外源基因在重组病毒载体基因组中与长-47的非编码区相邻连接。
7.根据权利要求1所述特征，麻疹病毒长-47疫苗株的基因组3’末端和5’术端非编码区序列可以置于外源基因的两侧，用于控制外源基因的复制、转录和伪型包装以构建缺陷型病毒颗粒载体。
8.根据权利要求4-7所述特征，含有1种或一种以上外源基因的长-47疫苗病毒表达载体。
9.根据权利要求2和3所述特征，麻疹病毒长-47疫苗株的结构基因P和M，可通过原核或真核表达系统予以表达，P基因的表达产物或克隆质粒还可提供该毒株RNP复合物形成所必须的P蛋白，用于重组病毒拯救时的辅助物。
10.根据权利要求8的用途，P和M基因的表达产物用于建立麻疹感染的血清学诊断方法。
全文摘要
本发明提供了麻疹病毒长春－47疫苗株的所有非编码区和P、M编码区序列及其结构，P、M编码区编码的蛋白质氨基酸序列及其结构以及其非编码区序列在构建该疫苗病毒载体中的用途和载体构建方法。这些序列数据和方法可应用于使用该疫苗株病毒构建表达载体用于重组多价疫苗或基因治疗，还可用于麻疹病毒感染的的分子生物学诊断及其试剂的研制。
文档编号A61K48/00GK1408851SQ0114144
公开日2003年4月9日 申请日期2001年9月25日 优先权日2001年9月25日
发明者李德新, 胡孔新, 王晓芳, 李川, 孟祥芝, 梁米芳 申请人:中国预防医学科学院病毒学研究所