专利名称：熊去氧胆酸的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及熊去氧胆酸的新用途，特别是在制备治疗痔疮药物中的用途。
背景技术：
痔是肛垫病理性肥大，移位及肛周皮下血管丛血流淤滞形成的团块，以齿线为界分内、外痔。痔疮的临床主要表现为出血、疼痛、水肿、糜烂、瘙痒等，是临床常见病。常规痔疮的治疗分手术治疗和非手术治疗。手术治已经被证实导致肛漏等难以避免的并发症，并且往往伴有出血、疼痛、斑痕等，一般患者不易接受。而一般的药物治疗只能解决局部炎症感染问题，被医生广泛使用的粘膜保护剂，同样增加创面感染的机会，并且延长了患者康复所需时间。因此，寻找有效的治疗痔疮药物仍然是制药行业当前的主要目标之一。
熊去氧胆酸(ursodeoxycholi cacid)最早从熊的胆汁中分离出来，其化学名为3α，7β-二羟基胆烷酸，是鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid)的7β-羟基差向异构体。20世纪80年代，发现本品除了能有效溶解胆固醇性结石外，还有利胆、保护肝细胞等重要作用。但是，到目前为止，还未见应用熊去氧胆酸治疗痔疮的任何报道。
发明内容
本发明目的就是提供一种熊去氧胆酸在制备治疗痔疮药物中的应用。
熊去氧胆酸在制备治疗痔疮药物中的应用中，可以是以单独的熊去氧胆酸为原料制成适合的剂型，也可以将熊去氧胆酸与其他药物配合制成复方制剂。
这里的熊去氧胆酸可以是人工合成的，也可以是丛熊胆中提出的。
用熊去氧胆酸制备治疗痔疮的栓剂，其原料是由熊去氧胆酸、混合脂肪酸甘油酯、没食子酸丙酯、胶性二氧化硅所组成，具体制备方法是配方熊去氧胆酸 100mg混合脂肪酸甘油酯1100g没食子酸丙酯0.1g胶性二氧化硅50g取熊去氧胆酸加纯化水50ml使溶解，再加入没食子酸丙酯混匀，备用。取混合脂肪酸甘油酯，加热熔融，加入胶性二氧化硅，混匀，再加入上述熊去氧胆酸溶液，保温搅拌均匀，浇模，冷却，即得。
熊去氧胆酸在制备治疗痔疮药物中的用途，其药理作用主要体现在
1、本发明的化合物被发现可以诱导创面组织细胞去分化为干细胞，并启动再生性修复。
2、同时改善创面修复环境清除创面异物，清除创面病原微生物，改善微循环，解除盆底肌群痉挛，控制炎症反应，由此加速肛垫创面的修复。
与现有技术相比，本发明具有如下优点1、熊去氧胆酸在制备痔疮药物中的应用是本申请人首先发现，早期熊去氧胆酸主要用于治疗肝胆疾病，本发明进而发现了熊去氧胆酸在痔疮方面的用途，进一步扩大了熊去氧胆酸的应用范围。
2、熊去氧胆酸可以通过人工合成，该技术目前已经很成熟，因此，本发明药源丰富。
3、熊去氧胆酸在治疗痔疮疗效确切，安全低毒。
下面通过动物实验或临床实验进一步来证实熊去氧胆酸的新用途。
具体实施例方式共14只大鼠，被击头致昏，迅速取出胸主动脉，制备成保存内皮细胞的血管条标本，置于标本槽内，与张力换能器相连。标本槽容量1ml。灌流液从槽底部流入，顶部流出，流速2ml/min，液温控制于37℃左右，不断向灌流液中充入纯氧。
所有标本首先用Tyrode液灌流1小时左右，张力稳定后，被随机分为2组，分别以NE-Tyrode液或高K-Tyrode液灌流，引发平滑肌收缩，待稳定后，每隔20min左右，以递增浓度的3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸-Tyrode液灌注，熊去氧胆酸的浓度分别为0.125、0.25、0.5、1、2、4mg/ml，同时记录张力变化，所得数据进行t检验。
结果发现0.25mg/ml的熊去氧胆酸就可以完全的对抗，不管是NE还是高K导致的血管收缩。
这证实熊去氧胆酸对受体依赖性钙通道和电压依赖性钙通道均有拮抗作用。
熊去氧胆酸在角叉菜胶致大鼠肩胛区炎症为模型的研究中，被发现降低了PGE2的浓度，从而减轻了炎症反应。
共28只大鼠被分为4组，在乙醚麻醉下，将浸润10mg/ml角叉菜胶的灭菌乙烯海绵植入大鼠背部肩胛区皮下，12小时后分别给予局部皮下注射3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸0.25、0.5、1mg/ml或生理盐水各1ml。24小时后，处死大鼠，取出海绵，收集渗出液，稀释离心取上清液。经无水乙醇与甲醇处理后，用紫外分光光度计在278nm处，测光密度，求PGE2含量。
结果，发现用熊去氧胆酸处理，可以显著地降低渗出液中的PGE2含量，并且与熊去氧胆酸的浓度呈正相关。这证实，熊去氧胆酸可以通过抑制PGE2的作用控制炎症反应。
我们用相似的方法，以角叉菜胶致大鼠右后足肿胀为模型的研究发现熊去氧胆酸可以显著抑制角叉菜胶所致大鼠右后足肿胀。
熊去氧胆酸在体外药敏试验中被发现对所有试验菌株有杀菌作用。
熊去氧胆酸在以大鼠口腔黏膜化学性溃疡为模型的研究中被观察到创面愈合速度与安慰剂组有显著性差异。
共40只大鼠，被随机分为4组，乙醚麻醉下，用石炭酸棉片烧灼口腔黏膜30秒，致相同面积，相似深度的口腔黏膜溃疡，分别每日2次用3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸0.25、0.5、1mg/ml或生理盐水各1ml涂于创面，观察创面面积变化等指标，结果用卡方检验分析。
结果，发现用熊去氧胆酸处理与安慰剂组相比，可以显著或非常显著地加速溃疡修复的进程，中、高剂量组与低剂量组间有显著差异，而中剂量与高剂量组间没有显著性差异。
3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸在以大鼠肛门物理性擦伤为模型的研究中被观察到创面愈合速度与安慰剂组在12小时就有非常显著的差异。而50mg及以上的各剂量组愈合速度没有显著的差别。
共40只大鼠，被随机分为4组，乙醚麻醉下，用缠纱布的小棍往复转动6次，致相似面积，相似深度的肛门黏膜损伤，分别每日2次用熊去氧胆酸25、50、100mg与混合脂肪酸甘油脂制成的小栓剂，和用混合脂肪酸甘油脂制成的盲品的治疗。观察出血，分泌物，刺激肛门反应，一般情况等指标，结果用卡方检验分析。
结果，发现用熊去氧胆酸处理与安慰剂组相比，可以显著或非常显著地加速大鼠康复的进程，中、高剂量组与低剂量组间有显著差异，而中剂量与高剂量组间没有显著性差异。
3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸在以大鼠肛门物理性檫伤为模型的研究中同时观察到在12小时的大鼠肛门创疡病理切片出现去分化特征的细胞----干细胞特征的细胞。
共14只大鼠被乙醚麻醉下，用缠纱布的小棍往复转动6次，致相似面积，相似深度的肛门黏膜损伤，分别每日2次用熊去氧胆酸50mg与混合脂肪酸甘油脂制成的小栓剂治疗，每12小时处死一只大鼠，解剖肛门，观察创面面积，并制作两组创面病理切片，分别G或Rhodamine 123染色后油镜观察。
结果提示创面面积与大鼠反应有相关性。
令人意外的是在12小时与24小时的大鼠肛门创疡病理切片发现去分化特征的细胞，与干细胞特征的细胞。这提示，本发明涉及的化合物熊去氧胆酸可能通过原位干细胞化的作用，诱导再生性修复的启动。
熊去氧胆酸在初步的临床试验中被发现与动物研究相似的结果[试验例8][关键词]熊去氧胆酸；痔病新近，被广泛接受的肛垫下移学说认为痔病症状是损伤导致的，痔病脱出症状是反复损伤，Treitz韧带不能再生性修复导致的。熊去氧胆酸是胆烷酸类物质，最早从熊胆中提取，现在已经能够人工合成，此前被主要用于口服治疗肝胆疾病。我们的研究发现熊去氧胆酸可能通过启动再生性修复，以及维持创面修复的良好环境，促进组织修复。可能成为治疗痔病的有效药物。本研究观察熊去氧胆酸治疗一、二期痔病的疗效与安全性。
资料与方法[病例入组、排除标准]1、入选标准(1)、年龄在18-65岁之间(2)、确诊为痔病，一、二期；(3)、伴有损伤症状；(4)、本研究前10天内，未接受其他相关治疗；(5)、获得知情同意；痔病诊断标准(1)、主要症状A、便时肛门部出血，滴血或射血；B、便时或劳累后，痔脱出肛门外，能自行复位或需手法复位；C、便时肛门部不适，伴坠痛；(2)、视诊增加腹压时痔核变大，部分患者内痔脱出肛外；(3)、肛镜检查直肠下段齿线上区有隆起的半球形粘膜，充血、渗血或伴糜烂。(4)、以上三条凡符合第一条两点和2、3条中的一条即可诊断。痔病分期标准(按《痔诊治暂行标准》，中华医学会外科学分会肛肠外科学组2002.9修订)I期便时带血、滴血或喷射状出血，便后出血可自行停止。无痔脱出II期常有便血；排便时有痔脱出，便后可自行还纳；III期偶有便血；排便或久站、咳嗽、劳累、负重时痔脱出，需用手还纳；IV期偶有便血；痔脱出不能还纳。
2、排除标准(1)、妊娠及哺乳期妇女，(2)、既往对本品有过敏史者，(3)、其他肛门疾病患者(如肛瘘、肛周脓肿、肛裂、肛门恶性肿瘤等)，(4)、肠道感染性疾病。
3、剔除标准(1)、违反试验方案者，(2)、需加用其他药物，影响疗效评价者，(3)、撤销知情同意，(4)、因故未能完成试验，不能进行疗效和安全性评价者。
本研究采用随机双盲平行对照方法，共入选90位志愿者，随机分为2组熊去氧胆酸栓组45例，安慰剂组45例，分别接受熊去氧胆酸栓或安慰剂的治疗，每日肛门用药2次，连续治疗192小时或直到症状完全缓解(两种试剂均由成都大西南制药股份有限公司制造提供熊去氧胆酸含量是100mg)。治疗前、后，接受三大常规以及血生化全套检查，每日记录出血、疼痛、瘙痒、坠胀、分泌物、大便改变、难以表达的痛苦、其他不适感受的程度(4分法0分完全没有这种症状；1分有这种症状，但很轻微，经表格提示才注意到；2分症状明显，但不改善这种症状，也无所谓3分症状严重，希望尽快改善这种症状。)。
疗效判定标准1、完全缓解所有损伤症状均完全缓解；2、部分缓解仅有部分损伤症状缓解，但不影响工作、学习与生活；3、未缓解多数症状未缓解，而且给工作、学习与生活带来不便。
治疗中注意观察病人有无任何不适，对出现的不适主诉或检验异常应详细记录，必要时对症处理，并进行随访，设法分清不良反应与栓药的关系(5分法评定1、有关；2、可能有关；3、可能无关；4、无关；5、无法评定)，1、2项统计为不良反应。
计量资料统计方法选T检验，计数资料统计方法选卡方检验。
结果[两组疗效比较]由于7位志愿者在试验期间暂停了治疗，或接受了其他药物治疗，因此只有83位志愿者有评价的意义。如说明书附图中
图1，83位患者中，44位接受了试药的治疗，39位接受了安慰剂的治疗。显著性的差异在36小时已经出现，81.8％的治疗组患者在72小时痔病症状已经完全缓解，120小时后所有44位治疗组患者症状完全缓解。对照组在192小时仍有17.9％的志愿者症状没有完全缓解。
表1 治疗36小时完全缓解率的比较
X2＝5.216，P＝0.022＜0.05如表1所示，在治疗36小时，两组间显著性差异已经出现。
表2 治疗72小时完全缓解率的比较
X2＝28.740，P＝0.000＜0.01如表2所示，在治疗72小时，两组间有极显著性的差异。
两组志愿者均没有与试药相关或可能相关的不适主诉，以及恶化中的实验室指标异常。
讨论研究提示熊去氧胆酸不仅可以全面改善痔病损伤症状，而且可以缩短患者康复需要的时间，并且可能降低痔病进展的危险。这与基础研究是吻合的，即熊去氧胆酸通过启动再生性修复的作用，以及维持创面修复的良好环境，显著加快了组织修复的进程，从而全面地缓解痔病的损伤症状，并加速了痔病康复的进程，并防止了病情进展，降低需要手术的危险。在不良反应方面，没有与试药相关或可能相关的不适主诉，以及恶化中的实验室指标异常。这些都强烈提示熊去氧胆酸治疗痔病作用全面、起效迅速、降低痔病进展风险、并且安全，有可能成为痔病患者新的有益的选择。
权利要求
1.熊去氧胆酸在制备治疗痔疮药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了熊去氧胆酸的新用途，用熊去氧胆酸可以制备成治疗痔疮的药物，具有药源丰富、疗效确切，安全低毒的优点。
文档编号A61K31/575GK1704063SQ20041002262
公开日2005年12月7日 申请日期2004年5月28日 优先权日2004年5月28日
发明者高江河, 达晓玲 申请人:成都康弘科技实业(集团)有限公司