专利名称：白芍甘草提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及中草药的提取，具体地说是白芍和甘草提取物，及其制备方法。
临床上有大量文献和病例的报道，总结起来对多种神经、肌肉系统的痉挛疼痛、内脏平滑肌的挛急疼痛有效。不管是中枢性的、末梢性的，均有镇静作用，能缓解挛急、制止疼痛。
化学上芍药主要包括白芍和赤芍二种，芍药有效成分为芍药苷类。是一类松油二环烷单萜化合物。甘草主要有效成分为三萜酸类(甘草酸、甘草次酸等)和黄酮类(FM--100)。
药理上对胃肠平滑肌运动有抑制作用、有抑制胃液分泌。有镇痛、镇静、消炎作用。对神经--肌肉传导有阻断作用。
芍甘汤用水提取已开发为三类新药(中药)-健肝乐颗粒剂，治疗急慢性病毒性肝炎。但由于白芍、甘草用水提取，提取物含白芍总苷、甘草总黄酮、甘草三萜酸三个有效部位群含量较低，如何提高有效部位群的含量和疗效，这是目前急待解决的问题之一。
本发明目的可以通过如下措施来达到白芍甘草提取物由下述按重量计的原料和配方组成白芍∶甘草的配比为1∶1-3∶1。
白芍甘草提取物的制备方法是白芍和甘草混合或分别提取，用40-80％乙醇回流提取三次(最好为60-70％)，合并提取液，浓缩至无醇时，加蒸馏水至3倍体积，过滤或者离心，滤液混合或分别上大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至无还原糖反应，再用20-95％乙醇洗脱至无苷反应(最好为50-70％)，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得淡黄色或棕黄色粉末。
提取物干粉和适当的药用辅料一起制成口服制剂或注射剂，可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、锭剂、口服液、注射剂、输液等多种制剂。
白芍甘草提取物含有三个有效部位群-白芍总苷、甘草总黄酮和甘草三萜酸，三个有效部位群的总含量大于50％，该三个有效部位群可以为1-3个单独或几个，以不同的比例组合在一起。
白芍甘草经提取后所得提取物白芍总苷，甘草总黄酮，甘草三萜酸，即三个有效部位群几组最佳组合如表1白芍总苷mg干粉/kg 甘草总黄酮mg干粉甘草三萜酸mg干粉(g生药/kg)/kg /kg(g生药/kg) (g生药/kg)160(6.4) 400(8.4) 150(3.8)160(6.4) 200(4.2) 300(7.6)320(12.8) 200(4.2) 300(7.6)白芍和甘草的提取液，可以分别过大孔吸附树脂柱处理，也可以混合在一起过大孔吸附树脂柱。大孔吸附树脂可以用苯乙烯骨架的或其他类型的大孔吸附树脂，如D-101，DM-301，ADS-系列，NKA-系列，AB-8，X-5，Amberlite XAD-系列，Diaion HP-系列等。用大孔吸附树脂吸附的有效部位群(白芍总苷、甘草总酸和甘草总黄酮)，再用稀乙醇从大孔吸附树脂上洗脱，乙醇的浓度以50％-70％较好。洗脱液经减压浓缩和喷雾干燥成提取物干粉。
本发明相比现有技术具有如下优点用乙醇提取白芍甘草后，所得三个有效部位群白芍总苷、甘草总黄酮、甘草三萜酸提取物含量高，疗效好，三个部位中的任意1-3个的组合，单独或配伍使用都具有明显的解痉止痛作用，其镇痛程度与中等镇痛药吲哚美辛4mg/kg相当或更好。
实施例一
取2kg白芍生药颗粒，用16L 70％乙醇回流提取、每次1小时，提取2次。过滤，合并提取液。浓缩至无醇味，加蒸馏水至3倍体积。离心，上清液上大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至无还原糖反应，再用50％乙醇洗脱至无苷反应。合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得到淡黄色粉末80g(含白芍总苷50％以上)。
取1kg甘草饮片，用10L 60％乙醇回流提取、每次1小时，提取3次，离心过滤，合并提取液。浓缩至无醇味，加蒸馏水至3倍体积。过滤。滤液上大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至无还原糖反应，再用70％乙醇洗脱至无苷反应。合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得到棕黄色粉末155g(含甘草三萜酸和甘草总黄酮50％以上)。
实施例二取2kg白芍生药颗粒，用16L 40％乙醇回流提取、每次1小时，提取2次。过滤，合并提取液。浓缩至无醇味，加蒸馏水至3倍体积。离心，上清液上大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至无还原糖反应，再用20％乙醇洗脱至无苷反应。合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得到淡黄色粉末75g(含白芍总苷50％以上)。
取1kg甘草饮片，用10L 60％乙醇回流提取、每次1小时，提取3次，过滤，合并提取液。浓缩至无醇味，加水至2倍体积，加盐酸调pH至2，放置至沉淀完全，过滤。滤渣用水洗涤，用稀乙醇提取，稀乙醇提取液浓缩至干得棕黄色粉末98g(含甘草三萜酸50％以上)。
滤液用碱调pH7，上大孔树脂柱，先用水洗脱至无还原糖反应，再用95％乙醇洗脱至无苷反应。合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得到棕黄色粉末55g(含甘草总黄酮50％以上)。
实施例三取白芍2kg和甘草1kg药材颗粒或饮片，混合用30L 60％乙醇回流提取3次、合并提取液，浓缩至无醇味，加蒸馏水至3倍体积，过滤。滤液上大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至无还原糖反应，再用70％乙醇洗脱。合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干或喷雾干燥，得到棕黄色粉末246g(含白芍总苷、甘草三萜酸和甘草总黄酮50％以上)。
实施例四取白芍2kg和甘草1kg药材颗粒或饮片，混合用30L 80％乙醇回流提取3次、合并提取液，浓缩至无醇味，加蒸馏水至3倍体积，过滤。滤液上大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至无还原糖反应，再用70％乙醇洗脱。合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干或喷雾干燥，得到棕黄色粉末232g(含白芍总苷、甘草三萜酸和甘草总黄酮50％以上)。
下面列举五个应用实例应用实例1取2kg白芍药材和1kg甘草药材的提取物，粉碎并过100目筛，加入适量淀粉至300g，混合均匀。以80％乙醇为粘合剂，在包衣锅中滚制成10-20目的微丸。分装，每1.2g为一袋。
每日3次，每次1袋。
应用实例2取2kg白芍药材和1kg甘草药材的提取物，粉碎并过100目筛，加入适量糖粉至300g，混合均匀。以90％乙醇为粘合剂，过40目筛制成颗粒剂，60℃烘干，整粒后进行分装，每1.2g为一袋。
每日3次，每次1袋。
应用实例3取2kg白芍药材和1kg甘草药材的提取物，粉碎并过100目筛，加入适量淀粉至300g，混合均匀。装0号胶囊，制成1000粒胶囊剂。
每日3次。每次4粒。
或按应用实施例2的方法，过60目筛制粒，60℃烘干，整粒后装0号胶囊，制成1500粒。
每日3次。每次6粒。
应用实例4取2kg白芍药材和1kg甘草药材的提取物，粉碎后过100目筛、混匀，加入微晶纤维素20g，用可压性淀粉调至300g，再加入0.5％硬脂酸镁，混合均匀后粉末直接压制成1000片，制成片剂。
每日3次，每次4片。
应用实例5取2kg白芍药材和1kg甘草药材的提取物，加注射用水约8000ml，用5％NaOH溶液调至pH7.3-7.5。加注射用水至10000ml，用3号垂熔漏斗过滤。灌封于安瓿中，每支2ml，灭菌消毒，制成注射剂。
每次1支，肌肉注射或静脉滴注用。
本发明对芍药和甘草中的三个有效部位群白芍总苷，甘草总黄酮，甘草三萜酸三个提取物用小鼠化学致痛模型，进行拆方和组方筛选，即采用正交实验析因分析等方法进行了镇痛有效剂量范围，最佳剂量及最佳组合，相互作用的研究。
芍甘提取物药理试验证明对解痉、镇痛、抗溃疡、抗炎、保肝等均有明显的作用。一.解痉、镇痛作用1.对小鼠醋酸扭体反应的影响结果显示，高、中剂量组有明显的镇痛作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01-0.001)。
对醋酸扭体反应的镇痛作用(x±s)组别剂量动物数扭体出现动扭体次数(mg/k)(只) 物数(只)空白组- 10 1029.60±10.43吲哚美辛 5 10 4 0.6±0.97***高剂量800 10 9 12.8±7.86**中剂量400 10 1013.1±7.43**低剂量200 10 1016.0±12.51注与空白组相比**P＜0.01，***P＜0.001.2.对催产素所致子宫剧烈收缩的影响结果显示芍甘提取物高剂量组对催产素致大鼠子宫痉挛收缩具有明显的解痉作用。
芍甘提取物对催产素导致大鼠子宫痛觉的影响(x±s)组别 剂量 动物数扭体次数 扭体发生率(mg/ (只) (％)kg)30min60min 30min60min空白组- 5 2.80±1.924.40±1.5280 100妇痛宁 5 0.4±0.55*1.00±1.00** 40 60高剂量400 5 0.80±0.842.00±1.00* 60 100中剂量200 5 2.80±1.924.00±1.2280 100低剂量100 5 3.80±1.485.20±1.10100 100注与空白组相比*P＜0.05，**P＜0.01.二.对胃肠运动机能的影响1.对全胃运动机能的影响用雄性小鼠灌胃法，测定相对胃内色素残留率。结果显示高，中剂量组可使胃排空、胃蠕动减慢，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。芍甘提取物对小鼠胃排空的影响(x±s)组别 剂量 动物数 相对胃内色素残留率(mg/kg) (只)空白组 -10 100.00±39.79阿托品 20 10 158.94±34.31*高剂量 400 10 144.82±29.32*中剂量 200 10 147.03±39.96*低剂量 100 10 105.13±43.23注与空白组相比*P＜0.05.2.对小肠推进运动的影响用小鼠测定墨汁在肠内推进距离。结果显示芍甘提取物各剂量组明显减慢小肠推进速度，推进率降低，但并没影响肠容积。与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。
对小鼠小肠蠕动的影响(x±s n＝10)组别 剂量 小肠总长 墨汁推进距 墨汁推进率 肠容积(mg/kg)度(cm) 离(cm) (％) 变化空白组- 47.3±5.8 39.8±7.7 84.1 不变胃苏颗粒120045.6±4.1 45.2±4.2 99.1 稍扩大高剂量 800 47.2±3.2 31.2±5.6* 66.1 不变中剂量 400 47.1±2.7 29.9±12.4*63.2 不变低剂量 200 46.4±2.4 30.1±5.8**64.6 不变注与空白组相比*P＜0.05，**P＜0.01。三.对炎症模型的影响1.对大鼠棉球肉芽肿慢性炎症的影响雄性大鼠棉球肉芽肿增生法测定结果显示，与空白组比较高剂量组具有明显抑制大鼠棉球肉芽肿增生的作用(P＜0.05)。
对大鼠棉球肉芽肿慢性炎症模型的作用结果(x±s)组别 剂量动物数(只)肉芽肿相对重量(mg/kg)(mg/100g鼠体重)空白组 - 1052.36±6.11吲哚美辛 8 1040.17±4.04***高剂量 8001045.28±6.12*中剂量 4001048.82±5.03低剂量 2001051.33±3.92注与空白组相比*P＜0.05，***P＜0.001。2.对急性炎症小鼠耳肿胀的影响小鼠耳肿胀试验结果显示，与空白组比较，高、中、低剂量组对小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，量效关系明确(P＜0.05)。对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀的抑制作用结果(x±s)剂量组别 动物数(只)耳肿胀百分率(％)(mg/kg)空白组 - 10 103.26±24.35吲哚美辛组 10 10 58.47±19.14***高剂量组 80010 68.11±24.10***中剂量组 40010 74.56±25.44**低剂量组 20010 81.13±21.10*注与空白组相比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001四.对离体肠平滑肌和子宫平滑肌的影响1.对离体肠平滑肌的影响大鼠十二指肠及空肠对Ach(乙酰胆碱)致肠平滑肌痉挛的拮抗作用实验结果表明，芍甘提取物三个剂量组，随剂量的增大，其拮抗Ach对肠平滑肌强直收缩作用越明显，并明显降低收缩幅度，减少收缩频率；三个剂量组对离体肠管具有明显的抑制作用，随药物剂量的增大，对肠收缩幅度降低越明显，与溶媒组比较有显著性差异(P＜0.01)。
芍甘提取物对离体大鼠肠收缩张力的影响组别剂量 收缩张力(g)(x±s)溶媒 0.05ml 0.33+0.190.1ml 0.31+0.190.2ml 0.34+0.19芍甘提取物 0.05ml×30％ 0.14+0.11#0.1ml×30％0.18+0.13#0.2ml×30％0.11+0.10##Ach0.1ml×3×10E-3mol/l 1.91+0.40芍甘提取物+Ach 30％×0.05ml+0.1ml×3×10 0.99+0.37**E-3mol/l30％×0.1ml1.11+0.19**+0.1ml×3×10E-3mol/l30％×0.2ml0.96+0.44**+0.1ml×3×10E-3mol/lAch+芍甘提取物 0.1ml×3×10E- 1.22+0.76*3mol/l+30％×0.05ml0.1ml×3×10E- 1.28+1.203mol/l+30％×0.1ml0.1ml×3×10E- 1.30+0.48**3mol/l+30％×0.2ml注与Ach组相比*P＜0.05，**P＜0.01。
与相应浓度溶媒组相比#P＜0.05，##P＜0.01。2.对离体大鼠子宫活动的影响对正常离体子宫平滑肌的影响实验结果显示溶媒对照组的大鼠子宫在来氏液中有明显的自动节律性收缩。芍甘提取物0.025ml组，能轻度降低子宫平滑肌收缩曲线的幅度和频率；芍甘提取物0.05ml组可明显降低子宫收缩曲线的幅度和频率；芍甘提取物0.1ml组，可明显抑制子宫节律性收缩，使收缩波变平坦或消失，有松弛平滑肌的作用。
芍甘提取物对垂体后叶素的拮抗作用实验显示垂体后叶素阳性对照组，可使子宫平滑肌迅速出现强直收缩，继而出现子宫收缩频率增快，波幅增大。芍甘提取物0.025ml组，有减弱垂体后叶素收缩子宫平滑肌的趋势；芍甘提取物0.05ml组，可缩短垂体后叶素强烈收缩子宫的持续时间，可部分拮抗垂体后叶素对子宫的作用。芍甘提取物0.1ml组，可明显拮抗垂体后叶素兴奋子宫的作用，使垂体后叶素引起的子宫强直收缩的幅度迅速变小，频率减慢，以致收缩波消失。
对离体小鼠子宫收缩张力及收缩频率的影响(x±s)组别 剂量 收缩张力变化值 收缩频率(次/分)溶媒 0.05ml 1.23±0.03 0.79±0.23芍甘提取物 0.025ml×30％ 0.59±0.90* 0.62±0.190.05ml×30％ 0.17±1.07**0.86±0.590.1ml×30％0.19±0.71*** 0.00±0.00***垂体后叶素 0.1u×3×10E-3mol/l3.19±0.76 2.90±2.04***垂体后叶素+ 0.1u+30％×0.025ml 0.74±0.94### 1.35±0.32#芍甘提取物 0.1u+30％×0.05ml 1.01±1.19### 1.28±0.500.1u+30％×0.1ml 2.10±1.23# 0.80±0.50##注与垂体后叶素组相比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001。
与溶媒组相比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。五.对胃溃疡模型的影响1.对水浸法诱导大鼠胃溃疡模型的影响实验结果显示各剂量组对水浸法引起的应激性溃疡有明显的对抗作用，使溃疡发生率降低与对照组比较有显著性差异(p＜0.05-0.001)。
对水浸法诱导的大鼠胃溃疡模型的影响(x±s)组别 剂量 动物数胃溃疡指数溃疡抑制率(mg/kg) (只) (％)空白组 - 10 11.30±5.10 -胃苏颗粒 8000 10 4.20±4.39** 62.83高剂量 40010 6.30±5.36* 44.25中剂量 20010 6.10±5.16* 46.02低剂量 10010 4.00±3.20** 64.60注与空白组相比*P＜0.05，**P＜0.01。2.抗乙醇致胃粘膜损伤试验乙醇致胃粘膜损伤实验结果显示，与空白对照组相比较，高、中剂量组对胃粘膜损伤均有明显抑制作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；低剂量组也有一定的作用。
芍甘提取物对乙醇致胃粘膜损伤及抑制率的影响动物数 剂量 溃疡指数(x±S) 溃疡抑制率组号(只) (mg/k) (％)空白10-103.3±40.9胃苏颗粒 10 8000 46.3±18.1**55.2芍甘提取物10 100 45.2±19.8 56.2芍甘提取物10 200 16.3±8.8** 84.2芍甘提取物10 400 15.7±10.7**84.8注与空白对照组比较 **P＜0.013.对阿司匹林诱导大鼠急性胃炎模型的影响结果显示，各剂量组对阿司匹林引起的急性胃炎具有明显的减轻作用，并使溃疡发生率降低，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。表14.对Asprin诱导的大鼠胃炎模型的影响(x±s)组别剂量(mg/kg)动物数(只) 胃溃疡指数空白组 - 5 5.80±4.44胃苏颗粒80005 2.50±1.10*高剂量 400 5 2.10±1.91*中剂量 200 5 1.80±1.68*低剂量 100 5 2.30±1.21*注与空白组相比*P＜0.05上述药理试验表明，芍药甘草有效部位群提取物显示对小鼠醋酸引起的疼痛具有明显的镇痛作用，明显减少扭体发生次数；对催产素引起的大鼠子宫绞痛具有明显的解痉作用；具有明显抑制正常张力下的肠道平滑肌收缩功能；可明显拮抗乙酰胆碱所致大鼠离体肠平滑肌的收缩功能；也具有明显抑制子宫平滑肌收缩活动、并明显拮抗垂体后叶素兴奋子宫平滑肌作用，且都具有明显量效关系。芍甘提取物具有明显的抑制胃肠推进作用，明显减慢全胃蠕动和小肠蠕动，使胃肠推进时间明显减慢，使胃肠排空明显降低。对二甲苯致耳肿胀和对大鼠慢性棉球肉芽肿炎症模型具有明显的抑制作用。芍甘提取物灌胃给药对多种溃疡模型具有明显的抑制作用，可明显减少水浸法诱导大鼠胃溃疡的发生；对乙醇致胃粘膜损伤试验都具有显著的抑制作用；对Asprin诱导的大鼠胃炎模型具有明显的抑制作用。
此外，芍甘提取物可明显降低D-半乳糖和四氯化碳引起的小鼠血清ALT和AST增高，明显减轻肝细胞的变性和坏死，对小鼠实验性肝损伤有明显的保护作用。
因此，本发明的有效部位群提取物及其制剂有酸甘化阴、缓急止痛之功用，主治阴血不足，血行不畅，症见手足拘挛，筋脉挛缩，脘腹疼痛、胃络拘急等。用于神经、肌肉和内脏的急慢性挛急疼痛的解痉止痛。例如，肌肉系统疾病腓肠肌痉挛、面肌痉挛、风湿性舞蹈病、下肢拘挛性疼痛；神经系统疾病三叉神经痛、坐骨神经痛、胸肋痛及肋间神经痛、神经官能性头痛；消化系统疾病胃脘痛、胃及十二指肠溃疡、妇女的月经痛、胃扭转、肠道蛔虫症、腹痛和蛔虫性肠梗阻、急性水肿性胰腺炎。
本发明有效部位群提取物及其制剂还有养血护肝、解毒止痛，降酶褪黄之功用，可以治疗急、慢性病毒肝炎等。
权利要求
1.白芍甘草提取物，其特征在于由下述按重量计的原料和配方组成白芍∶甘草的配比为1∶1-3∶1。
2.白芍甘草提取物的制备方法，其特征在于白芍或甘草混合或分别提取，用40-80％乙醇回流，提取三次，合并提取液，浓缩至无醇时，加蒸馏水至3倍体积，过滤或者离心，滤液混合或分别上大孔树脂柱，先用水洗脱至无还原糖反应，再用20-95％乙醇洗脱至无苷反应，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得淡黄色或棕黄色粉末。
3.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于白芍甘草用60-70％乙醇回流；滤液上大孔树脂柱，用水洗脱后，用50-70％乙醇洗至无苷反应。
4.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于白芍甘草提取物含有三个有效部位群-白芍总苷、甘草总黄酮和甘草三萜酸，三个有效部位群的总含量应大于50％；该三个有效部位群可以为1-3个单独或几个，以不同的比例组合在一起。
5.根据权利要求1或2所述的提取物，其特征在于提取物干粉和适当的药用辅料一起制成口服制剂或注射剂，可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、锭剂、口服液、注射剂、输液等多种制剂。
全文摘要
本发明涉及白芍甘草提取物及其制备方法，本发明白芍甘草的配比按重量计为1∶1－3∶1，具体制备方法详见说明书，本发明优点是提取物含白芍总苷、甘草总黄酮、甘草三萜酸三个有效部位群，总含量大于50％，疗效好，三个部位中的任意1－3个的组合，单独或配伍使用均有不同程度的解痉止痛作用，三种提取物单独式配伍使用都具有明显的镇痛作用，芍甘提取物制成干粉可以制成口服制剂或注射剂，本发明产品有酸甘化阴、缓急止痛之功用，主治阴血亏虚，血行不畅，症见手足拘挛，筋脉挛缩，脘腹疼痛等。用于神经、肌肉和内脏的急慢性挛急疼痛的解痉止痛和养血护肝、解毒止痛，降酶褪黄，治疗急慢性病毒肝炎等。
文档编号A61P29/00GK1416888SQ0215668
公开日2003年5月14日 申请日期2002年12月19日 优先权日2002年12月19日
发明者徐文豪, 苑可武, 白芳, 凌海燕 申请人:中国医药研究开发中心