专利名称：干燥综合征的治疗剂的制作方法
技术领域：
此发明关于干燥综合征(sjoegren综合征)的治疗剂。
更具体而言，关于以诱导型一氧化氮合成酶(inducible NOS；有时简写为i-NOS)抑制剂为有效成分的干燥综合征治疗剂和/或预防剂。
干燥综合征是炎症的一种，众所周知，和各种炎症性因子、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(INF-γ)一同被发现的还有诱导型一氧化氮合成酶。而且这些诱导型一氧化氮合成酶集中在腺组织(汨腺、唾液腺)。(Curr.Eve Res.，17(12)，1135-42(1998)，ArthritisRheum.，40(5)，875-83(1997)。不过没有弄清楚的地方也很多，比如哪个因子是主要原因等等。
另外，发现具有免疫机能的细胞巨噬细胞可以产生大量的硝酸盐，根据这一发现，一氧化氮可以在生物体内生成这一现象也被发现了(Proc.Natl.Acad.Sio.USA，82，7738-7742(1985)，J.Immunol.，138，550-565(1987))。另外，在循环系统中发现了由血管内皮细胞释放的具有弛缓作用的物质，并将其命名为血管内皮源弛缓因子(Endotherium Derived Relaxation Factor；简写为EDRF)，同时发现此EDRF是NO.(Nature，327，524-526(1987))。
已被发现可以在生物体内生成的NO是以L-精氨酸为底物通过一氧化氮合成酶(NOS)按下列途径生成的。 NOS里至少存在非诱导型(血管内皮型和神经型)和诱导型同功酶。血管内皮型NOS主要存在于血管内皮细胞，其活性受细胞内钙浓度的控制。神经型NOS(constitutive NOS；简写为c-NOS)存在于中枢神经细胞、末梢神经细胞或胰岛β细胞、消化管神经、肾上腺髓质、肾脏致密斑等中，和血管内皮型NOS一样，其活性也受到钙浓度的控制。
血管内皮型NOS和神经型NOS(c-NOS)持续地存在于细胞内，几乎看不到由于生理变化而引起的酶量变化。诱导型一氧化氮合成酶(i-NOS)存在于肝细胞、嗜中性粒细胞，巨噬细胞、平滑肌、纤维原细胞、肾小球膜细胞、消化管上皮细胞，胰岛β细胞，血管平滑肌细胞或胶质细胞等中。通常未在细胞内发现，它们被内毒素和各种细胞因子刺激所诱导。
本申请请求保护本发明使用的有效成分的优选方案式(I)中所示的化合物作为诱导型一氧化氮合成酶(i-NOS)抑制剂。(参见EP870763)
在干燥综合征中，诱导型一氧化氮合成酶只是出现在腺组织中，所以本发明人考虑是否可以通过抑制诱导型一氧化氮合成酶来缓解病情，因此尝试了诱导型一氧化氮合成酶抑制剂，发现其可以有效地抑制病变，改变腺液量，从而完成了此项发明。本发明首次发现了诱导型一氧化氮合成酶抑制剂可以应用于干燥综合征模型，并且对该模型效果很好。
本发明中使用的诱导型一氧化氮合成酶抑制剂是指能够抑制诱导型的一氧化氮合成酶的物质以及具有此作用的所有的化合物。
因此其不仅包括现已公布的诱导型一氧化氮合成酶抑制剂，还包括以后新发现的诱导型一氧化氮合成酶抑制剂。例如，可列举作为底物竞争剂的精氨酸类似物Nω-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)、Nω-硝基-L-精氨酸(L-NNA)、Nω-氨基-L-精氨酸(L-NAA)、Nω-亚氨基乙基-鸟氨酸(L-NIO)等。另外，还可列举辅助因素(cofactor)竞争结合抑制剂二苯撑碘(DPI)、二-2-噻吩基碘(DTI)、钙调磷酸酶等，但是并不只限于这些。
另外，WO96/35677、WO95/11231、WO96/14844、WO96/14842说明书中所记载的化合物等，也可用作诱导型一氧化氮合成酶抑制剂，因此这些化合物在干燥综合征方面的应用也包括在本发明中。
本发明使用的i-NOS中，优选的方案为式(I)所示的缩合的哌啶化合物、其酸加成盐或其水合物， (式中-R1-与键合位置处的碳原子一起，代表三元或者四元碳环，环缩合在哌啶环的d或者e处，或者以螺环结合的方式键合在哌啶环4位上，R2代表C1～6的烷基，R3代表C1～6的烷基、C2～6的烯基、C2～6的炔基或者卤素原子，R4代表氢原子、氨基-C1～4烷基、以及任选被氨基-C1～4烷基取代的碳环-C1～4烷基，i代表0或者1～3的整数，n代表0或者1～3的整数，但是，多个的R2和R3可以相同，也可以不同。)在式(I)所示的化合物中，优选的化合物是式(IA)中所示的缩合哌啶化合物、其非毒性盐或其水合物。 (式中的标号与前面的标记意思一致)在式(IA)中所示的化合物中，优选的化合物为式(Ia)所示的缩合哌啶化合物(即(+)-反-3-亚氨基-5-甲基-7-氯-2-氮杂双环[4.1.0]庚烷)、其非毒性盐或者其水合物。 本发明中使用的化合物可以用下面的酸的加成盐的形式加入。酸加成盐优选无毒的水溶性物质。适用的酸加成盐有盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐，硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐等无机盐类；乙酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、草酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、安息香酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、羟乙基磺酸盐、葡糖醛酸盐、葡萄酸盐等有机盐类。优选盐酸盐。
本发明化合物或其盐类可以根据已知的方法转换为它的水合物。[本发明化合物的制备方法]式(I)、(IA)和(Ia)所示的本发明化合物可以根据EP870763号说明书上所记载的方法制备。[本发明化合物的药理活性]
式(I)、(IA)或(Ia)中所示的本发明化合物对诱导型一氧化氮合成酶具有很强的抑制活性，正如后面所述，其对干燥综合征模型非常有效。基于此现象，我们认为对诱导型一氧化氮合成酶具有抑制活性的化合物可以有效用于干燥综合征。[毒性]经验证，式(I)、(IA)或(Ia)所示的本发明化合物的毒性非常低，可以作为医药品使用，十分安全。例如使用式(Ia)中所示的本发明化合物对小鼠进行静脉注射试验，其最大耐用量为30mg/kg。生产上的可利用性[在医药品上的应用]本发明中使用的诱导型一氧化氮合成酶(i-NOS)抑制化合物、其酸加成盐或其水合物可以用于干燥综合征的治疗和/或预防。
通常，将本发明中使用的诱导型一氧化氮合成酶(i-NOS)抑制化合物、其酸加成盐或其水合物用于上述目的时，可以用于全身或者局部，经口或者非经口形式使用均可。
用药量根据年龄、体重、症状、疗效、使用方法、处理时间等不同，一般来说，经口的话，成人每人一次使用的范围为0.1μg～50mg，一天可以使用一次或者多次。非经口的话，成人每人一次使用的范围为0.01μg～50mg，一天可以使用一次或者多次。(优选采用静脉内用药、滴眼、鼻腔内、口腔内用药等)或者一天持续静脉内用药1h～24h。
当然，如前所述，用药量根据条件不同而有很大的变化，所以有些时候的用药量会比上述的多或者少。
使用本化合物时，作为经口用药，可以做成内服用固体药剂和内服用液体药剂作为非经口用药，可以做成注射剂、外用药、栓剂等。
作为经口用药的内服用固体药剂包括锭剂、丸剂、胶囊、粉剂、粒剂等。另外还包括漱口剂、舌下含片等，它们主要是通过插入并粘着在口腔内使用。胶囊药包括硬胶囊和软胶囊两种。
这些内服用固体药剂可以通过常规的方法来制备，主要是将一种或者几种活性物质保持原样，或者用辅药(乳糖、甘露醇、葡萄糖、微结晶纤维素、淀粉)、粘合剂(羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硅铝酸镁)、崩解剂(纤维素羟乙酸钙等)、润滑剂(硬脂酸镁等)、稳定剂、溶解助剂(谷氨酸、天冬氨酸等)等将其混合后来制备。另外，根据需要还可以涂一些涂层剂(白糖、明胶、羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素苯二甲酸脂等)，或者也可以涂两层以上的涂层。当然也包括类似明胶的、可被吸收物质的胶囊。
作为经口用药的内服用液体药剂包括药剂上允许的水剂、悬浊剂、乳剂、糖浆、酏剂等。在液剂中，一种或者一种以上的活性物质被常用的稀释剂(精制水、乙醇或者它们的混合液)溶解、悬浊或者乳化。另外，这些液体药剂中也可以含有湿润剂、浊化剂、乳化剂、甜味剂、添味剂、芳香剂、防腐剂、缓冲剂等。
作为非经口用药的注射剂包括溶液、悬浊液、乳浊液和即用即溶或悬浊于溶剂中的固体注射剂。注射剂是将一种或者一种以上的活性物质溶解、悬浊或者乳化在溶剂中使用的。作为溶剂，可以使用注射用的蒸馏水、生理盐水、植物油、丙二醇、聚乙二醇、类似乙醇的醇类等以及它们的混合液。此外，这些注射剂中还可以含有稳定剂、溶液助剂(谷氨酸、天冬氨酸、聚山梨醇脂80(注册商标)等)、浊化剂、乳化剂、镇痛剂、缓冲剂、防腐剂等。这些在最后的工序中经灭菌或者无菌操作法制备。另外，也可制造无菌的固体药如冷冻干燥品，在使用前对其进行无菌化操作或者将其溶解在无菌的注射用蒸馏水或其它溶剂中再使用。
作为非经口的其它制剂包括外用液体药剂、软膏、涂剂、吸入剂、喷剂、栓剂以及阴道内用栓剂等，它们都含有一种或一种以上的活性物质，可以通过常规的方法制备。
外用液体药剂包括用常规方法制备的滴眼剂，与非经口用的外用液体药剂相同，滴眼剂中也可以含有稳定剂、溶解助剂、浊化剂、乳化剂、镇痛剂、缓冲剂、防腐剂，此外也可以含有渗透压调节剂(甘露醇、甘油、氯化钠、氯化钾等)、增粘剂(羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素)。
喷剂中除了可以含有常用的稀释剂以外还可以含有稳定剂如亚硫酸氢钠，提供等渗作用的缓冲剂如氯化钠或者诸如柠檬酸钠、柠檬酸的等渗剂。喷剂的制备方法在美国专利第2,868,691号和美国专利第3,095,355号说明书中都有很详细的记载。
附图简述
图1表示的是使用和未使用本发明化合物的目标器官组织(下颚唾液腺、舌下腺、腮腺、泪腺)在病变上的不同。
实例1本化合物对模型小鼠的自然发病干燥综合征的调节效果NFS/sId雌鼠在出生后第三天摘出胸腺，四周后即引发干燥综合征(Journal.Of Immunology，153，2769(1994))。在使用这只鼠进行组织学腺体障碍观察之前，在小鼠的第三周龄到第八周龄的时间里，用式(IA)中所示的本化合物(5μg/kg)对小鼠进行皮下用药，每天一次。未用药(病情对照样)的有3例，用药的有5例，第八周时将刺激剂(盐酸匹鲁卡品0.5mg/kg)在腹腔内给药，测定其唾液腺液量、泪腺液量并对其组织样态进行评价。[结果]下面表1、表2中列出了在投入了刺激剂以后，每1克体重的腺液(泪腺分泌液、唾液腺分泌液)量在35分钟内每5分钟测一次的测定累加值(AUC)。从中可以发现泪腺分泌液和唾液腺分泌液都有很明显的改变。
表1
表2
从图1可以看出，本化合物对各种目标器官(下颚唾液腺、舌下腺、腮腺、泪腺)上的病变有很好的抑制作用。由记分可知，其在各腺中可以改善1/3～1/2。此记分是按照White和Casartt们的基准制定的。(Journal of Immunology，112，178(1974))[制剂例]制剂例1锭剂的制备用常规的方法将下列化合物混合、制锭，得到100片锭剂，其中每片锭剂中含有1mg活性成分。
化(+)-反-3-亚氨基-5-甲基-7-氯-2-氮杂双环[4.1.0]庚烷盐酸盐……………………………………………………………100mg纤维素羟乙酸钙(崩解剂)………………………………………200mg硬脂酸镁(润滑剂)…………………………………………100mg微晶纤维素…………………………………………………19.6g制剂例2注射剂的制备将(+)-反-3-亚氨基-5-甲基-7-氯-2-氮杂双环[4.1.0]庚烷(10mg)盐酸盐溶解在蒸馏水(100ml)中，取每10ml溶液注入到50ml安瓿中，按常规方法冷冻干燥，得到含有1mg有效成分的安瓿10支。制剂例3滴眼剂的制备将(+)-反-3-亚氨基-5-甲基-7-氯-2-氮杂双环[4.1.0]庚烷(100mg)盐酸盐溶解在蒸馏水(100g)中，取每10ml溶液注入到12ml滴眼用的容器中，得到含有0.1％有效成分滴眼剂10支。
权利要求
1.干燥综合征的治疗剂和/或预防剂，以诱导型一氧化氮合成酶抑制剂为有效成分。
2.根据权利要求1的干燥综合征的治疗剂和/或预防剂，其特征在于有效成分为式(I)所示的缩合的哌啶化合物、其酸加成盐或其水合物， (式中-R1-与键合位置处的碳原子一起，代表三元或者四元碳环，环缩合在哌啶环的d或者e处，或者以螺环结合的方式键合在哌啶环4位上，R2代表C1～6的烷基，R3代表C1～6的烷基、C2～6的烯基、C2～6的炔基或者卤素原子，R4代表氢原子、氨基-C1～4烷基、以及任选被氨基-C1～4烷基取代的碳环-C1～4烷基，i代表0或者1～3的整数，n代表0或者1～3的整数，但是，多个的R2和R3可以相同，也可以不同。)
3.根据权利要求2的干燥综合征的治疗剂和/或预防剂，其特征在于有效成分为式(IA)所示的缩合的哌啶化合物、其非毒性盐或其水合物。 (式中标号的意义与权利请求2中相同)
4.根据权利要求3的干燥综合征的治疗剂和/或预防剂，其特征在于有效成分为式(Ia)所示的缩合的哌啶化合物、其非毒性盐或其水合物。
5.根据权利要求1的干燥综合征的治疗剂和/或预防剂，其特征在于有效成分选自WO96/35677号、WO95/11231号、WO96/14844号和WO96/14842号说明书中所记载的诱导型一氧化氮合成酶抑制剂化合物。
全文摘要
发现诱导型一氧化氮合成酶(i－NOS)抑制剂对干燥综合征非常有效，基于这一发现制成了以i－NOS抑制剂为有效成分的干燥综合征治疗剂和/或预防剂。作为i－NOS抑制剂可优选使用例如为式(I)化合物(式中标号按照说明书中记载)、其非毒性盐或其水合物。
文档编号A61K31/438GK1418110SQ01806873
公开日2003年5月14日 申请日期2001年2月9日 优先权日2000年2月10日
发明者林良夫 申请人:小野药品工业株式会社