一种治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物及其制备方法

专利名称：一种治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物及其制备方法，具体地，是以中药材野菊花为原料制备而成的眼用药物组合物及其制备方法，属药物领域。
背景技术：
结膜炎是眼科的多发病，占结膜病的首位。其病因不外乎微生物性与非微生物性两大类。就微生物性而言，细菌、病毒、寄生虫等均可引起结膜炎症，而且来源甚为广泛，可直接来自外界，也可来自自身，而自身感染又可能通过血流或淋巴液转移至结膜(结核等)；或由邻近组织，如眼球本身(角膜、巩膜)、眼眶、鼻腔与副鼻窦、泪器、周围的眼睑皮肤直接蔓延而来。就非微生物病因而言，机械的、物理的(热、放射、电)、化学的、以至全身过敏状态和一些全身代谢性障碍(如风湿、痛风)皆可成为致病因素。总之，结膜炎的病因极其复杂，因此，一般通行的结膜炎临床分类也是多种多样的，有的从病因上分类(如过敏性结膜炎)，有的则以临床表现分类，按起病急缓、病程长短又可有急、慢性之分。不同病因有时可有同样的临床表现(如各种病因都可造成慢性卡他性结膜炎)，或同一病因有时又可引起不同的临床症状(如溶血性金黄色葡萄球菌感染时，可表现为急性卡他性结膜炎或假膜性结膜炎)，由于上述诸多原因，这就决定结膜炎的临床表现常常是多种多样、错综复杂的。本病属于中医“红眼”、“火眼”、“天行赤眼”、“目中赤痛”等范畴。
目前治疗结膜炎的药物主要为抗菌药，然而抗菌药的副作用很大，如氯霉素会造成再生障碍性贫血和灰婴综合症；红霉素有很强烈的胃肠道反应等。并且长期使用易产生耐药性。
野菊花是菊科植物野菊Chrysnathemum indicum的干燥头状花序或全草。味苦、性微寒、归肺、肝经。具有清热解毒之功效，主治痈疽疖疔、瘰疬、眼痛等症。药理研究对金黄色葡萄球菌、结核菌及卡介菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌均有明显的抑菌作用，水剂对大鼠静脉注入，对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用。临床作用对高脂血症、急性支气管炎、颈淋巴结核、流行性腮腺炎、口腔溃疡、菌痢、肠炎、前列腺炎、盆腔炎、肛窦炎、肛乳头炎等均有良好疗效。(见刘国应，野菊花的药理研究及临床应用进展，山东中医杂志，1990，9(6)；刘国立，野菊花的药理研究及临床应用概况，时珍国药研究，1991，2(3))目前，野菊花为原料的制剂有口服制剂，野菊花注射液，具有解表解毒。用于外感热病、目赤肿痛、器喉疼痛；上呼吸道感染、急性扁桃体炎属热毒上攻者。沈丽珍，菊花在眼科的临床应用，中国中医眼科杂志，2001，11(2)，报道了菊花(白菊、黄菊、野菊)，治疗外眼热性疾病，如急、慢性结膜炎，其中野菊多种于各种化学伤、热烧伤等热毒壅盛之疾病，但没有报道具体的药材提取方法，其具体的药效是不可预知的。虽然野菊花注射剂亦有报道用于眼科疾病，但由于原料提取方法不同，注射剂与滴眼液的质量要求不同，附加剂的选择不同，针对眼用环境的特殊性，不能将注射剂直接用于滴眼液，目前尚无野菊花为原料制备眼用制剂的报道，亦没有形成相关的产品的报道。

发明内容
本发明的解决方案是提供了一种治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法。
本发明提供了一种治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，它是由中药野菊花Chrysanthemum indicum L.的提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的眼用制剂，其中，每制剂单位中含总黄酮以芦丁C27H30O16计，不得少于0.5mg；每1ml含绿原酸C16H18O9应不得少于30μg。所述的每制剂单位是指液体制剂的每ml；固体制剂的每g。
其中，所述的野菊花提取物是由如下方法提取将野菊花加水，二次蒸馏，收集重蒸馏液；药渣加水煎煮，50％～80％乙醇精制，回收乙醇，与重蒸馏液混合，即为野菊花提取物。
所述的制剂是液体制剂、半固体制剂。
进一步地，所述的半固体制剂是眼膏剂、眼用膜剂、眼用凝胶剂。
进一步地，所述的液体制剂为滴眼液、缓释滴眼液。
其中，所述的液体制剂中每1ml含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计，不得少于0.5mg；每1ml含绿原酸(C16H18O9)应不得少于30μg。
其中，所述的液体制剂的pH值为7.0～7.4。
其中，所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料制备而成野菊花1200～800g、吐温80 8～3ml、甘油10～6ml、硼酸10～6g，余量为水。
进一步地，所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料制备而成野菊花1000g、吐温80 5ml、甘油8ml、硼酸8g，余量为水。
本发明还提供了该眼用药物组合物的制备方法，它包括如下步骤a、取药材野菊花Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序或全草，加水浸泡、用水蒸气蒸馏法经蒸馏、重蒸馏，收集重蒸馏液，剩余药渣；b、将a步骤的药渣加水煎煮，过滤，浓缩，加乙醇使含醇量为50％～80％，静置，过滤，回收乙醇，过滤，滤液备用；c、将a步骤的重蒸馏液与b步骤的滤液混合，加入药学上可接受的眼用制剂的辅料或辅助性成分制备而成的药学上常用的眼用制剂。
本发明眼用药物组合物，药物来源广泛，疗效确切，质量稳定可控，副作用小，有效提取成分不易产生耐药性，且通过药效学试验证明，采用本发明原料提取方法制备而成的眼用制剂比原注射剂在相同的原料用量下，药效明显优于原注射剂，且满足眼用制剂的质量要求，为临床提供了治疗急、慢性结膜炎的药物新选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施例方式
实施例1本发明药物滴眼液的制备一、原料野菊花1000g、吐温80 5ml、甘油8ml、硼酸8g、20％氢氧化钠适量配制1000ml二、制备工艺1、取野菊花1000g，加10量水浸泡1小时，水蒸汽蒸馏，收集初馏液1000ml，再重蒸馏，收集重蒸馏液500ml，备用；2、收集药渣中的煎煮液，滤过，药渣加8量水，煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.14～1.18(40～70℃)的清膏，加乙醇使含醇量达65％，冷藏，静置12小时；
3、滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.16～1.22(40～70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达85％，搅匀，冷藏放置20小时。滤过，滤液回收乙醇并浓缩至无醇味，加注射用水至500ml，冷藏12小时，滤过，滤液加热至80～90℃，加入0.3％活性炭，搅拌均匀，保持80～90℃30分钟；4、滤过，滤液用0.22μm精滤，加入吐温后加热至沸，冷至室温，加入重蒸馏液500ml，混匀，加入其余附加剂，用20％氢氧化钠调节PH至7.0～7.4，加注射用水至1000ml，0.22μm滤过，无菌灌装，即得。
上述制备工艺中，辅料的选择和pH值的范围是本发明制备方法的关键因素。
实验例2本发明药物滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量有变化野菊花1200g、吐温80 8ml、甘油10ml、20％氢氧化钠适量、硼酸10g；实验例3本发明药物滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量有变化野菊花800g、吐温80 3ml、20％氢氧化钠适量、硼酸6g；实验例4本发明药物滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量有变化野菊花1000g、吐温80 6ml、20％氢氧化钠适量、硼酸6g；实验例5本发明药物滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量有变化野菊花1000～800g、吐温80 5ml、甘油7ml、20％氢氧化钠适量、硼酸8g；实验例6本发明药物滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量和辅料有变化野菊花1000g、吐温20 7ml、十二烷基硫酸钠6ml、磷酸适量、硼酸7g；实验例7本发明药物滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量和辅料有变化野菊花1200～800g、十二烷基硫酸钠4ml、甘油9ml、20％氢氧化钠适量、氯化钠7g、杜灭芬0.8ml；实验例8本发明药物缓释滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量和辅料有变化野菊花1000g、卡波姆2.2g、羟丙甲基纤维素15.0g、磷酸氢二钠2.5g、磷酸二氢钠5.0g、氯化钠5.0g、尼泊金乙酯0.3g、1M氢氧化钠适量；
实验例9本发明药物缓释滴眼液的制备制备工艺同实施例1，只是用量和辅料有变化野菊花1000g；卡波姆5g、羟丙甲基纤维素10g、磷酸氢二钠2.5g、磷酸二氢钠2.5g、氯化钠3.0g、尼泊金乙酯0.3g、1M氢氧化钠适量；实验例10本发明药物眼用凝胶的制备制备工艺同实施例1，只是用量和辅料有变化野菊花1000g；玻璃酸钠5.2g、羟丙甲基纤维素10g、硼酸2.5g、氯化钠3.0g、尼泊金乙酯0.3g、1M氢氧化钠适量；苯乙醇1.5ml实验例11本发明药物眼用凝胶的制备制备工艺同实施例1，只是用量和辅料有变化野菊花1000g；玻璃酸钠5.2g、羟丙甲基纤维素10g、卡波姆3.5g；硼酸2.5g、氯化钠3.0g、尼泊金乙酯0.6g实验例12本发明药物眼用制剂中附加剂选择的实验依据附加剂的筛选依据1、助溶辅料的选择本品含挥发油，在水中溶解度小。为防止挥发油析出，参照野菊花注射剂原工艺进行了预试，选用0.5％聚山梨酯80增加挥发油的溶解度，增加制剂的稳定性。试验结果表明，其增溶效果较好。
2、pH调整剂的选择pH值对滴眼液有重要的影响。人体正常泪液的pH值为7.4，当pH值为6～8时无不舒适感受。确定滴眼液的pH值，主要从药物的溶解度、稳定性、刺激性等方面考虑。野菊花重蒸馏液的pH值常为4.0左右，必须添加适量碱性pH调节剂。常用的碱性pH调节剂有氢氧化钠(钾)溶液、枸橼酸钠溶液、磷酸盐缓冲液等。考虑到本品中含黄酮类成分，用氢氧化钠溶液调节pH可增加其溶解度，并参照野菊花注射剂原工艺，选用20％氢氧化钠溶液作为本品的pH调节剂，并对pH调节范围进行了选择。
pH值调节前后变化结果见表1。
表1本发明药物滴眼液pH值调节前后变化结果表 由上表可知，pH调节后，贮藏过程中pH值均有所下降，但不同的pH值对本发明药物滴眼液的稳定性影响较大，贮藏过程中指标成分和有效成分均有所下降，因调pH值至7.0～7.5时下降较小，6.0～6.5时药液澄明度较差，总黄酮含量下降也较多，结合稳定性和刺激性等方面进行考虑，选择调pH值至7.0～7.5较适宜。
3、抑菌剂的选择滴眼液是多剂量制剂，原则上需要加入抑菌剂。考虑到本品所含有效成分本身具有良好的抑菌效果，同时对常用的抑菌剂进行初步筛选，尼泊金类抑菌剂与本品中聚山梨酯80有配伍禁忌，苯扎溴铵与本品有配伍禁忌，山梨酸不稳定易氧化，而硫柳汞等则考虑其毒性较大。而硼酸水溶液，即有缓冲，增加主药溶解度，调节渗透压等作用。又有抑制细菌和霉菌作用，增加本品的疗效。故选用1％硼酸为本品的抑菌剂，并对其抑菌效果进行了考察。
试验方法取200g药材，按以上工艺操作，将药液加入注射用水至200ml，0.22μm微孔滤膜滤过；取100ml，加入10g硼酸，使溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，装入输液瓶中，不加盖，溶液暴露于空气中两小时后，封好瓶盖，振摇0.5小时后，按照《中国药典》2000版一部附录XIIIC微生物限度检查法检查细菌数、霉菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。实验结果见表2。
表2抑菌剂考察

结论本滴眼液加硼酸后的抑菌效果能够达到要求。且样品经过常温留样考察，微生物限度符合滴眼剂规定。
4、黏度调整剂的选择适当增加滴眼液的黏度，可使药物在眼内停留时间延长，有利于增强药物的疗效，同时黏度增加后亦可减少刺激性。照黏度测定法(《中国药典》2000年版二部附录VIG)第二法对滴眼液黏度进行测定，结果为4.0cPa·s。综合考虑，本品滴眼液具有较为合适的黏度，可不加增黏剂。
5、渗透压调整剂的选择滴眼剂的渗透压应与人的泪液(正常泪液的渗透压值为290m0sm·L)等渗。人眼通常可耐受的渗透压范围相当于0.8％～1.2％的氯化钠溶液，低于或高于此浓度均会产生不适感。
试验方法按制备工艺制成药液，测定渗透压。试验结果见表3。
表3渗透压考察

结论经测定0.8％～1.2％氯化钠溶液的渗透压为235～393mOsM，可见本品的渗透压在人正常限的耐受范围内，不需加渗透压调节剂。
上述附加剂的选择可知，本发明药物附加剂虽然是常规用眼用制剂辅料，但并非简单的组合，而是经过创造性的筛选、分析、比较，选择的附加剂及其用量均是不可预知的，附加剂的选择有效的保证的本发明药物的质量。
实施例12本发明药物的质量控制方法总黄酮照紫外分光光度法(中国药典2000版一部附录V)测定。
对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品200mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白。照分光光度法(附录VB)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法 取本品溶液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
本品每1ml含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计，不得少于0.5mg。
绿原酸照高效液相色谱法(《中国药典》二000年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(13∶87)为流动相；检测波长为327nm。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色容量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得(10℃以下保存)。
供试品溶液的制备取本品作为供试品。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1ml含绿原酸(C16H18O9)应不得少于30μg。
野菊花中主要含有总黄酮和绿原酸，绿原酸不稳定，仅以绿原酸为质量控制指标不能有效达到质量控制的目的，因此，同时选择总黄酮为质量控制的指标成分，总黄酮是野菊花中的主要活性成分，既达到质量控制的目的，其量的多少又直接反映了药物的药效。
以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物对家兔实验性金黄色葡萄球菌感染性结膜炎的治疗作用试验材料1、试验药物(1)受试药物本发明药物滴眼液，5mL/支，药物浓度分别为2g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材2g)，批号040704；1g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材1g)，批号040703；0.5g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材0.5g)，批号040705。以上本发明药物滴眼液各个浓度药液由实施例1的方法制备，1g生药/mL本发明药物滴眼液为临床剂量。
野菊花注射液1g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材1g)，由雅安三九药业有限公司提供，批号040301。
(2)阳性对照药物氯霉素滴眼液。8mL(20mg)/支。由四川泰华堂制药有限公司生产，批号040212。
2、细菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923，浓度为1×108个菌/mL。由成都中医药大学微生物学教研室进行细菌培养、制备和提供。
3、动物家兔，红眼，白毛，一级，体重1.95～2.25kg，雌雄兼用。由四川省实验动物专委会养殖场提供，动物合格证号川实动管质2004-14。
4、试验方法(1)结膜炎模型的复制方法按照文献介绍的方法，对家兔双眼的下眼脸与球结膜交界处注射金黄色葡萄球菌的混悬液(浓度为1×108个菌/mL)0.1mL/眼，造成金黄色葡萄球菌感染性结膜炎模型；(2)分组与药物剂量注射金黄色葡萄球菌造成结膜炎模型24小时后(第2天)根据病情轻重程度将家兔40只按性别均匀搭配分成8组，每组5只(雌雄兼用)共10只眼用于实验。分别作为①正常对照组生理盐水等体积滴眼；②模型对照组生理盐水等体积滴眼；③氯霉素滴眼液(阳性对照药物)组0.24mg/kg(浓度为2.5mg/mL，两眼滴药，24μL/眼/次，4次/天)；④～⑥本发明药物滴眼液高、中、低三种剂量组0.192、0.096、0.048g生药/kg(两眼滴药，24μL/眼/次，4次/天。)；⑦～⑧原剂型野菊花注射液高、低剂量组0.096、0.048g生药/kg(两眼滴药，24μL/眼/次，高剂量4次/天，低剂量2次/天。)。
(3)给药途经与方法在注射金黄色葡萄球菌造成结膜炎模型24小时后(第2天)根据病情轻重程度均匀分组，然后开始用生理盐水、本发明药物滴眼液、原剂型野菊花注射液和氯霉素滴眼液滴眼，连续7日。
(4).观察指标每天上午第1次滴眼药液之前，先按眼刺激综合评分标准进行观察和记录结膜炎程度后再分别给予滴眼液。
结膜炎程度分级评分标准①充血血管正常0分；血管充血呈鲜红色1分；血管充血呈深红色，血管不易分辨2分；弥漫性充血呈紫红色3分。
②水肿无水肿0分；轻微水肿1分；明显水肿，伴有部分眼睑外翻2分；水肿至眼睑近半闭合3分；水肿至眼睑超过半闭合4分。
③分泌物无分泌物0分；少量分泌物1分；分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着2分；分泌物使整个眼区和睫毛潮湿或粘着3分。
(5)计学方法数据用x±S表示，两组之间的比较用Dunnett t检验。
(6)试验结果结果见表4，从表4及试验中可见，对家兔两只眼睛的下眼脸与球结膜交界处注射金黄色葡萄球菌的混悬液(浓度为1×108个菌/mL)0.1mL/眼，造成金黄色葡萄球菌感染性结膜炎模型。致炎24小时后，可见球结膜和睑结膜弥漫性充血呈紫红色，水肿异常严重(模型对照组7天后与正常对照组比较病变仍明显)，眼睛充血，炎症分泌物多(尤其感染后1～3天)。本发明药物滴眼液及阳性对照药物氯霉素滴眼液具有显著的治疗作用。本发明药物滴眼液高剂量组(0.192g生药/kg)治疗3天后即可使结膜炎充血、水肿、分泌物等症状显著减轻(P＜0.05)；本发明药物滴眼液中(临床剂量)、低剂量组(0.096、0.048g生药/kg)和原剂型野菊花注射液(0.096、0.048g生药/kg)治疗5天后可使结膜炎充血、水肿、分泌物等症状显著减轻(P＜0.05)。说明本发明药物滴眼液与原剂型注射液对金黄色葡萄球菌感染所致家兔结膜炎均具有治疗作用，治疗7天后可治愈(与正常对照组比较，P＞0.05)。
实验例2本发明药物滴眼液对家兔病毒性结膜炎的作用1、试验材料(1)受试药物本发明药物滴眼液，5mL/支，药物浓度分别为2g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材2g)，批号040704；1g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材1g)，批号040703；0.5g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材0.5g)，批号040705。以上本发明药物滴眼液各个浓度药液由实施例1的方法制备，1g生药/mL本发明药物滴眼液为临床剂量。
野菊花注射液1g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材1g)，批号040301，由雅安三九药业有限公司提供。
(2)阳性对照药物阿昔洛韦滴眼液，8ml∶8mg，本品为无色的澄明液体。批号20030509，由湖北潜江制药厂生产。
(3).病毒株单纯疱疹病毒I型(HSV-I)，TCID50为10-9，由北京药品生物制品检定所提供。
(4)动物家兔，红眼，白毛，一级，体重2.25～2.50kg，雌雄兼用。由四川省实验动物专委会养殖场提供，动物合格证号川实动管质2004-14。
2、试验方法(1)结膜炎模型的复制方法按照文献介绍的方法，对家兔两只眼的下眼脸与球结膜交界处注射单纯疱疹病毒I型的混悬液(TCID50为10-9)0.1mL/眼，造成感染性单纯疱疹病毒I型结膜炎模型。
(2)分组与药物剂量在注射单纯疱疹病毒I型造成结膜炎模型24小时后(第2天)根据病情轻重程度将家兔40只按性别均匀搭配分成8组，每组5只(雌雄兼用)共10只眼用于实验。分别作为①正常对照组生理盐水等体积滴眼；②模型对照组生理盐水等体积滴眼；③阿昔洛韦滴眼液(阳性对照药物)组0.096mg/kg(浓度为1mg/mL，两眼滴药，24μL/眼/次，4次/天)；④～⑥本发明药物滴眼液高、中、低三种剂量组0.192、0.096、0.048g生药/kg(两眼滴药，24μL/眼/次，4次/天。)；⑦～⑧原剂型野菊花注射液高、低剂量组0.096、0.048g生药/kg(两眼滴药，24μL/眼/次，高剂量4次/天，低剂量2次/天。)。
(3)给药途经与方法在注射单纯疱疹病毒I型造成结膜炎模型24小时后(第2天)根据病情轻重程度均匀搭配分组，然后开始用生理盐水、本发明药物滴眼液、原剂型野菊花注射液和阿昔洛韦滴眼液滴眼，连续7日。
(4).观察指标每天上午第1次滴眼药水之前，先按综合评分方法观察和记录结膜炎症程度分值后再分别滴眼药液。
结膜炎程度分级评分标准①充血血管正常0分；血管充血呈鲜红色1分；血管充血呈深红色，血管不易分辨2分；弥漫性充血呈紫红色3分。
②水肿无水肿0分；轻微水肿1分；明显水肿，伴有部分眼睑外翻2分；水肿至眼睑近半闭合3分；水肿至眼睑超过半闭合4分。
③分泌物无分泌物0分；少量分泌物1分；分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着2分；分泌物使整个眼区和睫毛潮湿或粘着3分。
(5)统计学方法数据用x±S表示，两组之间的比较用Dunnett t检验。
(6)试验结果结果见表5，从表5及试验中可见，对家兔两只眼睛的下眼脸与球结膜交界处注射单纯疱疹病毒I型的混悬液(TCID50为10-9)0.1mL/眼，造成单纯疱疹病毒I型感染性结膜炎模型。致炎24小时后，可见眼结膜充血，炎性分泌物多(尤其治疗3～5天)。本发明药物滴眼液及阳性对照药物阿昔洛韦滴眼液具有显著的治疗作用。本发明药物滴眼液高、中剂量(临床剂量)组(0.192、0.096g生药/kg)治疗5天后即可使结膜炎充血、水肿、分泌物等症状显著减轻(p＜0.05)；而原剂型野菊花注射液对单纯疱疹病毒I型感染性家兔结膜炎模型无治疗作用(p＞0.05)。说明在治疗单纯疱疹病毒I型感染所致家兔结膜炎上，本发明药物滴眼液优于原剂型野菊花注射液。
实验例3本发明药物滴眼液对家兔非细菌性结膜炎的作用1、试验材料(1)受试药物本发明药物滴眼液，5mL/支，药物浓度分别为2g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材2g)，批号040704；1g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材1g)，批号040703；0.5g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材0.5g)，批号040705。以上本发明药物滴眼液各个浓度药液均由实施例1的方法制备，1g生药/mL本发明药物滴眼液为临床剂量。
野菊花注射液1g生药/mL(每mL相当于含野菊花原生药材1g)，由雅安三九药业有限公司提供，批号040301。
(2)阳性对照药物氯霉素滴眼液。8mL(20mg)/支。由四川泰华堂制药有限公司生产，批号040212。
(3)致炎剂巴豆油，由成都中医药大学炮制教研室提供，巴豆油与菜油按1∶20稀释，备用。
(4)动物家兔，一级，体重1.90～2.20kg，雌雄兼用。由四川省实验动物专委会养殖场提供，动物合格证号川实动管质2004-14。
2、试验方法(1).结膜炎模型的复制方法按照文献介绍的方法，实验时每只家兔左右眼结膜囊内分别滴入巴豆油0.05ml(巴豆油以菜油按1∶20稀释)，闭合眼睑，轻轻按摩10秒钟，致炎。造成巴豆油性结膜炎模型。
(2)分组与药物剂量在巴豆油造成结膜炎模型后30分钟，根据病情轻重程度将家兔40只按性别、炎症程度均匀搭配分成8组，每组5只(雌雄兼用)共10只眼用于实验。分别作为①正常对照组生理盐水等体积滴眼；②模型对照组生理盐水等体积滴眼；③氯霉素滴眼液(阳性对照药物)组0.24mg/kg(浓度为2.5mg/mL，两眼滴药，24μL/眼/次，4次/天)；④～⑥本发明药物滴眼液高、中、低三种剂量组0.192、0.096、0.048g生药/kg(两眼滴药，24μL/眼/次，4次/天。)；⑦～⑧原剂型野菊花注射液高、低剂量组0.096、0.048g生药/kg(两眼滴药，24μL/眼/次，高剂量4次/天，低剂量2次/天。)。
(3).给药途经与方法在巴豆油造成结膜炎模型后30分钟，根据病情轻重程度将家兔均匀分组，分别用生理盐水、本发明药物滴眼液、氯霉素滴眼液和原剂型野菊花注射液滴眼。
(4)观察指标于第一次给药后1小时、2小时、4小时、8小时、24小时、48小时检查和记录结膜炎症程度并评分。
结膜炎程度分级评分标准①充血血管正常0分；血管充血呈鲜红色1分；血管充血呈深红色，血管不易分辨2分；弥漫性充血呈紫红色3分。
②水肿无水肿0分；轻微水肿1分；明显水肿，伴有部分眼睑外翻2分；水肿至眼睑近半闭合3分；水肿至眼睑超过半闭合4分。
③分泌物无分泌物0分；少量分泌物1分；分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着2分；分泌物使整个眼区和睫毛潮湿或粘着3分。
(5)统计学方法数据用x±S表示，两组之间的比较用Dunnett t检验。
(6)试验结果评分结果见表6表6结果显示，在巴豆油造成结膜炎模型30分钟后，可见眼睛充血、水肿严重，分泌物多，以本发明药物滴眼液(0.192g生药/kg、0.096g生药/kg、0.048g生药/kg)和原剂型野菊花注射液(0.096g生药/kg、0.048g生药/kg)治疗1小时后，与模型组比较，即可见充血、水肿症状明显减轻，分泌物减少。说明本发明药物滴眼液及原剂型野菊花注射液对巴豆油所致的家兔非细菌性结膜炎均有明显的抑制作用(P＜0.05)。本发明药物滴眼液临床剂量治疗后48h，基本治愈，与正常对照组相比较，P＞0.05，而原剂型野菊花注射液组与正常对照组相比较，仍有差异，P＜0.05，说明治疗巴豆油所引起的家兔结膜炎，本发明药物滴眼液比原剂型野菊花注射液优。
上述药效学试验说明本发明药物滴眼液对于治疗急、慢性结膜炎有如下作用(一)对家兔实验性金黄色葡萄球菌感染性结膜炎的治疗作用在对家兔实验性金黄色葡萄球菌感染性结膜炎的治疗作用试验中，本发明药物滴眼液高剂量组(0.192g生药/kg)治疗3天后即可使结膜炎充血、水肿、分泌物等症状显著减轻(P＜0.05)；本发明药物滴眼液中(临床剂量)、低剂量组(0.096、0.048g生药/kg)和原剂型野菊花注射液(0.096、0.048g生药/kg)治疗5天后可使结膜炎充血、水肿、分泌物等症状显著减轻(P＜0.05)。且治疗7天后可治愈(与正常对照组比较，P＞0.05)。说明本发明药物滴眼液与原剂型注射液对金黄色葡萄球菌感染所致家兔结膜炎均具有治疗作用。
(二)本发明药物滴眼液对家兔病毒性结膜炎的作用在本发明药物滴眼液对家兔病毒性结膜炎的作用试验中，本发明药物滴眼液高、中剂量(临床剂量)组(0.192、0.096g生药/kg)治疗5天后即可使结膜炎充血、水肿、分泌物等症状显著减轻(p＜0.05)；而原剂型野菊花注射液对单纯疱疹病毒I型感染性家兔结膜炎模型无治疗作用(p＞0.05)。说明在治疗单纯疱疹病毒I型感染所致家兔结膜炎上，本发明药物滴眼液优于野菊花注射液。
(三)本发明药物滴眼液对家兔非细菌性结膜炎的作用在对家兔非细菌性结膜炎的作用试验中，以本发明药物滴眼液(0.192g生药/kg、0.096g生药/kg、0.048g生药/kg)和原剂型野菊花注射液(0.096g生药/kg、0.048g生药/kg)治疗1小时后，与模型组比较，即可见充血、水肿症状明显减轻，分泌物减少。说明本发明药物滴眼液及原剂型野菊花注射液对巴豆油所致的家兔非细菌性结膜炎均有明显的抑制作用(P＜0.05)。另外，在以本发明药物滴眼液0.192g生药/kg治疗后24h，结膜炎基本治愈，与正常对照组相比较，P＞0.05；本发明药物滴眼液0.096g生药/kg(临床剂量)治疗后48h，基本治愈，与正常对照组相比较，P＞0.05，而原剂型野菊花注射液组与正常对照组相比较，仍有差异，P＜0.05，说明治疗巴豆油所引起的家兔结膜炎，本发明药物滴眼液比原剂型野菊花注射液优。
上述药效学试验说明，在相同的原料用量下，本发明药物滴眼液的药效明显优于野菊花注射液，该效果的产生，并非是仅仅由于剂型的改变而产生的，它是由原料提取方法不同引起的，对本领域技术人员来说，并非是显而易见地，可推知的，因此，本发明眼用制剂为临床提供了一种新的选择。
表4本发明药物滴眼液对金黄色葡萄球菌感染所致家兔结膜炎的治疗作用(综合评分x±S N＝10只眼)

注与模型对照组比较，*P＜0.05；与正常对照组比较，△P＜0.05
表5本发明药物滴眼液对单纯疱疹病毒I型感染所致家兔结膜炎的治疗作用(综合评分x±S N＝10只眼)

注与模型对照组比较，*P＜0.05；与正常对照组比较，△P＜0.05
表6本发明药物滴眼液对巴豆油所致家兔急性结膜炎的影响(x±S N＝10只眼)

注与模型组比较，*P＜0.05，与正常对照组比较△P＜0.0权利要求
1.一种治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于它是由中药野菊花Chrysanthemum indicum L.的提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的眼用制剂，其中，每制剂单位中含总黄酮以芦丁C27H30O16计，不得少于0.5mg；每1ml含绿原酸C16H18O9应不得少于30μg。
2.根据权利要求1所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的野菊花提取物是由如下方法提取将野菊花加水，二次蒸馏，收集重蒸馏液；药渣加水煎煮、50％～80％乙醇精制，回收乙醇，与重蒸馏液混合，即为野菊花提取物。
3.根据权利要求1或2所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的制剂是液体制剂、半固体制剂。
4.根据权利要求3所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的半固体制剂是眼膏剂、眼用膜剂、眼用凝胶剂。
5.根据权利要求3所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的液体制剂为滴眼液、缓释滴眼液。
6.根据权利要求5所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的液体制剂中每1ml含总黄酮以芦丁C27H30O16计，不得少于0.5mg；每1ml含绿原酸C16H18O9应不得少于30μg。
7.根据权利要求5或6所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的液体制剂的pH值为7.0～7.4。
8.根据权利要求7所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料药材及辅料制备而成野菊花1200～800g、吐温808～3ml、甘油10～6ml、硼酸10～6g，余量为水。
9.根据权利要求8所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，其特征在于所述的滴眼液每1000ml是由下述配比的原料药材及辅料制备而成野菊花1000g、吐温805ml、甘油8ml、硼酸8g，余量为水。
10.一种制备权利要求1所述的治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物的方法，它包括如下步骤a、取药材野菊花Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序或全草，加水浸泡、用水蒸气蒸馏法经蒸馏、重蒸馏，收集重蒸馏液，剩余药渣；b、将a步骤的药渣加水煎煮，过滤，浓缩，加乙醇使含醇量为50％～80％，静置，过滤，回收乙醇，过滤，滤液备用；c、将a步骤的重蒸馏液与b步骤的滤液混合，加入药学上可接受的眼用制剂的辅料或辅助性成分制备而成的药学上常用的眼用制剂。
全文摘要
本发明提供了一种治疗急、慢性结膜炎的眼用药物组合物，具体地，它是由中药野菊花Chrysanthemum indicum L.的提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的眼用制剂，本发明还提供了该药物组合物的制备方法。本发明眼用药物组合物，药物来源广泛，疗效确切，质量稳定可控，副作用小，有效提取成分不易产生耐药性。
文档编号A61K9/08GK1813843SQ20051002028
公开日2006年8月9日 申请日期2005年1月31日 优先权日2005年1月31日
发明者阳向波, 谢永平, 张媛 申请人:成都三明药物研究所